抗β淀粉样蛋白单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及在由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱的治疗中用于诊断和治疗用途的方法和组合物，所述疾病和紊乱包括淀粉样变性，一组与淀粉样蛋白相关的紊乱和异常，如阿尔茨海默病。本发明专利技术提供了包括高特异性和高效抗体的新方法和组合物，所述抗体具有特异性识别并结合一系列β淀粉样蛋白的特定表位的能力。通过本发明专利技术教导提供的抗体特别可用于治疗由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱，包括淀粉样变性：一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经紊乱，如阿尔茨海默病（ＡＤ）。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗β淀粉样蛋白单克隆抗体相关专利申请的交叉引用本申请要求2007年6月12日提交的美国临时申请No.60/943,543、2007年6月12日提交的美国临时申请No.60/943,541、和2007年6月13日提交的美国临时申请No.60/943,790的优先权。专利技术背景本专利技术涉及在由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白(amyloid-likeprotein)引起的或与其相关的疾病和紊乱的治疗中用于诊断和治疗用途的方法和组合物，所述疾病和紊乱包括淀粉样变性，一组与淀粉样蛋白相关的紊乱和异常，如阿尔茨海默病。淀粉样变性不是单一的疾病实体，而是一广类以蜡质淀粉状蛋白(称为淀粉样蛋白，其在一种或多种器官或身体系统中积累)的细胞外组织沉积为特征的进行性疾病过程。随着淀粉样蛋白沉积物的堆积，其开始干扰器官或身体系统的正常功能。有至少15种不同类型的淀粉样变性。主要形式是没有已知前因的原发性淀粉样变性，出现在一些其它病症之后的继发性淀粉样变性，和遗传性淀粉样变性。继发性淀粉样变性发生在罹患慢性感染或炎性疾病，例如结核病、称为家族性地中海热的细菌感染、骨感染(骨髓炎)、类风湿性关节炎、小肠炎症(肉芽肿性回肠炎)、霍奇金病和麻风病的患者中。淀粉样蛋白原纤维(fibril)约占淀粉样蛋白物质的90％，包含数种不同类型的蛋白质中的一种。这些蛋白质中的一些能够折叠成所谓的“β-折叠”片状原纤维，这种独特的蛋白质构型呈现出对刚果红(Congored)的结合位点，导致了淀粉样蛋白的独特的着色性质。另外，淀粉样蛋白沉积物还与淀粉样蛋白P(五边形)成分(AP)——一种与正常血清淀粉样蛋白P(SAP)相关的糖蛋白，以及与硫酸盐化的糖胺聚糖(GAG)——结缔组织的复杂糖密切相关。许多老年病基于淀粉样蛋白样蛋白(amyloid-likeproteins)或与其相关，并且部分地以促进疾病发生和疾病发展的淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样物质的细胞外沉积物的累积为特征。这些疾病包括但不限于神经紊乱，如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆(Lewybodydementia)、唐氏综合征(Down’ssyndrome)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征。其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病有进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病(CreutzfeldJacobdisease)、帕金森氏病、HIV相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤以及其它疾病，包括黄斑变性。尽管这些疾病的发病机理可能是多种多样的，但它们的特征性沉积物经常含有许多共同的分子成分。在显著程度上，这可能归因于促炎通路的局部激活，从而与激活的补体成分、急性期反应物、免疫调节剂及其它炎性介质的共沉积相关(McGeer等人，1994)。阿尔茨海默病(AD)是一种神经紊乱，其主要被认为是由淀粉样蛋白斑块，即蛋白质异常沉积物在脑中的积累，引起的。在患病个体脑中发现的最常见的淀粉样蛋白类型主要包含Aβ原纤维。科学证据表明β淀粉样蛋白在斑块中的产生和累积的增加导致神经细胞死亡，这助长了AD的发展和进程。在关键脑区域中神经细胞的损失进而又导致神经递质的减少和记忆的减损。主要负责斑块增大的蛋白质包括淀粉样蛋白前体蛋白(APP)和两种早老蛋白(早老蛋白I和早老蛋白II)。通过酶β和γ分泌酶相继切割淀粉样蛋白前体蛋白(APP)(其在大多数细胞中组成型表达和代谢)导致39至43个氨基酸的Aβ肽的释放。APP的降解很可能增加其在斑块中聚集的倾向。特别是Aβ(1-42)片段由于其C-末端的两个极为疏水的氨基酸残基，而具有构建聚集物的高倾向。因此认为Aβ(1-42)片段主要参与并负责AD中神经炎斑块形成的起始，并因此具有高病理学潜力。因此需要能够靶向并散开淀粉样蛋白斑块形成的特异性抗体。AD的症状缓慢显现，第一个症状可能仅仅是轻度健忘。在此阶段，个体可能忘记新近的事件、活动、熟悉的人或事的名称以及不能解决简单的数学问题。随着疾病进展，症状更易于被察觉并且变得足够严重从而导致患有AD的人们或他们的家人寻求医学帮助。AD的中期症状包括忘记如何做诸如整理清洁的简单任务，并且出现说话、理解、阅读或书写方面的问题。后期的AD患者可能变得焦虑或具攻击性，可能从家里走失以及最终需要全面护理。目前，唯一的明确诊断AD的方法是在个体死亡后的尸体解剖中鉴别脑组织中的斑块和缠结。因此，当人仍活着的时候，医生只能作出“可能”或“很可能”患有AD的诊断。应用目前的方法，内科医师利用数种诊断“可能”AD的工具，至多可以在90％的时间正确诊断AD。内科医师询问个体的一般健康状况、过往的医疗问题、以及在完成日常活动时出现任何困难的历史。关于记忆、解决问题、注意力、计算和语言的行为测试提供认知减退的有关信息，而医疗检验诸如血、尿或脊髓液的检验和脑部扫描可以提供一些其它信息。AD的管理由基于药物的和基于非药物的治疗组成。以改变疾病的潜在过程(延缓或逆转进程)为目的的治疗迄今在很大程度上是不成功的。修补神经细胞的化学信使(神经递质)不足(缺陷)或功能障碍的药物，特别是胆碱酯酶抑制剂(ChEI)(如他克林和卡巴拉汀(rivastigmine))已显示出可改善症状。ChEI阻碍神经递质的酶促降解，由此增加脑中可用于传递神经信号的化学信使的量。对于处于疾病早期和中期阶段的一些人，药物他克林(tacrine，MorrisPlains，NJ)、多奈哌齐(Tokyo，JP)、卡巴拉汀(rivastigmine，EastHanover，NJ)或加兰他敏(galantamine，NewBrunswick，NJ)可以在有限的时间内帮助防止某些症状变得更严重。另一种药物美金刚(memantine，NewYork，NY)已被核准治疗中度至重度的AD。也有药物用于对付AD的精神病学表现。还有一些药物可以帮助控制AD的行为症状，如失眠、兴奋、恍惚、焦虑和抑郁。治疗这些症状通常使患者更加舒服，并使护理人员更易于进行护理。不幸的是，尽管有显著的治疗进展显示出这类药剂可靠地优于安慰剂，但是疾病仍继续发展，并且对精神功能的平均作用仅为有限的。很多用于AD药物治疗的药物(例如ChEI)也具有副作用，包括胃肠功能失调、肝脏毒性和体重减轻。其它基于淀粉样蛋白样蛋白的累积和沉积或与之相关的疾病有轻度认知损害、路易体痴呆(LBD)、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、包涵体肌炎(IBM)和黄斑变性，特别是年龄相关性黄斑变性(AMD)。轻度认知损害(MCI)是一个一般性术语，最通常定义为微妙的但可测量的记忆障碍。患有MCI的人体验到比正常衰老所预期到的更严重的记忆问题，但是不显示其它的痴呆症状，诸如判断或推理损害。MCI是常常反映AD临床前阶段的一种病症。β淀粉样蛋白在内嗅皮质(EC)的沉积据认为在老年人轻度认知损害(MCI)的发展过程中起着关键的作用。这与一旦AD变得临床明显、则CSF-AAβ(1-42)水平即显著下降的观察结果是一致的。与CSF-Aβ(1-42)相反，CSF-τ的水平在MCI阶段显著增加，并且这些值在此之后继本文档来自技高网...

【技术保护点】
单克隆抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体识别构象表位，并分别地与聚合可溶性淀粉样蛋白肽、寡聚淀粉样蛋白肽、包含多个单体Ａβ１－４２肽的聚合可溶性淀粉样蛋白Ａβ肽和／或寡聚淀粉样蛋白Ａβ肽结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-6-12 60/943,543;US 2007-6-12 60/943,541;US1.抗体或其片段，其中所述抗体或其片段特异性结合β淀粉样蛋白Aβ1-40，并且包含(i)轻链可变结构域和(ii)重链可变结构域，其中轻链可变结构域含有SEQIDNO：7的氨基酸序列，重链可变结构域含有SEQIDNO：8的氨基酸序列，且其中SEQIDNO：8的位置52的氨基酸是半胱氨酸，其中所述片段是所述抗体的Fab，F(ab’)2，scFv，或Fv片段。2.抗体或其片段，所述抗体由于2007年5月25日保藏的、保藏号为DSMACC2844的杂交瘤细胞系EJ1A9产生，其中所述片段为所述抗体的Fab，F(ab’)2，scFv，或Fv片段，且其中所述抗体或其片段特异性结合Aβ1-40。3.包含(i)轻链可变结构域和(ii)重链可变结构域的抗体或其片段的人源化形式，其中所述抗体或其片段特异性结合Aβ1-40，其中：轻链可变结构域包含SEQIDNO：7的氨基酸序列，且重链可变结构域包含SEQIDNO：8的氨基酸序列，其中SEQIDNO：8的位置52的氨基酸是半胱氨酸，其中所述片段为所述抗体的Fab，F(ab’)2，scFv，或Fv片段。4.权利要求1的抗体或其片段，其中抗体是嵌合抗体。5.权利要求1-4之任一项的抗体或其片段，其中该抗体或片段能够特异地结合Aβ1-42。6.权利要求1-4之任一项的抗体或其片段，其中所述抗体是单克隆抗体。7.权利要求5的抗体或其片段，其中所述抗体是单克隆抗体。8.权利要求1-4之任一项的抗体或其片段，其中抗体或其片段是分离的。9.权利要求5的抗体或其片段，其中抗体或其片段是分离的。10.权利要求6的抗体或其片段，其中抗体或其片段是分离的。11.权利要求7的抗体或其片段，其中抗体或其片段是分离的。12.根据权利要求1-4之任一项的抗体或其片段，用于a.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块负荷；或b.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块量；或c.降低患有与脑中可溶性Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体的脑中的可溶性Aβ总量；或d.保持或增加呈现出淀粉样蛋白相关疾病或病症的个体的认知记忆能力。13.根据权利要求5的抗体或其片段，用于a.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块负荷；或b.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块量；或c.降低患有与脑中可溶性Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体的脑中的可溶性Aβ总量；或d.保持或增加呈现出淀粉样蛋白相关疾病或病症的个体的认知记忆能力。14.根据权利要求6的抗体或其片段，用于a.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块负荷；或b.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块量；或c.降低患有与脑中可溶性Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体的脑中的可溶性Aβ总量；或d.保持或增加呈现出淀粉样蛋白相关疾病或病症的个体的认知记忆能力。15.根据权利要求7的抗体或其片段，用于a.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块负荷；或b.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块量；或c.降低患有与脑中可溶性Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体的脑中的可溶性Aβ总量；或d.保持或增加呈现出淀粉样蛋白相关疾病或病症的个体的认知记忆能力。16.根据权利要求8的抗体或其片段，用于a.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块负荷；或b.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块量；或c.降低患有与脑中可溶性Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体的脑中的可溶性Aβ总量；或d.保持或增加呈现出淀粉样蛋白相关疾病或病症的个体的认知记忆能力。17.根据权利要求9的抗体或其片段，用于a.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块负荷；或b.减小患有与脑中斑块负荷增加相关的疾病或病症的个体的脑中的斑块量；或c.降低患有与脑中可溶性Aβ浓度增加相关的疾病或病症的个体的脑中的可溶性Aβ总量；或d.保持或增加呈现出淀粉样蛋白相关疾病或病症的个体的认知记忆能力。18.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：A普法伊费尔，M皮尔格伦，A穆斯，R沃茨，
申请(专利权)人：AC免疫有限公司，基因技术公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]