本发明专利技术公开了一种畜禽肉中高、低密度脂蛋白胆固醇含量的测定方法，它是先将畜禽肉中的脂类用氢氧化钾和无水乙醇皂化，胆固醇作为不皂化物用无水乙醚提取出来，然后用磷钨酸-氯化镁沉淀剂将其中的高密度脂蛋白胆固醇分离出来，用檬酸钠-肝素沉淀剂将其中的低密度脂蛋白胆固醇分离出来，最后用气相色谱仪测出高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的峰面积，根据峰面积计算其含量。本发明专利技术能准确定量地测出畜禽肉中高、低密度脂蛋白胆固醇的含量，而采用医学方法所测得的值为畜禽肌肉组织渗出液中的含量，并非肌肉中全部含量。因此，本发明专利技术将为准确评价功能性畜禽肉提供正确可靠的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量的测定方法。
技术介绍
胆固醇分为高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇两种，高密度脂蛋白胆固醇可减少患冠状动脉心脏病的危险，被称为“好”胆固醇；低密度脂蛋白胆固醇会增加患冠状动脉心脏病的危险，被称为“坏”胆固醇。人体内的胆固醇有两个来源，一是内源合成，二是来自动物性食物。近年来，随着生活水平的提高，动物性食物在人们膳食中占的比例逐渐增大，外源的胆固醇摄入过多，诱发了各种心血管疾病。为此，科研工作者研发了高密度脂蛋白胆固醇含量高、低密度脂蛋白胆固醇含量低的畜禽肉，使人们在不降低生活质量的同时降低患心血管疾病的风险。目前，国内还没有测定畜禽肉中高、低密度脂蛋白胆固醇的含量的标准方法，一些科研工作者常借鉴医学上测血液中高低密度脂蛋白胆固醇的方法进行测定，首先将畜禽肉加一定比例的生理盐水进行勻浆，然后离心取上清液，测上清液中两种胆固醇的含量。由于胆固醇不溶于水，上述方法测定的两种胆固醇的含量只是畜禽肉渗出液中的含量，它是畜禽肉中高、低密度脂蛋白胆固醇的部分值，并非畜禽肉中两种胆固醇含量的真值。
技术实现思路
为了测定畜禽肉中两种胆固醇含量的真值，申请人广泛查阅了相关资料，进行了相关试验技术的集成创新，通过大量的试验研究，建立了一种畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，为客观准确地评价畜禽肉提供了新方法。本专利技术的技术方案是畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，将畜禽肉中的脂类用氢氧化钾和无水乙醇皂化，胆固醇作为不皂化物用无水乙醚提取出来，然后用磷钨酸-氯化镁沉淀剂将其中的高密度脂蛋白胆固醇分离出来，最后用气相色谱仪测出高密度脂蛋白胆固醇的峰面积，根据峰面积计算其含量。具体步骤为(1)皂化取0. 1 1. 5克畜禽肉，用0. 5 1. 5mol/L的氢氧化钾和无水乙醇在75°C 95°C 水浴上皂化至澄清；所述氢氧化钾和无水乙醇的体积比为1 1;(2)胆固醇提取然后将皂化后的溶液用乙醚提取3次，之后用蒸馏水洗涤3次，无水硫酸钠干燥乙醚层，用高纯氮吹干或真空干燥箱烘干后，加入无水乙醇溶解提取出的胆固醇；(3)高密度脂蛋白胆固醇的分离然后用磷钨酸-氯化镁配成的沉淀剂和胆固醇溶液等体积混合均勻，静置、离心、 过滤，即得高密度脂蛋白胆固醇溶液；所用磷钨酸-氯化镁沉淀剂pH为6. 1 士0. 1，磷钨酸含量为4. 4克/升，氯化镁含量为11克/升；(4)测定与计算最后，用气相色谱仪外标法测高密度脂蛋白胆固醇溶液中高密度脂蛋白胆固醇的峰面积，通过公式X = cXAXVX100/As/m/1000(X 试样中高脂蛋白胆固醇的含量，单位为毫克每百克；c 标准工作液中胆固醇的浓度，单位为微克每毫升；A 试样溶液中胆固醇的峰面积；V 试样溶液最终定容的体积，单位为毫升；AS 标准工作液中胆固醇的峰面积； m:肉样的质量，单位为克。)计算出畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇的含量。本专利技术的技术方案是畜禽肉中低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，首先是将畜禽肉中的脂类用氢氧化钾和无水乙醇皂化，胆固醇作为不皂化物用无水乙醚提取出来，用檬酸钠-肝素沉淀剂将其中的低密度脂蛋白胆固醇分离出来，最后用气相色谱仪测出低密度脂蛋白胆固醇的峰面积，根据峰面积计算其含量。具体步骤为(1)皂化取0. 1 1. 5克畜禽肉，用0. 5 1. 5mol/L的氢氧化钾和无水乙醇在75°C 95°C 水浴上缓慢皂化至溶液澄清；所述氢氧化钾和无水乙醇的体积比为1 1;(2)胆固醇提取然后将皂化后的溶液用乙醚提取3次，之后用蒸馏水洗涤3次，无水硫酸钠干燥乙醚层，用高纯氮吹干或真空干燥箱烘干后，加入无水乙醇溶解提取出的胆固醇；(3)低密度脂蛋白胆固醇的分离用柠檬酸钠-肝素配成的沉淀剂和胆固醇溶液等体积混合、静置、离心、过滤，即得低密度脂蛋白胆固醇溶液；所用试剂柠檬酸钠-肝素沉淀剂pH为5. 12士0. 02，柠檬酸钠的含量为18. 8克/升，肝素的含量为12500U/升。(4)测定与计算最后用气相色谱仪外标法测低密度脂蛋白胆固醇溶液中低密度脂蛋白胆固醇的峰面积，通过公式X = cXAXVX100/As/m/1000(X 试样中低密度脂蛋白胆固醇的含量， 单位为毫克每百克；c 标准工作液中胆固醇的浓度，单位为微克每毫升；A 试样溶液中胆固醇的峰面积；V 试样溶液最终定容的体积，单位为毫升-A 标准工作液中胆固醇的峰面积；m:肉样的质量，单位为克。)计算出畜禽肉中低密度脂蛋白胆固醇的含量。本专利技术气相色谱条件优选为色谱柱DB_5弹性石英毛细管柱(30米0. 32毫米X /0. 25微米)载气99. 99%氮气，恒流2. 4毫升/分钟柱温初始温度200°C，1分钟后，以30°C /分钟升至280°C，保持10分钟进样口温度280°C检测器温度290°C进样量及方式1微升不分流进样空气流速350毫升/分钟氢气流速30毫升/分钟本专利技术的有益效果为本专利技术能准确定量地测出畜禽肉中高、低密度脂蛋白胆固醇的含量，而采用医学方法所测得的值为畜禽肌肉组织渗出液中的含量，并非肌肉中全部含量。因此，本专利技术将为准确评价功能性畜禽肉提供正确可靠的方法。具体实施例方式实施例1畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇的测定方法1.所用试剂氢氧化钾(分析纯)，无水乙醇(分析纯)，无水乙醚(分析纯)，无水硫酸钠(分析纯)，蒸馏水，磷钨酸(分析纯)，氯化镁(分析纯)，胆固醇(标准品)，高纯氮2.操作方法及步骤(1)皂化称取0.5 1.0克试样，置于100毫升带塞比色管中，加入10毫升lmol/L氢氧化钾溶液，10毫升无水乙醇，混勻，装上冷凝管，在75°C 95°C水浴上缓慢皂化至溶液澄清 (约需1小时)，然后用流水冷却。(2)胆固醇提取将试样皂化液移入50毫升分液漏斗中，加入10毫升乙醚混勻，静置分层，将水层放入上述比色管中，并加入10毫升乙醚，轻轻振摇，静置分层，将乙醚层移入上述分液漏斗中。再加入10毫升乙醚于比色管中，重复提取1次，将乙醚层移入分液漏斗中。用15毫升蒸馏水分三次洗涤分液漏斗中的溶液。分层后弃去水层，用10克无水硫酸钠干燥乙醚层， 将乙醚层移入另一带塞比色管中。用高纯氮吹干后，加入1毫升无水乙醇溶解吹干后的胆固醇。(3)高密度脂蛋白胆固醇的分离分别称取磷钨酸0.044克和氯化镁0. 11克，定容至10毫升，pH值为6. 1 士0. 1，准确吸取磷钨酸-氯化镁溶液0. 5毫升，与等体积的胆固醇提取液混勻，室温静置10分钟后， 3000转/分钟离心15分钟，用过滤器将离心后悬浮固形物过滤掉，滤液即为高密度脂蛋白胆固醇溶液。(4)测定根据试样溶液中高密度脂蛋白胆固醇的含量情况，选定峰面积相近的标准工作液。标准工作液和试样溶液中胆固醇的相应值应均在仪器检测的线性范围内。标准工作液和试样溶液等体积间隔进样测定，根据保留时间定性，外标法定量。气象色谱条件色谱柱DB_5弹性石英毛细管柱(30米0. 32毫米X /0. 25微米)载气99. 99%氮气，恒流2. 4毫升/分钟柱温初始温度200°C，1分钟后，以30°C /分钟升至280°C，保持10分钟进样口温度280°C检测器温度290°C 进样量及方式1微升不分流本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，将畜禽肉中的脂类用氢氧化钾和无水乙醇皂化，胆固醇作为不皂化物用无水乙醚提取出来，然后用磷钨酸－氯化镁沉淀剂将其中的高密度脂蛋白胆固醇分离出来，最后用气相色谱仪测出高密度脂蛋白胆固醇的峰面积，根据峰面积计算其含量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘雪兰，井庆川，魏祥法，石天虹，武彬，阎佩佩，刘涛，刘瑞亭，
申请(专利权)人：山东省农业科学院家禽研究所，
类型：发明
国别省市：88
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