一种重组腺病毒的制剂制造技术

本发明专利技术涉及一种重组腺病毒的制剂，所述制剂含有重组腺病毒、Ｔｒｉｓ缓冲液、丙二醇和精氨酸；另外，制剂还可以含有抗氧化剂如亚硫酸钠、硫代硫酸钠、谷胱甘肽、硫代水杨酸、半胱氨酸盐酸盐、二硫代甘醇酸、硫脲、硫代山梨醇或硫代葡萄糖的任一种或其组合；该制剂还可以含有抗氧增效剂为枸橼酸钠、琥珀酸钠或次磷酸钠的任一种或其组合。本发明专利技术制剂可以在２－８℃长期保存重组腺病毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种制剂，尤其涉及一种重组腺病毒的制剂。技术背景重组腺病毒作为基因治疗领域常用的复制载体，临床用药要求其在保存、运输及 使用过程中保持完整的二十面体病毒壳体结构，维持较高的活病毒数量和感染复制能力。 然而，腺病毒在高温、低PH、氧化等条件下极不稳定，容易降解。例如，US7202078公开了下 述
技术实现思路
，当重组腺病毒浓度高于lE12vp/ml时，病毒颗粒通常会聚集成丝状，引发衣壳 蛋白裂解，致使感染活性降低。在实际的临床应用中，传统方法主要选择在_80°C -20°C的低温条件下保存和运 输重组腺病毒药物，虽然这种方法能够比较有效地保持腺病毒的结构和活性，但由于需要 采用大量的用于保持低温的材料和设备，导致这种保存和运输的成本高昂，且操作存在诸 多不便，并存在较大风险。鉴于这些原因，研究者开始考虑从制剂角度提高用于基因治疗的重组腺病毒贮存 的稳定性，开发能在2 8°C甚至25°C下较好地保持腺病毒活性的制剂。例如，US6689600、US723539UUS20080107631A 公开了包括 Tris 缓冲液、甘油、甘 露醇、蔗糖、MgCl2、吐温-80的重组腺病毒制剂，这些制剂能在2-8°C保存浓度为lEllvp/mL 的腺病毒，并维持其6个月的稳定性，但没有考察该制剂是否可以保存lE12vp/mL及更高浓 度腺病毒的稳定性。又如，US7456009和US7351415公开了由Tris缓冲液、非离子表面活性剂吐 温-80、二价阳离子MgCl2、糖类、NaCl、EDTA或无水乙醇组成的制剂，该制剂能在2_8°C较好 保存ΙΕΙΟνρ/rmL腺病毒的活性，也但没有描述该制剂可以保存lE12vp/mL及更高浓度腺病 毒的稳定性。又如，US2006/0205080A、CN101163794A 公开 了包含 Tris 缓冲液、甘氨酸、 MgCl2，及丙二醇、DMSO、PEG、蔗糖、甘油、四氢呋喃乙二醇醚等组成的制剂，该制剂用于保存 lE12vp/mL腺病毒，可以较好地保持腺病毒的活性。可见，这些现有技术公开的改良制剂通过优化重组腺病毒制剂的组成，在较大程 度上，改善了腺病毒的保存浓度和保存温度。但是，这些改良制剂尚不能用于保存浓度高于 2E12vp/ml的腺病毒制剂，且在2_8°C条件下，不能在较长时间内O年以上)保持制剂中重 组腺病毒的活性。而临床上为了提高疗效，需要浓度不低于2E12vp/ml的重组腺病毒制剂。 因此，如何进一步改良重组腺病毒制剂的组成，来改善该制剂的稳定性及保存浓度、保存温 度和保存时间，成为一个亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题之一在于，提供一种能够在较高温度下、较长时间内 保存高浓度重组腺病毒的药物组合物。本专利技术组合物不仅提高了制剂中重组腺病毒的稳定高浓度重组腺病毒制剂的稳定性，并延长了其保存时间。本专利技术目的在于 提供一种重组腺病毒制剂，所述制剂含有重组腺病毒、Tris缓冲液、丙二醇和精氨酸。进一步，所述iTris缓冲液的浓度为ImM-lOOmM，优选为5mM-50mM，更优选为10mM。进一步，所述丙二醇的浓度为5W/V% -20W/V%，优选为10W/V% _15W/V%。进一步，所述精氨酸的浓度为50mM-250mM，优选为100mM-200mM，更优选为150mM。进一步，所述制剂中还含有抗氧化剂。其中，优选所述的抗氧化剂选自亚硫酸钠、 硫代硫酸钠、谷胱甘肽、硫代水杨酸、半胱氨酸盐酸盐、二硫代甘醇酸、硫脲、硫代山梨醇或 硫代葡萄糖的任一种或其组合，更优选为谷胱甘肽。进一步，所述谷胱甘肽的浓度为5mM-100mM，优选为10mM-50mM，更优选为20mM。进一步，所述制剂中还含有抗氧增效剂。其中，优选所述的抗氧增效剂为枸橼酸 钠、琥珀酸钠或次磷酸钠的任一种或其组合，更优选为枸橼酸钠。进一步，所述枸橼酸钠的浓度为5mM-100mM，优选为10mM-50mM，更优选为30mM。进一步，本专利技术的制剂由重组腺病毒、IOmM的1^化，101八％丙二醇和IOOmM的精 氨酸组成，用HCl调节ρΗ7· 4-8. 6。进一步，本专利技术的制剂由重组腺病毒、IOmM的Tris，101八％丙二醇、IOOmM的精氨 酸、20mM的谷胱甘肽组成，用HCl调节pH7. 4-8. 6。进一步，本专利技术的制剂由重组腺病毒、IOmM的1^8，101八％丙二醇、IOOmM精氨 酸、20mM的谷胱甘肽、30mM的枸橼酸钠组成，用HCl调节pH7. 4-8. 6。为此，本专利技术的目的在于提供一种重组腺病毒制剂，所述制剂含有重组腺病毒、 I-IOOmMTris缓冲液、保护剂。其中，所述的保护剂选自多羟基化合物或二甲基亚砜的任一 种或其组合，优选多羟基化合物选自丙二醇、丙三醇、聚乙二醇400的任一种或其组合，更 优选为丙二醇，最优选浓度为5-20W/V%的丙二醇。本专利技术的另一目的在于提供一种重组腺病毒制剂，所述制剂含有重组腺病毒、 I-IOOmMTris缓冲液、5-20W/V%的丙二醇、氨基酸类化合物。其中，优选所述的氨基酸类化 合物选自甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸或脯氨酸的任一种或其组合，更优选为精 氨酸，最优选浓度为50-250mM的精氨酸。本专利技术的另一目的在于提供了一种重组腺病毒制剂，所述制剂含有重组腺病毒、 I-IOOmMTris缓冲液、5-20W/V%的丙二醇、精氨酸、抗氧化剂。其中，优选所述的抗氧化剂选 自亚硫酸钠、硫代硫酸钠、谷胱甘肽、硫代水杨酸、半胱氨酸盐酸盐、二硫代甘醇酸、硫脲、硫 代山梨醇或硫代葡萄糖的任一种或其组合，更优选为谷胱甘肽，最优选浓度为5-100mM的 谷胱甘肽。本专利技术的另一目的在于提供了一种重组腺病毒制剂，所述制剂含有重组腺病毒， I-IOOmMTris缓冲液，5-20W/V%的丙二醇、50-250mM精氨酸、5-100mM的谷胱甘肽、抗氧增 效剂。其中，优选所述的抗氧增效剂为枸橼酸钠、琥珀酸钠或次磷酸钠的任一种或其组合， 更优选为枸橼酸钠，最优选浓度为30mM的枸橼酸钠。进一步，本专利技术制剂的组成为，含有I-IOOmM的Tris缓冲液、5-20W/V%的丙二醇、 50-250mM的精氨酸、5_100mM的谷胱甘肽、5_100mM的枸橼酸钠。进一步，本专利技术的制剂组成为，含有IOmM的1Tris缓冲液、10W/V%的丙二醇、IOOmM 的精氨酸、20mM的谷胱甘肽、30mM的枸橼酸钠。本专利技术制剂主要应用于保存基因治疗的重组腺病毒，还可应用于保存任何野生型 重组腺病毒或其他用途的重组腺病毒。具体地说，包括所有利用重组DNA技术构建的复制 缺陷型腺病毒或增殖型腺病毒，以及所有的人或动物的野生型腺病毒或其突变腺病毒。采用国际通用的TCID50法检定的病毒滴度值和紫外法检定的病毒颗粒数之比值 (即比活度)来评价本专利技术的重组腺病毒的稳定性。本专利技术采用TCID50方法测定重组腺病毒滴度，其原理是将经过系列稀释的病毒 样品感染293细胞，将每个稀释度所感染一定数量的细胞孔培养10天，在显微镜下观察各 细胞孔中的细胞状况，统计病变细胞孔，利用TCID50计算公式，计算病毒滴度。TCID50/ml = 10_[^d(s_0-5)]+b其中，L 为最低稀本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组腺病毒的药物制剂，所述制剂含有重组腺病毒、Ｔｒｉｓ缓冲液、丙二醇和精氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种重组腺病毒的药物制剂，所述制剂含有重组腺病毒、TriS缓冲液、丙二醇和精氨酸。2.根据权利要求1所述的重组腺病毒药物制剂，所述Tris缓冲液的浓度为 ImM-lOOmM，优选为 5mM-50mM，更优选为 10mM。3.根据权利要求1所述的重组腺病毒制剂，所述丙二醇的浓度为5W/V%-20W/V%，优 选为 10W/V% -15W/V%。4.根据权利要求1所述的重组腺病毒制剂，所述精氨酸的浓度为50mM-250mM，优选为 100mM-200mM，更优选为 150mM。5.根据权利要求1-4任一项所述的重组腺病毒制剂，所述制剂中还含有抗氧化剂。6.根据权利要求5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨艳艳，郭勇，
申请(专利权)人：成都康弘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]