本发明专利技术提供一种紫芝菌丝体多糖精制物，所述多糖精制物含有多糖和单糖，其特征在于，所述多糖的含量大于９０％，所述单糖的含量小于５％。本发明专利技术也提供该紫芝菌丝体多糖精制物的制备方法及其应用。本方法提供的紫芝菌丝体多糖精制物的多糖含量更高、给药剂量更低、分子量范围集中、纯度更高，且其制备工艺亦适于工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种紫芝菌丝体多糖精制物、其制备方法和其在医药领域的用途。
技术介绍
食药用真菌具有抗肿瘤抗病毒、降血脂、延缓衰老、护肝排毒、促进核酸和蛋白质 生物合成等多种功效，在中国有悠久的使用历史。国内外大量研究表明，真菌多糖是从真菌 子实体、菌丝体、发酵液中分离得到的，为真菌类药物的药效部位，是能够控制细胞分裂分 化，调节细胞生长衰老的一类活性多糖。紫芝(Ganoderma Sinense Zhao, Xu et Zhang)是一种高等真菌，属担子菌纲，多 孔菌目，多孔菌科，灵芝属。有利关节，保神，益精气，坚筋骨，好颜色，疗虚劳等滋补强壮的 功效。国内外对同属异种的赤芝(常作灵芝)研究较多，但对紫芝的研究较少。紫芝含有多 糖、蛋白质、氨基酸等大分子物质，也含生物碱、三萜类、留醇、香豆素、酚类等小分子物质。 目前研究发现，紫芝提取物(以多糖为主)具有抗肿瘤、抗辐射、升高白细胞的作用。对紫芝多糖研究尚处于起步阶段，紫芝粗多糖一般含量较低(低于40% )，且其组 分复杂，且由于紫芝子实体资源稀少，市场上少见紫芝产品。紫芝野生资源贫乏，人工栽培受到自然因素、管理因素的制约致使原料质量不可 控，目前也并不能规模化生产，从而从资源角度影响了紫芝的开发。目前液体深层发酵技术 已经在生物领域有较为成熟的应用，其生产菌丝体不受外界环境影响，产量大，且品质与天 然相当甚至由于天然。利用深层发酵产生紫芝菌丝体工艺可解决其资源问题，并且达到质 量可控，最后实现工业化生产。从紫芝液体深层发酵得到的菌丝体中提取得到多糖，经药理实验证明其有明显的 抗肿瘤作用。中国专利200710045369. 4 “一种紫芝发酵方法及制得的紫芝菌丝体”公开了 一种紫芝液体深层发酵产生菌丝体的方法，中国专利200710045368. χ “紫芝菌丝体胞内多 糖及其制备方法和应用”公开了一种从紫芝液体深层发酵产生的菌丝体中提取制备得到粗 多糖的方法。上述专利涉及的该菌丝体用水提醇沉法提取得到的粗多糖含量在39 75%。 其药理实验的剂量均为40mg/kg/day (给药方式口服喂药)，对小鼠H22肝癌和Lewis肺癌 的抑制率分别在45 55%和40 50%。杨国红，杨义芳，金隽迪(紫芝液体深层发酵的 抗肿瘤活性部位研究.中草药，2008，39 (6) :877-880)对紫芝液体深层发酵的抗肿瘤活 性多糖进行了研究，从紫芝菌丝体中提取得到胞内多糖，其药理实验的剂量也为40mg/kg/ day (给药方式口服喂药)，显示有明显的抗肿瘤活性。以上专利和文章均未涉及多糖分子 量和多糖单糖组成的研究。传统多糖提取方法用水提醇沉法，该法得到的粗多糖含量低，多糖组分复杂，并同 时含有蛋白质色素等大分子成分。鉴于现有技术的状况，需要寻找多糖含量高、分子量范围集中、去除蛋白质等杂 质、具有明显的抗肿瘤活性且给药剂量小于常规方法提取得到的粗多糖的紫芝菌丝体多糖 精制物。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种紫芝菌丝体多糖精制物，其多糖含量高、 分子量范围小、去除蛋白质等杂质、具有明显的抗肿瘤活性且给药剂量小于常规方法提取 得到的粗多糖。本专利技术的第一个目的是提供一种紫芝菌丝体多糖精制物，所述多糖精制物含有多 糖和单糖，其特征在于，所述多糖的含量大于90%，所述单糖的含量小于5%。 进一步地，所述多糖精制物不含有蛋白质。进一步地，所述多糖精制物中多糖的分子量为10万-200万。对本专利技术多糖精制物的结构进行研究得知，其含有的多糖由半乳糖和鼠李糖组 成，其摩尔比为15 1 17. 4 1，优选15 1。本专利技术采用膜技术和季铵盐沉淀法缩小紫芝菌丝体多糖的分子量范围，并去除蛋 白质等杂质，从而得到多糖精制物。本专利技术的第二个目的是提供上述紫芝菌丝体多糖精制物的制备方法，包括如下步 骤紫芝菌丝体经水提醇沉得到粗多糖，粗多糖经超滤、浓缩和盐析，得到紫芝菌丝体多糖 精制物。所得紫芝菌丝体多糖精制物中多糖含量大于90%，不含蛋白质。其生产工艺简单， 可行。作为本专利技术的进一步优选，所述超滤步骤通过截留分子量为1-5万的超滤膜进 行。更优选地，所述超滤膜的截留分子量为3万。作为本专利技术的进一步优选，所述超滤膜由聚酰胺、聚醚砜膜或醋酸纤维素制成。作为本专利技术的进一步优选，所述浓缩步骤通过纳滤膜进行。优选截留分子量为 150-300的纳滤膜。优选由聚酰胺制成的纳滤膜。作为本专利技术的进一步优选，所述盐析步骤通过季铵盐沉淀进行。所述季铵盐可以 选自十六烷基三甲基溴化铵、十六烷基盐酸吡啶或壳聚糖羟丙基三甲基氯化铵，所述季铵 盐的使用浓度为0. 5% _8%，优选浓度为2%。当浓度小于0. 5%时，碱性多糖沉淀不完全； 当浓度大于8%时，处理过程中易气泡，易有残留。由紫芝菌丝体多糖抗肿瘤活性研究显示，分子量大于5万的部位抗肿瘤活性显著 高于小于5万的部位抗肿瘤活性。季铵盐沉淀法(沉析法)可以通过调节溶液pH值，采用 PH梯度法，将CTAB顺次加入依次变化的pH的糖溶液中，便可在酸性、中性和碱性溶液中分 级沉淀多糖。本专利技术制备紫芝菌丝体多糖精制物的具体步骤如下采用山东紫芝菌种 (Ganoderma sinense)进行液体发酵，得到菌丝体用水洗，板框压滤。用水提加热提取l_3h， 水提液浓缩后加1-4倍醇沉过夜，沉淀取出晾干，得到粗多糖。将粗多糖用水溶解，利用膜 技术分离粗多糖，得到截留液(A)和透过液(B)，再用一定分子量的纳滤膜分别浓缩A和B ； 将透过液(B)冷冻干燥，得到分子量小于5万的紫芝菌丝体抗肿瘤多糖部位GS-B ；继续冷 冻干燥A，得到分子量大于5万的紫芝菌丝体抗肿瘤多糖部位GS-A，再用沉析法(优选季铵 盐沉淀法)进一步精制多糖部位GS-A，得到紫芝菌丝体多糖精制物。(上述多糖部位GS-B 和多糖部位GS-A将用于对比例，具体见下表7和8)季铵盐沉淀法的具体步骤如下取干燥后的多糖部位，溶于去离子水中，离心分离，取上清液加季铵盐，混勻，离心分离，分为沉淀物(1)和上清液(2)。将沉淀物(1)用NaCL盐溶液溶解后，醇沉，取沉淀用 少量水溶解后装入透析袋流水透析除盐，袋内液，浓缩，冷冻干燥，得到酸性多糖；另取上清 液⑵加硼酸，用NaOH溶液调pH至11，继续用乙酸调pH至7，离心分离，分为沉淀物(3)和 上清液(4)。将沉淀物(3)用NaCL盐溶液溶解后，醇沉，取沉淀用少量水溶解后装入透析袋 流水透析除盐，袋内液，浓缩，冷冻干燥，得到中性多糖；取上清液(4)用乙酸调pH至4. 4， 加1. 5倍乙醇醇沉过夜，离心分离取沉淀，用水溶解后用透析袋流水透析，取出透析袋内液 后，浓缩，冷冻干燥，即得本专利技术紫芝菌丝体多糖精制物(碱性多糖)。经检测所得紫芝菌丝体多糖精制物中多糖含量大于90%，单糖含量小于5%，且 不含蛋白质，分子量范围在10万-200万。对其结构进行研究得知其单糖组成为半乳糖和 鼠李糖。将该多糖部位进行药理实验，在剂量为2. 223mg/kg/day时，腹腔注射给药对H22 小鼠肝癌的抑制率为55 60%，对小鼠Lewis肺癌的抑制率为45 50%，具有显著的抗 肿瘤作用且给药量小。该多糖pH为7. 20-7. 35。本专利技术确定了紫芝菌丝体多糖精制物中的单糖本文档来自技高网...
【技术保护点】
紫芝菌丝体多糖精制物，所述多糖精制物含有多糖和单糖，其特征在于，所述多糖的含量大于９０％，所述单糖的含量小于５％。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨义芳，金隽迪，杨国红，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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