本发明专利技术涉及一种Ｌ２７ｅ家族蛋白的抗原表位或其变体，其由ＳＥＱ?ＩＤＮＯ：３、ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：４或ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：５所示的氨基酸序列组成，以及含有该抗原表位或其变体的组合物。本发明专利技术还涉及一种抗Ｌ２７ｅ家族蛋白的多克隆抗体及其制备方法。本发明专利技术还涉及所述抗体用于检测Ｌ２７ｅ家族蛋白的用途及方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学和免疫学，具体涉及一种核糖体蛋白、特别是一种60S核 糖体蛋白L27e家族蛋白的抗原表位、其抗体及其用途。
技术介绍
核糖体是一切活细胞中(除成熟哺乳动物血细胞外)一个重要的细胞器，主要由 RNA和蛋白质构成(核糖体RNA称为rRNA，蛋白质称r蛋白)。在真核细胞中(线粒体与 叶绿体的核糖体除外)，核糖体为80S，相对分子量为4800 X 103，由60S大亚基和40S小亚 基构成。大亚基由28SrRNA、5. 8SrRNA、5SrRNA和49种r蛋白构成，小亚基则由18SrRNA和 33种r蛋白构成。核糖体会按照mRNA的指令由氨基酸高效且精确地合成多肽链。越来越多的证据表明，许多种r蛋白除组成核糖体、参与蛋白质生物合成之外，还 具有其他功能，如参与复制、转录加工、翻译调控、DNA修复、耐药的形成、自体翻译、细胞凋 亡调控、以及正常细胞的恶性转化及发育调控等(Wool I G. Trends. Biochem. Sci,1996, 21(5) 164-165 ；Clemens M J, Oncagene，2004，23 3180-3188 ；Stoneley M 等，Curr. Mol. Med，2003，3 :597-603)。陈宏等(国际病理科学与临床杂志，2005，25 (5) :393_396)发现肿 瘤中核糖体蛋白可以调节癌基因和抑癌基因而参与转录、翻译及凋亡等诸多方面。李沐阳 等(中国科学C，2002，32 (5) 405-411)发现大肠杆菌核糖体蛋白L24 (RPL24)突变体中， B半乳糖苷酶和谷光苷肽巯基转移酶的活性分别下降至野生型菌株的1/4和1/2，并认为 RPL24与λ N的基因表达可能存在相关，RPL24在翻译的起始和终止过程中以及抵抗病毒方 面起至Ij重要作用。Guo 等(Proceedings of the National Academy ofSciences, 2002,99 7786-7791)在研究一个抗低温的基因CspA过程中发现，此基因能够与核糖体蛋白60S相 互作用，并且能够同上游的CBF/DREB1响应因子相互作用。Robe等(Gene, 2003, 320 (27) 41-48)发现用RNA干扰沉默果蝇中的核糖体蛋白L14基因会引起体细胞的异常。但目前有 关核糖体和核糖体蛋白的研究主要集中在昆虫、哺乳动物、真菌和细菌，植物方面尤其是水 稻方面的研究很少。水稻是世界上最重要的粮食作物之一，也是植物生长发育、逆境反应等基础研究 的模式植物。在水稻中，0sl0g0564300基因位于10号染色体，编码136个氨基酸，该蛋白 类似大亚基r蛋白L27，属于L27e家族，定义为一个L27e家族蛋白。r蛋白在不同物种之 间存在着高度的同源性。在大肠杆菌中，L27是一个核糖体大亚基中r蛋白，对于大亚基 的组装有重要作用，它是大亚基单位上P(肽酰位)位点的组成成分，在细胞内蛋白质生物 合成中发挥重要作用(Iwona K. ffower, TheJournal of Biological Chemistry, 273 (31) 19847-19852)。L27e家族蛋白作为核糖体大亚基的构成成分，其表达能够反映出细胞中蛋 白合成的情况，也能反映出细胞的生化合成活力，对研究生命活动具有指导意义。研究L27e 家族蛋白对揭示水稻蛋白质合成机制和实际生产将具有重要作用。目前关于水稻中L27e 家族蛋白的研究很少，而且，目前对水稻L27e家族蛋白的抗体的研究仍为空白。抗体技术是研究蛋白质功能的有效技术。可以通过制备一个蛋白的抗体来研究该蛋白的表达和功能。传统的抗体制备方法是将抗原注入动物体内，动物体内B淋巴细胞针 对抗原产生抗体。由于抗原分子具有多种抗原决定簇(即抗原表位)，每一种决定簇可激活 相应抗原受体的B淋巴细胞产生针对某一抗原决定簇的抗体。因此将抗原注入机体所产生 的抗体是针对多种抗原决定簇的混合抗体，故称为多克隆抗体。也可以利用抗原决定簇直接免疫动物获得多克隆抗体。所用抗原决定簇可以利用 软件来预测，但有研究表明软件预测抗原决定簇的错误概率较高(Chang HT, Liu CH, Pai Tff. Estimation and extraction ofB-cell linear epitopes predicted by mathematical morphologyapproaches. J Mol Recognit. 2008 Nov-Dec ；21 (6) :431_41)，而且软件对全长 抗原的抗原决定簇预测存在着特异性问题，还需要实验验证。
技术实现思路
为了更好地研究L27e家族蛋白，专利技术人利用ΒΕΡΙΤ0ΡΕ抗原分析预测软件对水 稻0sl0g0564300基因(该基因的GenBank登录号为NP001065410. 1)编码的蛋白质(水 稻L27e家族蛋白)进行抗原决定簇的预测，选出数条抗原决定簇峰值较高的片段，然后用 BLASTP对选出的数条片段在水稻蛋白质库中进行唯一性检测，选取在水稻蛋白质库中唯一 存在的序列为目标序列，其选出的多肽序列为RFKTGKNRWFFTK(SEQID NO 3)，并用实验证 明该表位具有良好的免疫原性和抗原特异性。具体地，本专利技术包括以下几个方面本专利技术的一个方面涉及一种L27e家族蛋白的抗原表位，其由SEQID NO 3所示的 氨基酸序列组成。在本专利技术的一个实施方案中，为了增加与载体蛋白的交联性，在上述抗原表位 的C末端添加了 一个半胱氨酸(半胱氨酸提供二硫键与载体蛋白交联)，得到序列为 RFKTGKNRffFFTKC(SEQ ID NO 4)的抗原表位变体。半胱氨酸也可以加在多肽的N末端，得到序列为CRFKTGKNRWFFTK(SEQ ID NO 5) 的抗原表位变体。因此本专利技术同时涉及序列为RFKTGKNRWFFTKC (SEQ ID NO 4)和 CRFKTGKNRffFFTK(SEQ ID NO 5)的抗原表位变体。本专利技术的抗原表位或其变体可以通过常规的肽合成技术化学合成得到，也可以在 适当的宿主中表达得到；优选的是化学合成方法。本专利技术的另一方面涉及一种组合物，其包含SEQ ID NO :3、SEQ IDNO 4或SEQ ID NO :5所示的L27e家族蛋白抗原表位或其变体，任选地，可以含有免疫佐剂，例如氢氧化铝、 弗氏完全佐剂、或者弗氏不完全佐剂等。本专利技术的还一方面涉及一种L27e家族蛋白抗原表位-载体蛋白复合物；其中，所 述L27e家族蛋白抗原表位为本专利技术的L27e家族蛋白抗原表位或其变体，所述载体蛋白可 以例如是钥孔戚血蓝素(KLH)、BSA、或酪蛋白等。本专利技术的还一方面涉及一种抗L27e家族蛋白抗体，其能够特异地结合SEQ ID N0 3、SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :5所示的抗原表位或其变体。所述抗L27e家族蛋白抗体可 以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体。本专利技术的抗L27e家族蛋白抗体可以得自各种常规制备多克隆抗体的动物，例如 山羊，兔子，大鼠，小鼠等。对本领域技术人员而言，可以根据SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或SEQ ID N本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种Ｌ２７ｅ家族蛋白抗原表位或其变体，其由ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５所示的氨基酸序列组成。
【技术特征摘要】
一种L27e家族蛋白抗原表位或其变体，其由SEQ ID NO3或SEQ ID NO4或SEQ ID NO5所示的氨基酸序列组成。2.一种组合物，其中含有权利要求1所述的抗原表位或其变体，任选地，还含有用于免 疫的佐剂。3.—种L27e家族蛋白抗原表位-载体蛋白复合物，其中所述L27e家族蛋白抗原表位 为权利要求1所述的L27e家族蛋白抗原表位或其变体，所述载体蛋白选自钥孔戚血蓝素、 BSA、以及酪蛋白。4.一种抗L27e家族蛋白抗体的制备方法，包括使用权利要求1的抗原表位或其变体或 者权利要求2的组合物或者权利要求3的复合物作为抗原免疫动物的步骤；任选地，所述抗 L27e家族蛋白抗体是单克隆抗体或者多克隆抗体；具体地，所述制备方法包括如下步骤1)将权利要求1所述的抗原表位或其变体或者权利要求2的组合物或者权利要求3的 复合物免疫动物得到的血样进行离心，得到多抗血清...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘国振，兰金苹，李晓明，李启沅，周宝津，
申请(专利权)人：深圳华大基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]
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