梅毒特异性IgM抗体免疫印迹试剂盒及其制备方法，涉及一种试剂盒。试剂盒设载体板、硝酸纤维膜、梅毒特异性IgM抗体检测线、对照线，硝酸纤维膜粘贴在载体板上表面，检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgM抗体检测线处包被梅毒特异性重组抗原，在对照线处包被人IgM抗体。先制备梅毒特异性重组抗原，再硝酸纤维素膜的点样，然后制备抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体，在标记抗人IgM特异性片段μ链的辣根过氧化物酶后制备免疫印迹试剂盒。可用于全血、血清、血浆及脑脊液等标本中梅毒特异性IgM抗体的检测。所需标本量极小，不需特殊仪器，检测简便快速，特异性强，灵敏度高，准确可靠，成本低。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种试剂盒，尤其是涉及一种梅毒特异性IgM抗体检测免疫印迹试剂 盒及其制备方法。
技术介绍
梅毒(Syphilis)是一种由梅毒螺旋体(Tr印onema pallidum, TP)引起的性传播 性疾病，其病原体是梅毒螺旋体，属螺旋体科。梅毒螺旋体主要通过性接触、输血、创口或者 胎盘等途径传播。梅毒螺旋体从感染区附近的淋巴结进入血液，播散全身，使机体几乎所有 的组织及器官受累，临床表现为全身性，可分为不同临床阶段，包括一期、二期、三期和潜伏 期。世界卫生组织(WHO)曾乐观地预言“由于有高敏度检测方法和高效的治疗方案，梅毒 是一种能够通过公共卫生措施得到成功控制的性传播性疾病”。遗憾的是，至今梅毒依然是 世界范围的公共卫生问题，缺乏有效的行政控制措施，每年全球大约有1200万的患者，其 中60万孕妇患者(林丽蓉，杨波，潘锡涛，等.潜在的血源传播患者梅毒血清学检测方 法的选择中华医院感染学杂志.2010,20(10) :1491-1494)。事实上，梅毒的感染现状可能 要比想象中的更让人悲观。调查发现，梅毒感染者已经较广泛地存在于普通人群中。梅毒螺旋体尚不能进行体外培养，梅毒诊断与流行病学调查主要依赖于血清学试 验，包括特异性抗体和反应素检测两大类型。梅毒特异性抗体IgM(TP-IgM)和IgG(TP-IgG) 抗体分别于2周和4周后产生，即使患者经过足够治疗，其仍能长期存在，甚至终身不消 失(林丽蓉，但冰，付左根，等.潜在血源传播患者梅毒血清学TRUST/TPPA与IgM抗体 联合检测.中国皮肤性病学杂志.2010，152 (0 =446-448)；而另一种抗体物质反应素产 生较晚，一般在受感染后5 7周产生，而且晚期梅毒、梅毒治疗后期以及潜伏梅毒可能 阴性，因此梅毒特异性抗体的阳性率、敏感性显著高于反应素。TP-IgM是梅毒感染后，机 体最先出现的特异性抗体。只要有活的梅毒螺旋体存在，其TP-IgM将会维持在一定的水 平。Martina H 等(Martina H, Daan W N, Mart Μ, et al. Comparison of a Treponema pallidum IgM immunoblot with a 19Sfluorescent treponemal antibody absorption test for the diagnosis of congenital syphilis. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 2007, 59 :61-66.)认为TP-IgM是梅毒早期感染并活动的一项血清学 标志，李步荣等(李步荣，贺军涛，张毅，等.梅毒螺旋体IgM抗体检测的临床意义. 第四军医大学学报，2007，观(16) :1495-1497)认为TP-IgM与TP-DNA—样，代表着梅毒传 染性指标。在排除近期抗梅毒治疗的前提下，TP-IgM若不转阴，提示体内可能残存梅毒螺 旋体或治疗不彻底。TP-IgM阴转者随访时再转阳性，表明再次感染梅毒(RaWstr0n SA, Mehta S,Bromberg K,et al. Evaluation of a Treponema pallidum2specific IgMenzyme immunoassay and Treponema pallidum western blot antibody detection in the diagnosisofmaternal and congenital syphilis. Sex Transm Dis，2004，31 (2) 123-1 )。尽管TP-IgM阴性不能完全排除传染性，但TP-IgM阳性必定提示该患者具有传染性。TP-IgG的出现要迟于IgM，能长期存在，甚至终身不消失，因此，TP-IgG是梅毒诊断和流 行病学调查的一项重要指标(Li-Rong Lin, Zuo-Gen Fu,Bing Dan，et al. Development of a colloidalgold-immunochromatography assay to detect Immunoglobulin G Antibodies to Treponemapallidum with TPN17 and TPN47. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease，2010，68 :193-200.)。早期的血清学方法使用完整梅毒螺旋体作为抗原，研究和诊断用的TP是以TP感 染兔睾丸获得，这种方法存在花费大、获得的TP量少且不纯(混有宿主蛋白)、与其他病原 体存在交叉反应等缺点，因此假阳性也时有发生。随着分子生物学技术的普及及梅毒螺旋 体抗原的相继克隆，将重组抗原应用于梅毒实验已经越来越多。目前研究比较多的TP抗 原有 TPNl7、TPN47、TPNl5、TPN44. 5、TPN36、TP0453、TP0684 及 TPr 家族。采用重组 DNA 技 术制备的重组抗原可以克服完整TP抗原的缺点，能快速、经济地制备无限量特异重组TP抗 原。梅毒特异性IgM抗体检测方法包括梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)、 酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)及免疫印迹技术 (Western-Blot)等，其特异性均较高。一般地，TPPA，ELISA作为临床初筛，当血清学阳性， 或临床诊断有困难时，需要采用FTA-ABS &Wfestern-bl0t作为确认试验。其中，FTA-ABS需 要荧光显微镜，而且其结果判断需要训练有素和较丰富经验的专业人员才能完成，因此，其 应用推广受到一定的限制。采用Western-blot方法制成的试剂盒，一般常规实验室均可完 成，不需要特殊设备，判读也简单明了。现市售的ffestern-blot试剂均为进口试剂，价格昂虫贝ο
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种。本专利技术所述梅毒特异性IgM抗体免疫印迹试剂盒设有载体板、硝酸纤维膜(NC 膜)、梅毒特异性IgM抗体检测线、对照线，硝酸纤维膜粘贴在载体板上表面，梅毒特异性 IgM抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgM抗体检测线处包被梅 毒特异性重组抗原，在对照线处包被人IgM抗体。所述梅毒特异性重组抗原可为TPm5、TPm7、TPN37、TPN44. 5、TPN47。所述载体板可采用PVC板。所述梅毒特异性IgM抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，包括以下步骤1)制备梅毒特异性重组抗原采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其 表达，得梅毒特异性重组抗原；2)硝酸纤维素膜的点样在硝酸纤维素膜IgM检测线上包被梅毒特异性重组抗原，在对照线处包被人IgM 抗体，晾干；3)制备抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体以人IgM特异性片段μ链为抗原免疫小鼠(或兔)，通过杂交瘤技术，筛选获得稳 定分泌抗人IgM单克隆抗体的杂交瘤细胞株；4)抗人IgM特异性片段μ链的辣根过氧化物酶(HRP)标记采用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记；5本文档来自技高网...
【技术保护点】
梅毒特异性ＩｇＭ抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于设有载体板、硝酸纤维膜、梅毒特异性ＩｇＭ抗体检测线、对照线，硝酸纤维膜粘贴在载体板上表面，梅毒特异性ＩｇＭ抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性ＩｇＭ抗体检测线处包被梅毒特异性重组抗原，在对照线处包被人ＩｇＭ抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨天赐，林丽蓉，刘莉莉，张忠英，
申请(专利权)人：厦门大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：92
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