高密度脂蛋白及其载脂蛋白用作抗包膜病毒病药物的用途制造技术

本发明专利技术公开了高密度脂蛋白及其载脂蛋白用作治疗包膜病毒所致疾病药物的用途，将以超速离心法、盐析法沉淀、有机溶剂沉淀、聚合物沉淀、柱层析法等方法从人或动物血浆中提取制备的高密度脂蛋白（ＨＤＬ）及载脂蛋白制成水针剂或冻干粉剂，以及用生物工程技术制备的高密度脂蛋白及其载脂蛋白，制成水针剂或冻干剂用于治疗包膜病毒感染引起的流行性感冒，包括禽流感传染人、ＳＡＲＳ、艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎、流行性乙型脑炎、单纯疱疹病毒感染、带状疱疹、麻疹、巨细胞病毒感染等传染病，可以部分或全部杀灭感染者体内病毒，使疾病得到部分治愈或完全治愈。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及高密度脂蛋白及其载脂蛋白的新医药用途，公开了高密度脂蛋白及其载脂蛋白用于制备治疗包膜病毒所致疾病药物的用途。属于生物制药

技术介绍
本专利技术涉及的高密度脂蛋白(简称HDL)是人和动物血浆中的成分，HDL的载脂蛋白包括ApoA、ApoC、ApoE等，主要为ApoA。HDL与动脉粥样硬化呈负相关，可用于治疗动脉粥样硬化所致疾病。医学领域认为包膜病毒包括流感病毒(含禽流感病毒)、SARS冠状病毒、艾滋病毒、乙型肝炎病毒、狂犬病毒等具有包膜结构的病毒，可致人或动物流行性感冒(含禽流感病毒感染人)、SARS、艾滋病、狂犬病等疾病。经检索未见HDL及其载脂蛋白用作治疗包膜病毒所致疾病的文献报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于公开了高密度脂蛋白及其载脂蛋白用于制备治疗包膜病毒所致疾病药物的用途。本专利技术将以超速离心法、盐析法沉淀、有机溶剂沉淀、聚合物沉淀、柱层析法等方法从人(或动物)血浆中提取制备的高密度脂蛋白(HDL)及载脂蛋白制成水针剂或冻干粉剂，以及用生物工程技术制备的高密度脂蛋白及其载脂蛋白，制成水针剂或冻干剂用于治疗包膜病毒感染引起的流行性感冒、禽流感病毒感染人、SARS、艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎、流行性乙型脑炎、单纯疱疹病毒感染、带状疱疹、麻疹、巨细胞病毒感染、T淋巴细胞白血病病毒感染等病毒病，可以部分或全部杀灭感染者体内病毒，使疾病得到部分治愈或完全治愈。现有治疗病毒性疾病的药物，主要针对病毒复制周期的不同环节设计，其抑杀病毒的作用有限，加上多具有较大的毒性，更限制了其用量，所以都很难达到彻底杀灭体内病毒、治愈疾病的目的。我们专利技术的HDL及其载脂蛋白，其抗病毒作用的靶点不同于现有抗病毒药物，作用靶点是病毒的包膜，不易产生耐药性，对人体没有毒性，量效关系也很好，可成为彻底治愈包膜病毒所致疾病的药物。本专利技术可以纯化的形式与药学上适当的载体一起被使用。一般，这些载体包括水或醇/水溶液、乳剂或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。非肠道载体包括氯化钠溶液、林格(Ringer’s)葡萄糖、葡萄糖和氯化钠以及乳酸林格氏溶液。本专利技术可用作单独施用的组合物，或用作与其它药物联合施用的组合物。根据本专利技术的药物组合物的给药途径可以是本领域普通技术人员普遍知道的任何一种。可以通过任何适当的方式给药，包括非肠道、静脉内、肌内、腹腔内给药，或者也可以通过用导管直接灌注给药。给药的剂量和频率依据年龄、性别、病人状态、同时服用其它药物、不良反应和临床医师考虑到的其它因素而定。本专利技术药物对于包膜病毒的抑制和杀灭作用通过以下细胞学实验证实高密度脂蛋白抗病毒作用研究一、材料1.细胞人羊膜细胞(FL)、人宫颈癌细胞(Hela)、原代鸡胚细胞、猴肾细胞、驴胎肺细胞，均由白求恩医科大学微生物室和哈尔滨兽医研究所病毒室保存。2.病毒麻疹病毒、鸡痘病毒、狂犬病毒、流感病毒、单纯疱诊病毒I型、冠状病毒和马传贫病毒，分别由为白求恩医科大学微生物室、解放军兽医大学研究所病毒室、哈尔滨兽医研究所病毒室提供。3.药物高密度脂蛋白为冻干粉针剂，12.58mg/支由长春市中心血站制备。4.培养IMDM美国产品，胰蛋白酶日本进口。二、方法1.HDL对细胞保护作用实验将上述五种细胞形成单层后弃去培养液，加HDL作用18h，吸出药液加入病毒液，每种病毒做三复孔，按一般病毒吸附时间，均采用37℃5％CO2，恒温箱培养48-96h，待病毒对照孔病变达+++～++++时，细胞对照正常时测结果。2.HDL抗病毒作用环节实验 分组实验经初筛有意义的病毒分四组进行实验，目的探讨HDL的具体作用环节。I组感染前24h给HDL，吸出药液，用Hank’s液洗3遍，加入病毒液。II组感染后给药。先加病毒液，置37℃吸附1h，洗去病毒，加含HDL的维持液。III组HDL与病毒液同时加入细胞层。IV组HDL与病毒液混合后，置37℃作用2h在细胞外，然后再加入细胞培养层。以上均设有正常对照及相应病毒对照。4.结果测定1)在光学显微镜下观察细胞病变(CPE)；2)染料摄入法根据细胞病变有脱落特征，采用存留细胞结晶紫染色，使用分光光度计以波长540nm测定OD值；3)HDL对组织培养细胞保护率计算 三、结果1.HDL对细胞保护实验结果利用光镜观察细胞病变，结果表明HDL可不同程度地抑制HSV-1，流感病毒，鸡痘病毒，麻疹病毒，狂犬病毒、冠状病毒、马传贫病毒对细胞的致病变作用。详见表1。表1HDL对病毒致细胞病变的影响结果 ++++病变程度最严重-无细胞病变 2.HDL抗病毒作用环节实验结果结晶紫染色测定结果在镜下观察细胞病变基础上，用结晶紫染色测OD值，以便客观地反映加HDL与不加HDL之差别。I组实验目的是观察HDL能否进入或吸附细胞表面以阻止病毒的吸附和进入。结果表明此法对HSV-1、麻疹病毒、流感病毒、冠状病毒、马传贫病毒有意义，即能阻止病毒的吸附和进入。II组实验目的是观察HDL能否对进入细胞内的病毒起作用，抑制其生物合成及成熟释放。结果表明此法对上述七种病毒均有意义。III、IV组为药物与病毒在不同条件下作用观察HDL对病毒的直接灭活作用，结果表明，此法对麻疹病毒、流感病毒、狂犬病毒、HSV-1、冠状病毒、马传贫病毒均有灭活作用。说明无论是HDL与病毒同时加入细胞层或是HDL与病毒先作用1h再加入细胞层，HDL均能发挥其抗病毒效应。四、讨论上述试验结果说明HDL对有包膜的病毒具有多途径抑制、灭活作用，即对病毒的作用方式是胞内外均能灭活。在另外的相同条件下的实验看到，HDL制剂多脊髓灰质炎病毒(pv)和柯萨奇B3病毒(CB3V)等无包膜无抑制和杀灭作用，说明HDL对病毒作用的靶点是病毒的包膜。HDL对病毒的作用有明确的选择性，故HDL成为一种抗包膜病毒有效药物前景乐观。本专利技术药物用于治疗包膜病毒所致疾病效果通过以下的药效学动物实验得到证实以鼠逆转录病毒模型观察HDL抗HIV感染作用研究由于艾滋病动物模型造型相对较难及HIV安全性管理方面的考虑，学术界多以鼠逆转录病毒模型用于抗艾滋病药物研究。我们以RVB-3感染鼠造白血病模型，以HIV注射液治疗，与对照组比较花瓣状淋巴细胞和淋巴细胞CD3+、CD4+、CD1-、CD8-表型标记特点以及有无肝、脾肿大观察HDL的疗效。1、材料1.1BALB/c小鼠、雌性，6周龄、14-18g，18只。1.2Ra-Muly-RVB-3病毒、Denver Medical Center提供。1.3HDL注射液。长春市中心血站研制。2、方法2.1将感染RVB-3的鼠脾无菌取出，用Eagle MEM制成10％的悬液，4°c2000r/mim 15min，取上清液。2.2将18只小鼠随机分成3组，每组6只。第1、2组12只小鼠每只腹腔注射所制备的上清液0.5ml，第3组为空白对照组，注射生理盐水0.5ml。2.3两天后，第1、3组每只每次静脉注射生理盐水1.0ml，隔日注射一次；第2组每只每次静脉注射HDL1.0ml，隔日一次。2.4第34天(分别注射生理盐水和HDL15次以后)静脉采血测RVB-3抗体，并检查花瓣状白血病细胞以及CD3+、CD4+、CD1-和CD8-表型标记细胞，后宰杀观察肝、脾有无肿大。3、结果3.1检测R本文档来自技高网...

【技术保护点】
高密度脂蛋白及其载脂蛋白用于制备治疗包膜病毒所致疾病药物的用途。

【技术特征摘要】
1.高密度脂蛋白及其载脂蛋白用于制备治疗包膜病毒所致疾病药物的用途。2.根据权利要求1所述制备治疗药物的用途，其中，包膜病毒所致疾病包括艾滋病、流感、禽流感病毒感染人、SARS、乙型肝炎、丙型肝炎、流行性乙型脑炎、单纯疱疹病毒感染、带状疱疹、麻疹、巨细胞病毒感染、T淋巴细胞白血病病毒感染疾病。3.高密度脂蛋白及其载脂蛋白用于制备治疗包膜病毒所致疾病药物，是以纯化的形式与药学上的载体一起制成的，这些载体包括水或水溶液、乳剂或悬浮液，盐水和缓冲介质。4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于用作单独施用的组合物，或用作与其它药物联合施用的组合物。5.高密度脂蛋白注...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨宝田，张兴义，刘文芳，徐举，杨磊，
申请(专利权)人：杨宝田，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]