抗人ＣＤ２０人源化抗体、其制备方法及用途技术

本发明专利技术属于生物技术领域，更具体地，本发明专利技术公开了一种抗人ＣＤ２０人源化抗体ｈｕ８Ｅ４、其制备方法及用途，其中，本发明专利技术公开的抗人ＣＤ２０人源化抗体ｈｕ８Ｅ４重链超变区氨基酸序列为ＣＤＲ１：ＳＹＮＭＨ、ＣＤＲ２：ＡＩＹＰＥＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＤ和ＣＤＲ３：ＷＨＹＹＧＮＧＧＡＬＤＹ，轻链超变区氨基酸序列为ＣＤＲ１：ＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡ；ＣＤＲ２：ＮＡＫＴＬＰＤ和ＣＤＲ３：ＱＱＦＷＳＮＰＷＴ；本发明专利技术公开的抗人ＣＤ２０人源化抗体ｈｕ８Ｅ４保留了原鼠源抗体的亲和力和特异性，并具有一定的生物学功能，可用于制备治疗高表达ＣＤ２０的淋巴瘤药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种抗体、其制备方法和用途。
技术介绍
非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)是最常见的淋巴系统恶性肿瘤，好发于青壮年，其中绝 大多数为B细胞来源，约占85%。在未治疗状态下，低度和部分中度恶性NHL如小淋巴细胞 性淋巴瘤和滤泡型淋巴瘤的生长形式往往呈惰性过程，中位生存期为5 9年。它们对首 次化疗敏感，但很容易复发或耐药，当再次化疗或放疗时，疗效明显降低，因而被认为是难 以治愈的恶性肿瘤。而一些高度恶性的NHL则死亡率极高。近年来，针对细胞表面分子的抗原靶向性治疗已取得了巨大进展并成为一种非 常有发展前途的治疗方法，其中被广泛使用且富有成效的是抗CD20的单抗制剂。CD20抗原是非结合性单抗疗法的一个理想靶点，因为该抗原具有克隆特异性，仅 表达于所有的前B细胞和成熟B细胞，而不表达于造血干细胞、浆细胞和其他造血细胞系； 同时，CD20分子在B淋巴瘤细胞表面的表达量异常增高，磷酸化增加，与B细胞淋巴瘤的发 生密切相关。⑶20分子在超过95%的B细胞性NHL中均有表达，且抗原分子在膜上比较暴 露，容易接近，与单抗结合后无显著内化和脱落，也不会因与抗体的结合而发生抗原调变， 因此成为治疗B细胞淋巴瘤的理想靶点。⑶20单抗疗法在治疗B细胞淋巴瘤中已取得了令人满意的效果，目前抗⑶20抗 体主要有以下几种，按照其发挥抗肿瘤作用的不同功能分为两大类(1)主要通过CDC、 ADCC(CDCC)作用发挥功能的C2B8、1F5、2H7、2F2(2)主要通过凋亡、ADCC(CDCC)作用发挥 功能的B1、11B8。美国IDEC phamaceutical公司针对B细胞淋巴瘤生产的人鼠嵌合抗CD20 单克隆抗体Rituximab-C2B8是第一个经美国FDA批准用于治疗淋巴瘤的抗体。1997年批 准上市。美罗华是一种嵌合型IgGl免疫球蛋白，它是通过转染相关基因结构到仓鼠卵细胞 后表达的基因产物。美罗华含13 个氨基酸，分子量约144KD，由鼠抗CD20单克隆抗体的 可变区Fab和人IgGl抗体稳定区Fc片段构成。杂交瘤技术生产的鼠源单克隆抗体进入人体后可能引起人抗鼠抗体免疫应 答 human antimouse antibody response (HAMA)。因此，如何通过基因工程技术来构 建抗降低鼠源抗体的免疫原性的抗体，有效地减少HAMA反应的发生率是本领域的技术人 员急于解决的问题。人源化抗体是为了克服鼠源单抗在临床应用中的缺陷而发展起来的新型基因工程抗体。第一代人源化抗体是将鼠单抗的可变区和人抗体的恒定区组成嵌合抗体，由于抗体的 抗原亲和力是由其可变区决定的，因此嵌合抗体的亲和力保持得很好，同时免疫原性也得 到了一定程度的降低。抗体的可变区是由超变区(CDR)区和框架区(FR)区组成的，CDR是 高度可变的区域，直接介导抗体与抗原的结合。FR区相对保守，作为支架维持着CDR区的 空间位置，它是可变区中产生免疫原性的主要区域。由于嵌合抗体上还保留着鼠可变区， 临床应用时仍常常会有强烈的HAMA反应。因此，为了尽可能降低嵌合抗体的免疫原性，人 们考虑将鼠CDR区直接移植到人源抗体可变区中的FR区上，得到CDR移植抗体，也就是人 源化抗体。但是，单纯的⑶R移植往往降低甚至丧失原抗体的亲和力，这是因为FR区不仅 提供了⑶R的空间构象环境，有时还直接参与抗原抗体的相互结合，只有将FR中某些重要 残基回复突变成鼠源残基才能恢复抗体的活性。(C，Queen, W，P，Schneider, H，Ε, Selick, P, W, Payne, N, F, Landolfi, J, F, Duncan, N, M, Avdalovic, M, Levitt, R, P, Junghans, T, A, ffaldmann, A humanized antibody that binds to the interleukin 2 receptor, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 10029-10033. V. L. Pulito, V. A. Roberts, J. R. Adair, A. L. Rothermel, A. M. Collins, S. S. Varga, C. Martocello, M. Bodmer, L. K. Jolliffe, R. A.Zivin, Humanization and molecular modeling of the anti_CD4 monoclonal antibody, 0KT4A, J. Immunol. 156(1996)2840-2850. K. Nakamura, Y.Tanaka, K. Shitara, N. Hanai, Construction of humanized anti-ganglioside monoclonal antibodies with potent immune effector functions, Cancer Immunol. Immunother. 50(2001)275-284.) 综上所述，得到活性高的鼠源单抗并利用其CDR进一步得到恢复抗体活性的人源 化抗体一直是本领域的技术人员着力解决的问题。
技术实现思路
因此，本专利技术提供了一种抗人⑶20人源化抗体，其重链超变区氨基酸序列为 CDRl SYNMH, CDR2 :AIYPENGDTSYNQKFKD 和 CDR3 :WHYYGNGGALDY，轻链超变区氨基酸序列为 CDRl :RASGNIHNYLA ；CDR2 :NAKTLPD 和 CDR3 =QQFffSNPffT ；本专利技术提供的抗人⑶20人源化抗体，其重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO :10， 轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO :12，更具体地，本专利技术提供的抗⑶20人源化抗体，其 重链氨基酸序列为SEQ ID NO :6，轻链氨基酸序列为SEQ ID NO :8。进一步地，本专利技术所述的抗人⑶20人源化抗体，由重链和轻链组成，其中重链包 括重链可变区和人免疫球蛋白重链恒定区或其片段；蛋白轻链包括轻链可变区和人免疫球 蛋白轻链恒定区或其片段。人免疫球蛋白恒定区可以从各种类型的免疫球蛋白中选择，优选的人免疫球蛋白 重链恒定区或其片段为Y型(IgGh)，氨基酸序列如SED ID N0. 2所示；人免疫球蛋白轻链 恒定区或其片段为κ型或λ型，优选的人免疫球蛋白轻链恒定区的氨基酸序列如SED ID Ν0. 4所示。本专利技术的另一目的在于提供编码上述抗人CD20人源化抗体的核苷酸分子，其中 编码重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO :9，编码轻链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO :11，编码重链的核苷酸序列为SEQ ID NO :5，编码轻链的核苷酸序列为SEQ ID NO :7，由 该核苷酸分子转化的宿主也包含在本专利技术中。4本专利技术进一步提供上述抗人CD20的人源化抗体的制备方法，包括通过计算机辅 助设计出人源化抗体hu8E4的氨基酸序列，全基因合成hu8E4的重链和轻链可变区基因并 经基因重组分别与人免疫球蛋白重、轻链恒定区基因拼接本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗人ＣＤ２０人源化抗体，其重链超变区氨基酸序列为ＣＤＲ１：ＳＹＮＭＨ、ＣＤＲ２：ＡＩＹＰＥＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＤ和ＣＤＲ３：ＷＨＹＹＧＮＧＧＡＬＤＹ，轻链超变区氨基酸序列为ＣＤＲ１：ＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡ；ＣＤＲ２：ＮＡＫＴＬＰＤ和ＣＤＲ３：ＱＱＦＷＳＮＰＷＴ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭亚军，李博华，张大鹏，李彩辉，张彦，
申请(专利权)人：上海抗体药物国家工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]