体外诊断结肠直肠癌的Ｉ－丝束蛋白测定方法技术

本发明专利技术涉及通过确定得自疑似患有结肠直肠癌的患者的生物学样品中Ｉ－丝束蛋白肿瘤标记物的存在而体外诊断结肠直肠癌的方法。所述方法可用于结肠直肠癌的早期诊断、筛选、治疗随诊以及预后，以及用于结肠直肠癌的复发诊断。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】体外诊断结肠直肠癌的卜丝束蛋白测定方法 本专利技术涉及癌学领域。更特别地，本专利技术提供了通过确定取自患者的生物学样品中I-丝束蛋白(I-Plastin)的存在而体外诊断人类患者中的结肠直肠癌的方法，所述方法可用于早期诊断、筛选、治疗随诊以及预后，还可用于结肠直肠癌的复发诊断。 结肠直肠癌(CRC)是主要的公共健康问题。据估计1996年其在世界范围的新发病例为S75000例、考虑到男女性别，其是最常在西方国家发生的癌症，其通常被分类为癌症所致死亡的前3个主要因素之一。考虑到所有阶段，5年存活率在60%范围内。 只有早期诊断才能赋予治愈性治疗的希望。然而，目前还没有血清学筛选检验，也没有早期特异性诊断检验方法。 目前在欧洲使用两种不同方法筛选结肠直肠癌首先，使用临床异常性 (paraclinical)检验，其包括检查粪便中是否存在血(Faecal Occult BloodTest-FOBT，例 如以Hemocxuf名称销售)。已经证实这个技术的临床实用性。当每2年对在50-74岁之 间的个体使用该技术时，可以使结肠直肠癌导致的死亡率降低15-20% 2。为此，一半以上的 人群必须定期参与筛选，且必须对阳性检验事件进行结肠镜检查，任选随后进行适当治疗。 然而，这种筛选技术具有如下一些不利之处 *这个检验的主要缺点是其特别是对于腺瘤(癌前异常增生(dysplastic)病变) 的灵敏性较差，如果腺瘤较大，将导致1/10的病例发展为癌症。，这个检验也不是非常特异性的。粪便中出现血可以与非肿瘤病变相关溃疡性结 肠炎、痔疮、肛瘘等。在这种情况中，必须进行结肠镜检查，结肠镜检查的缺点在后文描述。 最后，Hemoccult⑧检验难以解释；因此其必须在专业中心由有资格的能胜任的人员诠释。 也已经描述了特异于人血红蛋白的免疫学检验(FecaEIA , Heme Sele(^等)。 与1^1110(^1111@相比，它们大概有进步，但是基本上还存在相同问题。因此，由Enterix公司 销售的InSure 使得可以检测87%患有CRC的患者，以及47%具有癌前息肉的患者。这是 一种检测粪便中人血红蛋白、特别是检测这个分子中的珠蛋白部分的检验方法。 第二种筛选方法是在50岁以后对人系统进行结肠镜检查，这样在理论上可以降 低由于结肠直肠癌所致死亡率。然而，对于使用内窥镜进行筛选的政策，健康个体对这种 检查的可接受性太低而不能降低死亡率(已经建立这个筛选计划的欧洲国家结肠镜检查 的顺从水平是大约2% )。结肠镜检查存在并非不显著的结肠穿孔和出血(0. 1% )及死亡 (1/10000)的风险，而且对于公共卫生事业也是非常昂贵的。此外，结肠镜检查需要非常严 格的预先结肠准备，这在很大程度上解释了顺从性不佳的原因。 长久以来已经描述了可以通过免疫测定化验结肠直肠癌的肿瘤标记物。所述肿瘤 标记物特别是癌胚抗原(CEA)和CA19-9。 CEA用于随诊。由于其灵敏性和特异性不足而不可用于筛选或者早期诊断结肠直 肠癌。这是因为该标记物由其它类型癌症及在良性病变中表达。无论如何，通过组合CEA 与另一种肿瘤标记物如CA19-9或CA72-4可以增加灵敏性而不丧失其特异性。 CA19-9的生理学改变的原因很罕见，但是其它良性病变(肝胆病症、胰腺病症)或者恶性病症可以导致CA19-9增高。因此，单独这个标记物对于诊断也无意义。然而，由于 其血清浓度与肿瘤的大小和存在转移瘤相关，因此其也可以用于治疗随诊或者早期证实复 发。 另外，已经提议可商购的检验，如 ^Colopath②/ColorectAlert"2,由Ambrilia销售，其是一种快谏目.相对非停入件CRC的筛选检验。Colopath⑧检测患有结肠直肠病变个体的直肠粘液中的縮醛磷脂(是磷脂的一部分的复合脂质)，而ColorectAlert 检测直肠粘液中的一种复合糖，即T-抗原。 Colopath /ColorectAlert 3检验包括将直肠粘液涂于检验条带上，阳性或阴性结果基于 Schiff反应。Ambrilia已经研究了 1787个个体，证实Colopath⑧/ColorectAlert 检测 出54%的早期结肠直肠癌病例和49%所有阶段组合病例。 >C0LARIS,由Myriad Genetics销售，是在血液中检测MLH1和MSH2基因突变以 筛选遗传性非息肉性结肠癌(HNPCC综合征)。该检验的结果在3周内获得。Myriad使用 目前可利用的最灵敏和最特异性的测序技术。该检验成本昂贵。 >17,，由AMDL销售，是一种筛选各种类型癌症(肺癌、结肠癌、乳腺癌、肝 癌、胃癌等)的检验。因此其对于CRC不具有特异性。该检验的原理是基于双夹心ELISA 技术(测定DR-70抗原)。通过酶反应(抗体与生物素或者链霉抗生物素蛋白结合)进行 揭示。生色反应表示癌症的存在。 本申请人令人惊奇地证实一种新的肿瘤标记物，其由结肠肿瘤释放至癌组织之 外，且是这些肿瘤的特征，由此可以在远离肿瘤的生物学样品及在肿瘤自身中检测到。 因此，本专利技术第一方面是体外诊断结肠直肠癌的方法，其通过确定取自疑似患有 结肠直肠癌的患者的生物学样品、优选远离肿瘤的生物学样品中I-丝束蛋白的存在而进 行诊断。 本专利技术还涉及这种方法在结肠直肠癌的早期诊断、筛选、治疗随诊及预后中以及 在结肠直肠癌的复发诊断中的应用。 本专利技术的方法因此可以通过简便的检验方法特异性且早期诊断结肠直肠癌，所述 检验方法包括检查取自患者的生物学样品、优选远离潜在肿瘤的生物学样品中I-丝束蛋 白的存在。这是因为本申请人出乎意料地揭示了结肠肿瘤不仅分泌I-丝束蛋白，而且特异 性释放其至癌组织之外，这在后文详细描述，且其在本专利技术方法的生物学样品中的浓度与 在健康人体中确定的参考值相比增加。 在远离或非远离肿瘤的生物学样品中确定I-丝束蛋白的存在使得可以推断查找 的病变。本专利技术方法的一个优势是可以使用远离潜在肿瘤的样品作为诊断样品，从而可以 进行简便且非侵入性诊断，而组织学诊断需要进行侵入性活组织检查。事实上，例如对组织 切片进行的组织标记物的研究(免疫组织化学)也许具有预后意义，但是对于筛选或者诊 断结肠直肠癌无意义。 I-丝束蛋白标记物(Swiss Prot No. Q14651,也称作肠特异性丝束蛋白或者丝 束蛋白1)属于人丝束蛋白家族，该家族具有三个代表性成员I-丝束蛋白、L-丝束蛋白 和T-丝束蛋白。 一些作者将丝束蛋白类称为"微丝结合蛋白类(Fimbrins)"，另一些作 者将I-丝束蛋白称为微丝结合蛋白。丝束蛋白类是结合肌动蛋白形成细胞骨架的蛋白4质。它们是70kDa蛋白质，在真核生物进化中相对良好保守。它们呈现出良好组织特异性， 在一个时期仅一种同种型在正常组织中存在3。丝束蛋白类在癌症中的应用已经在专利 US-A-5360715中描述，该专利提议了一种确定细胞是造血细胞还是血管发生性即癌性细胞 的方法。这种方法要求在细胞水平测定L-丝束蛋白和T-丝束蛋白，更特别是测定其mRNA。 然而，尽管呈现这些性质，但是先前未进行研究以评估丝束蛋白在使用血清或粪便样品诊 断结肠直肠癌中的重要性。此外，从未设想I-丝束蛋白作为本文档来自技高网...

【技术保护点】
通过确定得自疑似患有结肠直肠癌的患者的生物学样品中Ⅰ－丝束蛋白标记物的存在而体外诊断结肠直肠癌的方法。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M阿尔潘，N巴塔伊普瓦罗，C博利厄，JP沙里耶，G肖凯凯斯狄拉维斯基，
申请(专利权)人：生物梅里埃公司，国立科学研究中心，居里研究院，
类型：发明
国别省市：FR[法国]