小而密低密度脂蛋白中的胆固醇的定量方法技术

本发明专利技术提供一种sdLDL-C的定量方法，其中包括：步骤(i)，在含 有优先抑制由胆固醇酯水解酶等胆固醇测定用酶引起的sdLDL-C的反 应的表面活性剂的反应液中，使该胆固醇测定用酶作用于样品，除去 该样品中的HDL-C、VLDL-C、CM-C以及LgLDL-C；步骤(ii)，添加 引发在所述步骤(i)后的反应液中残留的sdLDL-C的反应的试剂，生成 过氧化氢或者还原型辅酶，并测定所生成的过氧化氢或者还原型辅酶； 以及步骤(iii)，由(i)和(ii)中的测定值、与预先制作的标准曲线来确定该 样品中的sdLDL-C浓度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及样品中的小而密低密度脂蛋白(以下简记为sdLDL)中 的胆固醇(以下简记为sdLDL-C)的定量方法以及定量用试剂盒。
技术介绍
血液中存在的脂蛋白根据其比重大致分为高密度脂蛋白(以下简 记为HDL)、低密度脂蛋白(以下简记为LDL)、极低密度脂蛋白(以下简 记为VLDL)以及乳糜微粒(以下简记为CM)4类。构成各脂蛋白的脂质 组成也不同，并且，根据构成各脂蛋白的载脂蛋白的种类的不同，在 生物体中的作用大不相同。另外，作为在从VLDL到LDL代谢的过程 中所生成的脂蛋白，存在密度在VLDL和LDL中间的中间密度脂蛋白 (以下简记为IDL)，其在广义上也被分类为LDL。临床检查中，作为动脉硬化诊断的筛选指标，使用总胆固醇、总 甘油三酯、HDL胆固醇、LDL胆固醇、载脂蛋白AI、载脂蛋白B等。 其中，被认为与动脉硬化形成紧密相关的LDL胆固醇已经开始被频繁 地测定。另一方面发现，很多人尽管LDL胆固醇不高，但也具有冠动 脉硬化病变。也有报道称在该病症中，小而高密度的LDL(该LDL 称为sdLDL)增加，sdLDL-C与冠动脉疾病的相关程度在LDL-C以上[参'照、7 —本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种样品中的ｓｄＬＤＬ－Ｃ的定量方法，包括下述步骤（ｉ）、（ｉｉ）和（ｉｉｉ）：　步骤（ｉ）：在含有表面活性剂Ａ的反应液中，使该胆固醇酯水解酶和该胆固醇氧化酶、或者该胆固醇酯水解酶、该胆固醇脱氢酶和氧化型辅酶作用于样品，除去该样品中的 ＨＤＬ－Ｃ、ＶＬＤＬ－Ｃ、ＣＭ－Ｃ以及ＬｇＬＤＬ－Ｃ，其中，所述表面活性剂Ａ为与由胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶－氧化型辅酶引起的ＨＤＬ－Ｃ、ＶＬＤＬ－Ｃ、ＣＭ－Ｃ以及ＬｇＬＤＬ－Ｃ的反应相比、优先抑制由该胆固醇酯水解酶和该胆固醇氧化酶或者该胆固醇脱氢酶－氧化型辅酶引起的ｓｄＬＤＬ－Ｃ的反应的表面活性剂；　步骤（ｉｉ）：添加引发由胆固醇酯...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2006.10.18 JP 283418/20061. 一种样品中的sdLDL-C的定量方法，包括下述步骤(i)、(ii)和(iii)步骤(i)在含有表面活性剂A的反应液中，使该胆固醇酯水解酶和该胆固醇氧化酶、或者该胆固醇酯水解酶、该胆固醇脱氢酶和氧化型辅酶作用于样品，除去该样品中的HDL-C、VLDL-C、CM-C以及LgLDL-C，其中，所述表面活性剂A为与由胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶-氧化型辅酶引起的HDL-C、VLDL-C、CM-C以及LgLDL-C的反应相比、优先抑制由该胆固醇酯水解酶和该胆固醇氧化酶或者该胆固醇脱氢酶-氧化型辅酶引起的sdLDL-C的反应的表面活性剂；步骤(ii)添加引发由胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶-氧化型辅酶引起的、在所述步骤(i)的含有表面活性剂A的反应液中残留的sdLDL-C的反应的试剂，生成过氧化氢或者还原型辅酶，并测定所生成的过氧化氢或者还原型辅酶；以及步骤(iii)使用含有已知浓度的sdLDL-C的标准样品，进行所述步骤(i)和(ii)，生成过氧化氢或者还原型辅酶，并测定所生成的过氧化氢或者还原型辅酶，将sdLDL-C浓度与过氧化氢或者还原型辅酶的测定值相关联，来确定该样品中的sdLDL-C浓度；其中，所述sdLDL-C表示小而密低密度脂蛋白中的胆固醇，所述HDL-C表示高密度脂蛋白中的胆固醇，所述VLDL-C表示极低密度脂蛋白中的胆固醇，CM-C表示乳糜微粒中的胆固醇，LgLDL-C表示大而轻低密度脂蛋白中的胆固醇。2.如权利要求l所述的方法，其中，引发由胆固醇酯水解酶和胆 固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶-氧化型辅酶引起的、在步骤(i)的含有表 面活性剂A的反应液中残留的sdLDL-C的反应的试剂为表面活性剂B， 所述表面活性剂B是使由胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇 脱氢酶-氧化型辅酶引起的sdLDL-C的反应解除抑制的表面活性剂。3.如权利要求1或2所述的方法，其中，表面活性剂A是选自聚 氧乙烯烷基胺、氧化胺类、烷基甜菜碱、烷基铵-l-丙磺酸盐、酰胺烷 基甜菜碱、聚氧乙烯苄基-烷基季铵盐、聚氧乙烯脂肪酰胺、聚氧乙烯 多环苯基醚硫酸酯盐、聚氧乙烯垸基苯基醚硫酸酯盐、聚氧乙烯脂肪 酰胺硫酸酯盐、聚氧乙烯烷基胺硫酸酯盐、N-酰基牛磺酸盐、N-酰基 氨基酸盐、乙二胺-聚氧乙烯聚氧丙烯縮合物、不含有聚乙二醇的聚丙 二醇衍生物、由下述通式(I)表示的聚氧乙烯聚氧丙烯縮合物、以及聚 氧乙烯聚氧化烯垸基醚中的表面活性剂，其中，所述聚氧乙烯聚氧化 烯垸基醚中的烷基为碳原子数9以下的垸基，HO- (C3H60) i- (C2H40) h— (C3HfiO)厂H (I) 通式(I)中，a、 b及c相同或者不同，表示1 200的整数。4. 如权利要求1~3中任一项所述的方法，其中，表面活性剂B是 选自聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯聚氧化烯垸基醚、聚氧乙烯烷基苯基 醚、聚氧乙烯聚氧化烯烷基苯基醚、聚氧乙烯多环苯基醚、聚氧乙烯聚氧化烯多环苯基醚、由下述通式(n)表示的聚氧乙烯聚氧丙烯缩合物、以及聚氧乙烯聚氧化烯烷基胺中的表面活性剂，其中，所述聚氧乙烯 聚氧化烯烷基醚中的烷基为碳原子数10以上的烷基，HO- (C2H40) d- (C3HaO) (C2H40) f-H(I I) 通式(II)中，d、 e及f相同或者不同，表示1 200的整数。5. 如权利要求1 4中任一项所述的方法，其中，在白蛋白存在下 进行步骤(i)。6. —种样品中的sd...

【专利技术属性】
技术研发人员：荒武知子，片山有基，三岛慎刚，
申请(专利权)人：协和梅迪克斯株式会社，
类型：发明
国别省市：JP