一步法胚胎玻璃化冷冻保存制造技术

本发明专利技术涉及一种胚胎生物技术，特别是一种胚胎冷冻保存技术。其特点在于：将葡聚糖（Ｄｅｘｔｒａｎ）和海藻糖（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ）用ＰＢＳ液稀释成３０％和０．５ｍｏｌ／Ｌ浓度的混合液，然后与乙二醇８∶２（或７∶３或６∶４）（ｖ／ｖ）混合后配制成ＥＤＴ２０（或ＥＤＴ３０或ＥＤＴ４０）玻璃化溶液。在室温（２０～２５℃）下，将胚胎移入含有ＥＤＴ２０（或ＥＤＴ３０或ＥＤＴ４０）玻璃化溶液的０．２５ｍｌ塑料细管中平衡０．５～１分钟，封口后直接投入液氮中冷冻保存。将冷冻保存的细管由液氮中取出后直接浸入２０～２５℃水浴中，约１０秒钟完成解冻程序。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种胚胎生物技术，特别是一种胚胎冷冻保存技术。1972年Whittingham等首先利用小鼠2～8细胞胚胎冷冻保存(传统冷冻方法)成功并移植后获得后代，他们采用二甲基亚砜(Dimethylsulfoxide:DMSO)为主体抗冻保护剂，浓度为1.5Mol/L，使用降温冷冻仪，以-0.33℃/min的速度降至-30～-35℃，然后再以-1.0℃/min的速度降至-80℃后投入液氮中，整个程序约需3小时。冷冻解冻后胚胎成活率为50～70％。妊娠率为65％，产仔率为48％。1985年Rall等专利技术了胚胎玻璃化冷冻方法，他们利用DMSO、乙酰胺(Acetamide)、丙二醇(Propylene glycol)为主体的抗冻保护剂，配制成浓度高达6Mol/L的玻璃化溶液(VS1)，不使用降温冷冻仪，在室温下对小鼠2-细胞、8-细胞和桑椹胚进行冷冻保存，该方法需要分三步降温(22℃下胚胎于25％VS液中平衡15分钟→4℃下于50％VS液中平衡10分钟→4℃下于100％VS液中平衡10分钟)，整个程序需要35分钟，由于所用抗冻保护剂对胚胎的化学毒性较大，冷冻后胚胎的成活率不稳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种步法胚胎玻璃化冷冻保存，其特征在于： 将葡聚糖（Ｄｅｘｔｒａｎ）和海藻糖（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ）用ＰＢＳ液稀释成３０％和０．５Ｍｏｌ／Ｌ浓度的混合液，然后与乙二醇８∶２（或７∶３或６∶４）（ｖ／ｖ）混合后配制成ＥＤＴ２０（或ＥＤＴ３０或ＥＤＴ４０）玻璃化溶液。 在室温（２０～２５℃）下，将胚胎移入含有ＥＤＴ２０（或ＥＤＴ３０或ＥＤＴ４０）玻璃化溶液的０．２５ｍｌ塑料细管中平衡０．５～１分钟，封口后直接投入液氮中冷冻保存。 需要解冻时，将冷冻保存的细管由液氮中取出后直接浸入２０～２５℃水浴中，约１０秒钟完成解冻程序。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱士恩，曾申明，左琴，张忠诚，
申请(专利权)人：朱士恩，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]