一种用于牲畜的益生活菌微胶囊制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种用于牲畜的益生活菌微胶囊制剂及其制备方法。它是由芯材、菌悬液、包埋材料和载体组成；其中菌悬液与芯材的重量份数比为１∶２；芯材与菌悬液所形成的混合液与包埋材料的体积比为１∶３。所述的菌悬液是采用微生物发酵法经离心制备，再由芯材吸附和包埋制成微胶囊，然后冷冻干燥制成活菌微胶囊，再按照不同动物及不同生长阶段配制成活菌微胶囊制剂。其主要技术特点是具有使用安全、无残留、不产生抗药性，在动物小肠内存活率高，存活时间长的特点，可作为饲料添加剂或治疗动物腹泻的兽药使用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物制剂
，涉及一种用于牲畜的益生活菌微胶 嚢制剂及其制备方法，同时也涉及活菌微胶嚢制剂的制备方法。
技术介绍
1965年Lilley和Stillwell首先使用益生素(Probiotics)，将其定 义为、、由一种微生物分泌，刺激另 一种微生物生长的物质。1974 年，Parker认为、、益生素是维持肠道内微生物平衡的微生物物质〃.益生菌 克服了非营养性添加剂特别是抗生素带来的负面效应，它是无污染、无残 留、抗疾病、促进动物生长的天然添加剂，在饲料工业中得到了广泛的应 用。 一般认为益生菌就是指能够在生物体(主要是人和动物)内存活，对宿 主的生命健康有益的一类微生物， 一般把益生菌活菌制剂或含有微生物 培养物的微生物制剂称作益生素。从上个世纪初人们就开始认识到微生 物及其产物能够对机体产生影响，并且从细菌、真菌、酵母等微生物中筛 选得到了许多被认为是益生菌的微生物。益生菌主要用于维持动物体内 微生态系统的平衡，即在幼龄家畜尚未建立起良好的肠道微生物区系的 情况下，使用益生菌减少动物生产损失；益生菌还能够部分替代抗菌药物, 通过帮助恢复动物体内微生态系统的平衡，达到治疗动物疾病的目的。目 前常用的益生菌有乳酸菌、凝结芽孢杆菌等，其有益效果在于1、 对动物的营养作用乳酸菌能合成动物体所需的多种维生素，如硫 胺素、核黄素、尼克酸、吡哆醇、泛酸、叶酸、维生素B12等。估计，盲 肠上的微生物可提供动物维生素需要量的25% ~ 30°/a，可基本满足机体对 维生素的需要。乳酸菌产生的挥发性脂肪酸为大肠粘膜代谢提供了能源， 也使肠道pH值和氧化还原电势降低，有利于矿物质钙、铁、镁、锌等的 吸收。2、 抑制病原菌的繁殖乳酸菌产生的乳酸、乙酸等酸性产物可抑制病原菌生长繁殖。乳酸菌能产生类细菌素物质，对病原菌有抑制作用。嗜酸乳杆菌产生的分子量为3500的肽，可以抑制大肠杆菌DM的合成，可抑 制一系列革兰氏阳性和阴性病原体的生长。嗜酸乳杆菌可以产生11202，抑 制葡萄球菌等致病菌的生长繁殖，还能产生双乙酰，这种化合物对许多病 原菌有抑制作用。芽孢杆菌在其生长过程中能够产生乙酸、丙酸、丁酸 等挥发性脂肪酸，这些酸类能够降低动物肠道pH值，可有效抑制病原菌生 长。产生少量抗菌物质一杆菌肽，对有害微生物起抑制和杀灭作用。芽孢 杆菌可以消耗大量的氧，维持肠道厌氧环境，抑制致病菌生长，平衡稳定 乳酸菌的作用，维持肠道正常生态平衡。3、 提高动物免疫力用乳酸杆菌发酵产物饲喂断奶仔猪，仔猪血清中 IgG水平明显升高。4、 凝结芽孢杆菌的特点和作用表现在稳定性好。耐酸、耐盐、耐高 温(10(TC)及耐挤压，在制粒过程中及通过酸性胃环境均能保持高度稳定 性，能产生维生素。芽孢杆菌在生长繁殖过程中能够产生Bl、 B2、 B6等 B族维生素和维生素C、维生素K,为动物提供维生素。产生多种消化酶 凝结芽孢杆菌具有分泌很强的蛋白酶、脂肪酶及淀粉酶活性，从而可补充 肠道内源酶的不足。还能产生植酸酶，促进动物对植酸磷的利用和对脂肪 的消化吸收。产生的氨基氧化酶及分解硫化氢的酶类，可将巧l哚类氧化成 无毒、无害的物质，从而降低畜禽舍内氨气、硫化氢的浓度和臭味，减少 环境污染。关于菌体微胶嚢的研究，是近年来迅速发展的先进技术，它以自己独 特的优点广泛地应用于许多领域。20世纪80年代就有研究者进行了乳酸 菌的微胶嚢化探索，Pranee用海藻酸钠作为壁材对乳酸菌进行微胶嚢化， 所得的微胶嚢用于乳酸的生产，生产性能良好，且这种乳酸菌微胶嚢可 以重复使用。目前国外有关实验室报道可以利用乳酸菌微胶嚢化细胞进 行混合益生菌发酵剂，酸奶，胞外多糖，乳酸，细菌素的生产。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供由凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸乳杆菌、粪链球菌和载体按不同配比组合的益生活菌微胶嚢制 剂。本专利技术另一个目的在于，公开了益生活菌微胶嚢制剂的制备方法，采 用生物发酵的方法，经微胶囊制备，然后冷冻干燥制成活菌微胶嚢，然 后再按照不同动物及不同生长阶段配比混合均匀，制成活菌微胶嚢制剂 成活菌微胶嚢制剂。本专利技术再一个目的在于公开了益生活菌微胶嚢制剂在治疗动物消化道疾病药物方面的应用。包括治疗幼畜腹泻、痢疾药物方面的应用。其中所述的幼畜主要指仔猪、仔鸡、幼年奶牛等等，同时也可以是成年猪、成鸡、成年奶牛。本专利技术还一个目的在于公开了益生活菌微胶嚢制剂在作为伺料添加 剂预防幼畜腹泻和增加抵抗力方面的应用。为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案 一种用于牲畜的益生活 菌微胶嚢制剂，其特征在于它是由芯材、按各单菌的菌悬液、包埋材料 和载体组成；其中菌悬液与芯材的重量份数比为1: 2;芯材与菌悬液所 形成的混合液与包埋材料的体积比为1: 3;各单菌的菌悬液为凝结芽孢 杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌，乳酸乳杆菌和粪链球菌；活菌含量分 别为嗜酸乳杆菌微胶嚢》1.0xl0'cfu/g;植物乳杆菌微胶嚢> 1. 0 x 10'cfu/g;凝结芽孢杆菌微胶嚢》1. 0 x 109cfu/g;乳酸乳杆菌微胶嚢> 1. 0 x 10'cfu/g;粪链球菌微胶嚢> 1. 0 x 10'cfu/g。本专利技术所述的活菌微胶嚢制剂，其中所述的芯材为1: 1的微孔淀粉 与乳糖(重量份数比)混合物；包埋材料为3-4%的海藻酸钠溶液；氯化钙 的浓度为3-4%水溶液；载体为1-1.5份玉米蛋白。本专利技术所述的活菌微胶嚢制剂，其特征在于所述活菌制剂的活菌总含 量为1. 0 x 109cfu/g以上，微胶嚢直径为1 ~ 2mm。本专利技术所述活菌微胶囊制剂的制备方法，按如下步骤进行(1) 斜面菌种培养各菌种使用相应培养基并加入1. 5-2. 5%琼脂， 在30-40t:条件下静止培养20-48小时，放入4'C冰箱保存；(2) 液体一级种子培养为摇瓶培养，取250ml三角瓶加入种子培 养基50-100ml,取斜面种子菌种1环，接入培养基中30-40 X:, 100-220r/minpm,培养30h;(3) 液体二级培养1QL自动种子发酵罐，装种子培养基5-8L,接 重量5-10°/。， 30-4(TC，搅拌速度50-100转/分钟，培养30h;(4) 各发酵罐单菌林纯培养条件温度25-4(TC，通风量9-13m7h， 罐压0.02-0.09 MPa，接种量1. 5-7. 5%,时间19-72小时，发酵液活菌 数达到10s-109cfu/ml;各菌种的发酵培养基(g/L):嗜酸乳杆菌胰蛋白胨2.5-7. 5g,蛋白胨5-15g，葡萄糖5-15g，， 乳糖2. 5-7.5g，酵母浸出粉4-10g pH7.0;粪链球菌蛋白胨10-30g，牛肉膏10-30g，乳糖10-30g, pH6. 8±0. 2;凝结芽孢杆菌蛋白胨5-15g,酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g， MgS0r 7H20 0. 5-1.5g， K2HP04 1—3g， M跳50ug， pH 7.0;植物乳杆菌蛋白胨5-15g,牛肉膏5-15g，酵母膏3-7g,葡萄糖 15-25g，柠檬酸二钠1. 5-3. 5g， K2HP0J-3g，醋酸钠2. 5-7. 5g， MgS04.7H20 l-3g，MnS04.4H2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于牲畜的益生活菌微胶囊制剂，其特征在于它是由芯材、各单菌的菌悬液、包埋材料和载体组成；其中菌悬液与芯材的重量份数比为１∶２；芯材与菌悬液所形成的混合液与包埋材料的体积比为１∶３；各单菌的菌悬液为：凝结芽孢杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌，乳酸乳杆菌和粪链球菌；活菌含量分别为：嗜酸乳杆菌微胶囊≥１．０×１０↑［９］ｃｆｕ／ｇ；植物乳杆菌微胶囊≥１．０×１０↑［９］ｃｆｕ／ｇ；凝结芽孢杆菌微胶囊≥１．０×１０↑［９］ｃｆｕ／ｇ；乳酸乳杆菌微胶囊≥１．０×１０↑［９］ｃｆｕ／ｇ；粪链球菌微胶囊≥１．０×１０↑［９］ｃｆｕ／ｇ。

【技术特征摘要】
1、一种用于牲畜的益生活菌微胶囊制剂，其特征在于它是由芯材、各单菌的菌悬液、包埋材料和载体组成；其中菌悬液与芯材的重量份数比为1∶2；芯材与菌悬液所形成的混合液与包埋材料的体积比为1∶3；各单菌的菌悬液为凝结芽孢杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌，乳酸乳杆菌和粪链球菌；活菌含量分别为嗜酸乳杆菌微胶囊≥1.0×109cfu/g；植物乳杆菌微胶囊≥1.0×109cfu/g；凝结芽孢杆菌微胶囊≥1.0×109cfu/g；乳酸乳杆菌微胶囊≥1.0×109cfu/g；粪链球菌微胶囊≥1.0×109cfu/g。2、 如权利要求l所述的活菌微胶嚢制剂，其中所述的芯材为重量份数 比为l: l的微孔淀粉与乳糖混合物；包埋材料为3-4%的海藻酸钠溶液； 载体为1-1. 5份玉米蛋白。3、 如权利要求l所述的活菌微胶嚢制剂，其特征在于所述活菌制剂中 活菌总含量为l. OxlO'cfu/g以上；微胶囊直径为l-2mm。4、 权利要求1所述活菌微胶嚢制剂在作为饲料添加剂预防幼畜腹泻和 增加^氏抗力方面的应用。5、 权利要求l所述活菌微胶嚢制剂在制备治疗幼畜腹泻方面的应用。6、 一种制备权利要求1-5任一项所述活菌微胶嚢制剂的方法，其特征 在于按如下步骤进行(1) 益生活菌的培养将各菌体使用相应斜面菌种培养，经液体一 级种子培养，液体二级培养，发酵罐单菌抹纯增殖培养；(2) 活菌微胶嚢的制备采用连续高速离心机离心收集上述各菌体， 加入无菌水配制成l. OxlOcfu/mL菌悬液，然后加入^t孔淀粉与乳糖(1:1W/W)混合物，比例为l:2V/W，均匀搅拌100-200r/min 30-60min;最 后加入3-4%海藻酸钠无菌溶液比例为1: 3V/V，通过胶囊自动发生器将微 粒滴入3-4%无菌氯化钾水溶液中，固化l-2h，制成活菌微胶嚢； (...

【专利技术属性】
技术研发人员：王德培，丁友昉，周念闽，
申请(专利权)人：天津科技大学，唐山赛纳生物技术服务有限公司，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]