一种重组人肿瘤坏死因子受体－Ｆｃ融合蛋白冻干粉针剂制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种重组人肿瘤坏死因子受体－Ｆｃ融合蛋白冻干粉针剂及其制备工艺。它由人肿瘤坏死因子受体－Ｆｃ融合蛋白加入药理允许的保护剂和缓冲剂，经优化的冻干方法制成质量稳定的粉针剂。其保护剂为蔗糖、聚乙二醇、聚乙烯片吡咯烷酮、甘露醇、海藻糖、乳糖、右旋糖苷、葡萄糖中的一种或多种；缓冲剂为氨丁三醇、醋酸钠、柠檬酸钠、磷酸二氢钠中的一种或多种。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药
，具体涉及一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白 冻干粉针剂及其制备方法。
技术介绍
类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是人类最常见的自身免疫性疾病之 一，患病率约1%，与人类白细胞抗原DR4/DR1明显相关，具有一定的遗传倾向。RA的临床 特征多为手、足、腕、膝、臀等的关节滑膜发炎，最终导致关节损伤。滑膜炎引起大量淋巴细 胞浸润，主要包括巨噬细胞、T淋巴细胞和浆细胞，同时血管增生。关节损伤主要发生于滑 膜与软骨和骨毗邻处。月中瘤坏死因子 α (Tumor Necrosis Factor Alpha, TNF α )禾口淋巴毒素 (Lymphotoxin,LT)是通过与其共同受体TNFR75和TNFR55结合而发挥生物学作用的，大量 实验证据表明可溶性TNFR75和TNFR55 (即受体的膜外部分)可以通过与TNF α和LT的有 效结合而阻断TNFa和LT在生物体内的生物学作用。TNF α抗体治疗RA的原理是细胞因子之间能相互诱导促成或抑制，形成所谓的细 胞因子网络。细胞因子网络失调是RA的主要发病机制及病理原因。炎性滑膜内，不仅促炎 细胞因子水平上调，抗炎细胞因子以及包括可溶性受体在内的细胞因子抑制剂也上调了。 20世纪90年代早期，人们发现TNF α、IL-U IL_6、GM-CSF, IL-8等都出现在滑膜中并促进 炎症发生。TNFa成为有效的RA治疗目标的证据主要有三个方面(1)类风湿性滑膜细胞 离体培养试验，加入抗TNF α抗体(抗-TNF α)能使培养物中IL-1的生物活性降低，后来 发现滑膜中GM-CSF、IL-6、IL-8水平也降低，表明IL_6、GM_CSF、IL-8阻断能使其他促炎因 子的生成减少；(2)用抗体或TNF受体(TNFR)-Fc融合蛋白来抑制TNF α，对II型胶原诱导 的关节炎模型动物有明显益处，即使在疾病发作后再开始治疗，多数情况下效果也很显著； (3)免疫组织学方法证实，受LPS刺激后，新冷冻组织中TNF及其受体的表达上调，说明TNF 与其受体间的相互作用在体内非常重要，进一步表明TNFa可能是很好的RA治疗目标。目前用于临床的TNFa阻断药物都是生物蛋白类药物，或是基于受体的药物，或 是抗体。其主要优点是特异性很强，但缺点也很明显，如质量不稳定、复溶效果不好等。
技术实现思路
本专利技术提供了一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白冻干粉针剂及其制备 方法。该重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白粉针剂，含有人肿瘤坏死因子受体-Fc融 合蛋白和药理允许的保护剂和缓冲剂。保护剂选自蔗糖、聚乙二醇、聚乙烯片吡咯烷酮、甘露醇、海藻糖、乳糖、右旋糖苷 和葡萄糖中的一种或多种；缓冲剂选自氨丁三醇、醋酸钠、柠檬酸钠和磷酸二氢钠中的一种 或多种。优选地，保护剂选自蔗糖、聚乙烯片吡咯烷酮和右旋糖苷中的一种或多种；缓冲剂 选自醋酸钠或氨丁三醇。优选地，所述粉针剂含有重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白125份、保护剂比例为10-50份、缓冲剂比例为0.5-2份。更优选地，含有重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合 蛋白125份、保护剂比例为35-45份、缓冲剂比例为1.0-1.4份。进一步优选地，含有125重 量份的重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白、45重量份的保护剂、1. 4重量份的缓冲剂。重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白制备过程中所选的过滤系统的滤膜或滤 芯材质为混合纤维素、醋酸纤维素、硝酸纤维素、活性炭纤维、玻璃纤维、加强型尼龙、聚偏 二氟乙烯、聚丙烯、聚四氟乙烯、聚醚砜或尼龙66中的一种或多种，孔径为0. 22 μ m。该过滤 系统不仅可以有效截留细菌和细菌孢子，药液残留少，达到快速除菌的效果，而且不吸附蛋 白，保证了该制剂的成品率。重组人肿瘤坏死因子受体-FC融合蛋白粉针剂的制备方法，包括以下步骤称取 重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白、保护剂和缓冲剂，加预冷至4 10°C注射用水充分 混勻，用盐酸或氢氧化钠调其PH至7. 1-7. 7，药液经0. 22 μ m的的除菌过滤系统除菌过滤。 得rhTNFR-Fc半成品；冷冻干燥得重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白粉针剂。其中所述冷冻干燥具体包括以下步骤1)预冻阶段预冻温度为-45 V -30 V，保持预冻温度1 3小时；2)升华干燥阶段真空度1 3bar，温度为_35°C _25°C，保持6 12小时；3)解析干燥阶段真空度 1 3bar，分别在-20°C、-15°C、-10°C、-5°C、5°C、10°C、 20°C、30°C各恒温干燥2 6小时。与现有技术相比，本专利技术的重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白粉针剂，成品 率高，稳定性好，外形饱满，质地均勻，复溶迅速。而且，其PH、澄清度与颜色、含量、无菌等多 项指标均符合质量标准并优于现有技术。本专利技术的重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白 冻干粉针剂制备工艺能够保证产品质量稳定可控、干燥效果好、产品水分含量低。制备时采 用的除菌过滤系统和冻干工艺，还可以显著缩短生产时间，减少污染和交叉污染概率。具体实施例方式为了更好的说明本专利技术，现将本专利技术实施例表述如下，但本专利技术绝不仅限于以下 实施例。实施例1TNFR-Fc12. 50g蔗糖l.OOg右旋糖酐3. 50g氨丁三醇0. 14g注射用水定容至IOOOml按照处方准确称量，加注射用水充分混勻后，用盐酸调其pH至7. 30。将药液经 0.22 um的材质为聚偏二氟乙烯的滤盘加压除菌过滤。得rhTNFR-Fc半成品。将半成品分装于西林瓶中(lml/瓶)，放入冻干机中，开启冻干机，过程如下1)预冻阶段预冻温度为_38°C，保持预冻温度3小时；2)升华干燥阶段真空度3bar，温度为_32°C，保持12小时；3)解析干燥阶段真空度 3bar，分别在 _20°C、-10°C、_5°C、10°C、20°C、30°C各恒温干燥2个小时，即得注射用重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白粉针剂。实施例2TNFR-Fc12. 50g蔗糖1. 20g聚乙烯片吡咯烷酮2.80g醋酸钠0. IOg注射用水定容至IOOOml 按照处方准确称量，加注射用水充分混勻后，用盐酸调其pH至7. 44。将药液经 0.22 um的材质为聚四氟乙烯的滤盘加压除菌过滤。得rhTNFR-Fc半成品。将半成品分装于玻璃西林瓶中(lml/瓶)，放入冻干机中，开启冻干机，过程如下1)预冻阶段预冻温度为_45°C，保持预冻温度2小时；2)升华干燥阶段真空度3bar，温度为_35°C，保持9小时；3)解析干燥阶段真空度 2bar，分别在 _20°C、-10°C、_5°C、10°C、20°C、30°C各恒 温干燥2h、2. 5h、3h、2h、2. 5h、2. 5h，即得注射用重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白粉 针剂。实施例3TNFR-Fc12. 50g聚乙烯片吡咯烷酮1.50g右旋糖酐3. OOg氨丁三醇0. 12g注射用水定容至IOOOml按照处方准确称量，加注射用水充分混勻后，用盐酸调其pH至7. 62。将药液经 0.22 um的材质为聚偏二氟乙烯的滤盘加压除菌过滤。得rhTNFR-Fc半成品。将半成品分装于西林本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人肿瘤坏死因子受体－Ｆｃ融合蛋白冻干粉针剂，其特征在于含有重组人肿瘤坏死因子受体－Ｆｃ融合蛋白、保护剂和缓冲剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵志全，冯中，石其德，
申请(专利权)人：山东新时代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：37[]