一种三磷酸腺苷前体脂质体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种三磷酸腺苷（ＡＴＰ）前体脂质体及其制备方法和应用。该方法按如下步骤进行：ａ．取三磷酸腺苷加入磷酸盐缓冲液溶解成三磷酸腺苷溶液，备用；ｂ．取脂质体骨架材料与稳定剂加热熔融或用有机溶剂溶解成脂质溶液，备用；ｃ．先将ｂ步骤的脂质溶液与ａ步骤的三磷酸腺苷溶液混匀乳化后，于恒温水浴中减压旋转蒸发后制得液态三磷酸腺苷前体脂质体，然后加入冻干保护剂，经冷冻干燥或喷雾干燥，得产品；或者，先将ｂ步骤的脂质溶液置恒温水浴中减压旋转蒸发后制得脂质膜，再加入ａ步骤的三磷酸腺苷溶液，震荡１－３分钟，得液态三磷酸腺苷脂质体，然后加入冻干保护剂，经冷冻干燥或喷雾干燥，得固体粉末状三磷酸腺苷前体脂质体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物制剂，尤其涉及一种三磷酸腺苷前体脂质体及其制备方法，另 外还涉及该三磷酸腺苷前体脂质体的应用。
技术介绍
三磷酸腺苷(ATP)是体内组织细胞一切生命活动所需能量的直接来源，被誉为 细胞内能量的“分子货币”，储存和传递化学能，蛋白质、脂肪、糖和核苷酸的合成都 需它参与，可促使机体各种细胞的修复和再生，增强细胞代谢活性，对治疗各种疾病均 有较强的针对性。人体中ATP的总量只有大约0.1摩尔。人体细胞每天的能量需要水解 200-300摩尔的ATP，这意味着每个ATP分子每天要被重复利用2000-3000次，而且ATP 不能被储存，稳定性非常差，在体内极易分解；再者ATP为水溶性药物，极易溶于水， 相对于细胞膜的亲和性不足，因此不易被缺血缺氧组织利用。正是由于以上这些因素限 制了 ATP在缺血缺氧引起的能量代谢障碍性疾病等领域的应用。脂质体是由磷脂双分子层构成的亲水性囊泡，由于脂质体具有提高被包封药物 的稳定性、延长药物的作用时间、对局部病变部位的靶向作用、降低药物毒副作用等特 点，因此脂质体作为药物载体已广泛应用于抗肿瘤药物、抗菌药物及心血管药物等的静 脉给药系统的工艺配方中。常用的脂质体均为液体状态，脂质体在液体状态下存在着许多问题，如药物的 渗漏、粒子的聚集以及磷脂在液体状态下的氧化、水解等，这些都严重影响了脂质体的 工业化生产，更影响了脂质体在临床中的应用。正是基于这些原因，为了使脂质体能够 较长时间保存，我们设计了一种固体的、稳定的ATP的前体脂质体注射剂。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种稳定性好，保存期长，可延长三磷酸腺苷在体内 的半衰期，从而能持续改善缺血缺氧组织的功能，方便在临床中使用的三磷酸腺苷前体 脂质体；目的之二是提供制备工艺简单，成本低，可实现规模化生产的制备方法；目的 之三是提供该三磷酸腺苷前体脂质体的应用。本专利技术的目的之一可通过如下技术措施来实现它由如下重量份配比的原料制成三磷酸腺苷1 60脂质体骨架材料10 75稳定剂 5 10 冻干保护剂 5 50 ；所述的脂质体骨架材料是大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二 棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆寇酰磷脂酰胆碱、神经酰胺中的一种、其中二种或三种组 合；所述的稳定剂是胆固醇、豆留醇、谷留醇、泊洛沙姆、十二烷基硫酸钠、聚山 梨醇、胆酸钠、去氧胆酸钠中的一种、其中二种或三种组合；所述的冻干保护剂是甘露醇、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、氯化 钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或其中二种组合。本专利技术的目的之一还可通过如下技术措施来实现所述的脂质体骨架材料为大豆卵磷脂或/和蛋黄卵磷脂；所述的稳定剂为胆固 醇或/和胆酸钠；所述的冻干保护剂为甘露醇或海藻糖。本专利技术的目的之二可通过如下技术措施来实现用目的之一的原料制备三磷酸腺苷前体脂质体的方法，该方法按如下步骤进 行a.取三磷酸腺苷加入0.1mol/L WpH = 6.0-8.0的磷酸盐缓冲液溶解成pH =6.8-7.4的三磷酸腺苷溶液，备用；b.取脂质体骨架材料与稳定剂加热熔融或用有机溶剂溶解成脂质溶液，备用；c.先将b步骤的脂质溶液与a步骤的三磷酸腺苷溶液混勻乳化后，于25-40°C恒 温水浴中减压旋转蒸发后制得液态三磷酸腺苷脂质体，然后加入冻干保护剂，搅拌30-60 分钟，经冷冻干燥或喷雾干燥，得固体粉末状三磷酸腺苷前体脂质体；或者先将b步骤的脂质溶液置25_40°C恒温水浴中减压旋转蒸发后制得脂质膜，再加 入a步骤的三磷酸腺苷溶液，震荡1-3分钟，得液态三磷酸腺苷脂质体，然后加入冻干 保护剂，搅拌30-60分钟，经冷冻干燥或喷雾干燥，得固体粉末状三磷酸腺苷前体脂质 体。本专利技术的目的之二还可通过如下技术措施来实现前述a步骤中所述的有机溶剂是氯仿、无水乙醇、二氯甲烷、乙醚中的一 种或其中二种组合；C步骤中所述的震荡是超声震荡；C步骤中所述的冷冻干燥是 在-50 -60°c、-0.5 -O.lMpa条件下的真空冷冻干燥。本专利技术的目的之三可通过如下技术措施来实现本专利技术的三磷酸腺苷前体脂质体在改善缺血缺氧组织的功能时与生理盐水或特 定溶媒混合后以脂质体溶液形式的应用。本专利技术的ATP前体脂质体注射剂为白色、蓬松、流动性较好的粉末，称重、分 装于5ml安瓿中、充氮气、灭菌、密封后即可得到成品。用前只需加生理盐水或其它适当溶媒水合振荡即成普通脂质体，从而解决了 ATP脂质体在混悬液中的聚集、沉降、融合、渗漏等不稳定性问题；进一步提高ATP在 贮存及进入体内的稳定性，由于ATP前体脂质体是一种固体制剂，不稳定性药物在固体 状态下比液体状态稳定，在体内由于磷脂双分子膜的保护作用，可延长三磷酸腺苷在体 内的半衰期，从而能持续改善缺血缺氧组织的功能。ATP的前体脂质体，其是一种颗粒状固体制剂，不仅能提高ATP和脂质体的 稳定性，并且在临用前只需加少量生理盐水或其它适当溶媒水合，就能回复成ATP脂质 体，从而可以根据需要方便在临床中的使用。临用前用加入生理盐水或注射用水溶解，振荡混勻后即分散成均勻的粒径，主 要分布在100-250nm之间，透射电镜放大48000倍形态学照片(见附图说明图1)及粒径分布(见 图2)后附。其中有效活性成分为包裹有ATP的脂质体。ATP前体脂质体注射剂中ATP制剂的检测条件为高效液相色谱(HPLC)法。色谱条件为ODS-C18柱(150*4.6mm)，流动相为磷酸盐缓冲液(pH6.0)甲醇=96 4， 检测波长为254nm，流速lml/η ι，柱温为室温，进样量为5ul。(空白脂质体及ATP脂 质体处理后HPLC检测色谱图见图3-4)ATP前体脂质体注射剂包封率的测定采用高速离心法测定。称取ATP前体脂质体适量，用生理盐水溶解定容至20000g离心20分钟，收集上 清液后向离心管中加入0.5ml PBS (pH7.4)，充分涡旋振荡后，继续离心取上清，重复上 诉操作一次。收集以上3次离心得到的上清液，用流动相定容至10ml，进HPLC测定， 得游离ATP浓度C游离。同上方法制备ATP脂质体0.5ml，加入1 % Triton χ-100 (曲拉通x-100) 5ml，充 分涡旋振荡混勻，待澄清后，用流动相定容至10ml，进HPLC测定，得总量ATP浓度C 总、οATP脂质体的包封率EE% = (1-C游离/C总)X 100%抽取3个处方制备了 3个批次的脂质体，得到的结论是权利要求1.一种三磷酸腺苷前体脂质体，其特征在于它由如下重量份配比的原料制成三磷酸腺苷1 60脂质体骨架材料10 75稳定剂 5 10冻干保护剂 5 50;所述的脂质体骨架材料是大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈 酰磷脂酰胆碱、二肉豆寇酰磷脂酰胆碱、神经酰胺中的一种、其中二种或三种组合；所述的稳定剂是胆固醇、豆留醇、谷留醇、泊洛沙姆、十二烷基硫酸钠、聚山梨 醇、胆酸钠、去氧胆酸钠中的一种、其中二种或三种组合；所述的冻干保护剂是甘露醇、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、氯化钠、聚 乙烯吡咯烷酮中的一种或其中二种组合。2.根据权利要求1所述的一种三磷酸腺苷前体脂质体，其特征在于所述的脂质体骨架材料为大豆卵磷脂或/和蛋黄卵磷脂；所述的稳定剂为胆固醇或/和胆酸钠；所述的冻干本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种三磷酸腺苷前体脂质体，其特征在于它由如下重量份配比的原料制成：三磷酸腺苷　１～６０　脂质体骨架材料　１０～７５稳定剂　５～１０　冻干保护剂　５～５０；所述的脂质体骨架材料是大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆寇酰磷脂酰胆碱、神经酰胺中的一种、其中二种或三种组合；所述的稳定剂是胆固醇、豆甾醇、谷甾醇、泊洛沙姆、十二烷基硫酸钠、聚山梨醇、胆酸钠、去氧胆酸钠中的一种、其中二种或三种组合；所述的冻干保护剂是甘露醇、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、氯化钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或其中二种组合。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高海青，邱洁，刘勇，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]