本发明专利技术公开了一种包被金黄色葡萄球菌蛋白的免疫磁性微球的制备方法，其包括如下步骤：ａ．将１～５体积份的磁性微球置入５０体积份的金黄色葡萄球菌发酵裂解液中；ｂ．向上述溶液中加入１～５体积份１～３％Ｔｗｅｅｎ和１～５体积份０．３～０．８％的戊二醛溶液；ｃ．向上述溶液中加入５～２５体积份０．２～０．８％的ＮａＢＨ４；ｄ．磁性分离得到免疫磁性微球。本发明专利技术的制备方法制得的免疫磁性微球，可以分离纯化各种兔源ＩｇＧ，分离纯化抗体步骤简单，方法简便，可以直接从血清中分离纯化抗体，得到的产品纯度高，且免疫磁性微球重复使用次数可达５次以上。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种免疫磁性微球的制备方法，特别是涉及一种包被金黄色葡萄球菌蛋白的免疫磁性微球的制备方法，本专利技术还涉及这种免疫磁性微球的应用。
技术介绍
金黄色葡萄球菌蛋白A (Staphylococcal Protein A， PROA)是一种从金黄色葡萄 球菌细胞壁分离的蛋白质。它能与人及多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc片段结合，不同 种属其亲和性各不相同；PR0A除与IgG结合外，还能与血清中少量的IgM和IgA结合。由 于该蛋白具有免疫球蛋白Fc部位结合的特异性，因此被广泛的应用于种属及亚类抗体的 检测和分离纯化、酶的固定化和各类生物分子的检测等研究中。 在以往的研究中，应用于抗体分离以及微生物检测的磁性微球类产品多为物理吸 附和化学交联法。物理吸附的方法存在PROA易脱落，吸附抗体不稳定等缺点，而化学交联 法则一般是利用化学反应将磁性微球表面材料的特征性官能团和PROA结合，再利用PROA 与IgG生物特异性结合的特点实现吸附抗体的目的，这种方法虽然克服了上述缺点，但是 由于引入化学物质造成的不必要空间位阻，使磁性微球吸附抗体效率低下，严重影响了磁 性微球的应用。所以及其需要操作简单，安全可靠，且高效稳定的方法来解决此领域目前存 在的问题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种包被金黄色葡萄球菌蛋白的免疫磁性微球 的制备方法，以使PROA固定在磁性微球表面，可以用于分离纯化各种兔源lgG，分离纯化抗 体步骤简单，方法简便，而且免疫磁性微球可以多次使用。 为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种包被金黄色葡萄球菌蛋白的免疫磁性微 球的制备方法，其包括如下步骤 a将1 5体积份的磁性微球置入50体积份的金黄色葡萄球菌发酵裂解液中； b向上述溶液中加入1 5体积份1 3% Tween禾P 1 5体积份0. 3 0. 8%的 戊二醛溶液； c向上述溶液中加入5 25体积份0. 2 0. 8%的NaBH4 ; d磁性分离得到免疫磁性微球。 上述免疫磁性微球的制备方法，其中，步骤a中的磁性微球可以采用现有技术中 的磁性微球，也可以采用下述方法制备的磁性微球 a将纤维素和甲基氧化吗啉溶液以重量比5 10 : 100混合均匀，其中甲基氧化 吗啉的含水量低于11%，所用纤维素可以为微晶纤维素或脱脂棉花； b将5 8重量份的FeCl2 4H20溶于100重量份的去离子水中，加入70 80重 量份的聚乙二醇，之后加入100 110重量份质量浓度为15%的!1202，混合均匀后，加入6N的NaOH溶液调解pH值至10. 5，溶液在50 6(TC反应，得到棕黑色磁流体。 c将步骤a和b制得的纤维素溶液和棕黑色磁流体以体积比3 8 : 1混合加 入到含有1 2. 5% (质量浓度)Tween的10 15体积份的四氯化碳溶液中，在8000 12000rpm转速下搅拌6 15分钟，之后在400 2500rpm下，于45 60。C下搅拌50 120分钟，磁性分离磁性微球。 上述的免疫磁性微球的制备方法，其中，所述步骤b中将溶液涡旋30 60分钟， 静置40 80分钟。 上述免疫磁性微球的制备方法，其中，所述制得的免疫磁性微球的粒径为5 7微 米。 本专利技术还提供了一种兔lgG的纯化方法，其包括如下步骤， a在兔lgG血清中加入前述制备方法制得的免疫磁性微球，震荡后静置，磁性分离 免疫磁性微球； b将分离的免疫磁性微球用pH为7. 4磷酸盐缓冲液洗涤，之后放入层析装置中； c用pH值为2. 5的甘氨酸_盐酸缓冲液洗涤，搜集洗脱液，中和洗脱液； d将中和后的洗脱液透析，将透析后的液体冻干得到抗体纯品。 上述兔lgG的纯化方法，其中，所述步骤d中将中和后的洗脱液在4t:下去离子水 中透析12小时。 本专利技术进一步还提供了一种兔抗人血清白蛋白lgG-PROA-免疫磁性微球的制备 方法，其包括如下步骤 a在4 7体积份的兔抗人血清白蛋白血清中加入1 2. 5体积份的前述方法制 备的免疫磁性微球，震荡后静置，磁性分离磁性微球； b用pH为7. 4磷酸盐缓冲溶液洗涤磁性微球后，加入1 2. 5体积份0. 1 0. 5 %的戊二醛溶液，震荡后静置，分离磁性微球； c用pH为7. 4磷酸盐缓冲液洗涤步骤b分离的磁性微球表面残留的戊二醛，之后 加入1 2. 5体积份pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液； d在步骤c得到的溶液中加入1 2. 5体积份的5 10%的NaBH4，震荡，磁性分离磁性微球，得到兔抗人血清白蛋白lgG-PROA-免疫磁性微球。 进一步，本专利技术还提供了一种人血清白蛋白的纯化方法，其包括如下步骤， a在含有人血清白蛋白的溶液中，加入前述制备方法制得的兔抗人血清白蛋白lgG-PROA-免疫磁性微球，震荡后静置，分离磁性微球； b用pH为7. 5的甘氨酸_盐酸缓冲液洗涤磁性微球； c将步骤b的洗脱液进行透析，将透析后的液体冻干得到纯化的人血清白蛋白。 上述人血清白蛋白的纯化方法，其中，所述步骤c中将洗脱液在4t:下去离子水中 透析12小时。 本专利技术的包被金黄色葡萄球菌蛋白的免疫磁性微球的制备方法，利用戊二醛交联 固定蛋白，将PROA固定在磁性微球表面，制得的免疫磁性微球可以分离纯化各种兔源IgG， 分离纯化抗体步骤简单，方法简便，可以直接从血清中分离纯化抗体，避免了前期对样品的 复杂处理，得到的产品纯度高，且免疫磁性微球重复使用次数可达5次以上，是一种高效， 简便，价格低廉的抗体分离纯化方法，可以代替经典的层析分离装置。具体实施例方式下面结合实施例详细描述本专利技术。 —包被金黄色葡萄球菌蛋白的免疫磁性微球的制备 实施例1 将由现有技术制备的1体积份的磁性微球置入50体积份的金黄色葡萄球菌发酵 裂解液中，之后加入1体积份1 % Tween和1体积份0. 3 %的戊二醛溶液，涡旋30分钟，静 置40分钟，加入5体积份0. 5%的NaBH4，涡旋30分钟后静置，用磁性分离装置分离收集磁 性微球，用二次水充分清洁磁性微球表面，得到免疫磁性微球，将制得的免疫磁性微球保存 在O. 5X的Na^溶液中保存。 制得的免疫磁性微球形状均匀，粒径在5 7微米。 实施例2( — )磁性微球的制备 a纤维素溶液的制备 将甲基氧化吗啉(即NMM0)在6(TC下减压蒸除水分，用非水滴定仪检测溶液中的 水分，至含水量低于11%。 将微晶纤维素(固体粉末)与NMM0溶液以重量比8 : 100混合，放置过夜成均匀 的溶液。 b超顺磁性铁芯的制备 将5重量份的FeCl2 4H20溶于100重量份的去离子水中，加入70重量份的聚乙 二醇8000中，使之溶解，缓慢加入100重量份质量浓度为15 %的H202，混匀后，开始缓慢加 热，并用6N的NaOH溶液调节pH至10. 5，在50°C的水浴中反应2小时，获得棕黑色磁流体。 c纤维素磁性微球的制备 将步骤a和b制得的纤维素溶液和超顺磁性铁芯以体积比3 : l混合加入到含有 1% (质量浓度)Tween(即聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯)的IO体积份的四氯化碳溶液中， 在12000rpm转速下搅拌6分钟，之后在400rpm下，于45。C下搅拌120分钟，磁性分离磁性 微球，用水和甲醇清洗备用。( 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包被金黄色葡萄球菌蛋白的免疫磁性微球的制备方法，其包括如下步骤：ａ将１～５体积份的磁性微球置入５０体积份的金黄色葡萄球菌发酵裂解液中；ｂ向上述溶液中加入１～５体积份１～３％Ｔｗｅｅｎ和１～５体积份０．３～０．８％的戊二醛溶液；ｃ向上述溶液中加入５～２５体积份０．２～０．８％的ＮａＢＨ↓［４］；ｄ磁性分离得到免疫磁性微球。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王树森，
申请(专利权)人：王树森，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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