由蛋黄抗体制成的免疫共轭物及其成型方法和在诊断和治疗中的应用技术

本发明专利技术涉及来自蛋黄抗体（ＩｇＹ）中的免疫共轭物及其成型方法和在诊断和治疗中的应用。本发明专利技术的一个目的就是推出一种传统免疫共轭物的替代产品，用于诊断和治疗。就纯度和抗原靶向而言，根据本发明专利技术制备的免疫共轭物优于单克隆抗体和来自哺乳动物中的免疫血清以及优于来自常规鸡的ＩｇＹ制备物。如果有可能，人抗ＩｇＹ抗体的产生将会被避免，免疫共轭物以公正地对待动物保护的方式大量经济的产生。根据本发明专利技术，通过来自ＳＰＦ鸡，优选转基因ＳＰＦ鸡的完整蛋黄抗体（ＩｇＹ）的多克隆ＩｇＹ共轭物，ＩｇＹ片段，Ｆａｂ结构或人源化的蛋黄抗体可以完成此目的。抗原或抗原片段将作为免疫有效成分和至少另外一种的成分结合在一起，另外一种成分可以是信号物质，和活性剂或加强分子。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】根据权利要求1、13、14和16，本专利技术涉及由蛋黄抗体制成的免疫共轭物及其成型方法和在诊断和治疗中的应用。为了更好地理解本专利技术，当本领域中的术语出现在申请中时，将会被详细的定义，在本申请中，这些术语不会有别的意思。“无特定病原体鸡”(简称“SPF鸡”)根据欧洲药典和DAB10的指南，这些“SPF鸡”是从SPF母鸡遗传下来的动物，从它们生下来的第一天，就保持在SPF状态。这些动物不含人和禽病原体及它们的抗体。“IgY”(免疫球蛋白蛋黄)这是从禽蛋蛋黄中提取出来的免疫球蛋白，和鸡血清中的IgG相对应。这些禽免疫球蛋白在结构上和哺乳动物IgG有区别，主要表现在分子量高于后者，这是因为IgY的Fc片段中恒定区数比后者多。“特异的IgY”它在这里指的是整个IgY中能识别用于免疫的抗原的部分，而非特异的IgY指的是整个IgY中和免疫无关的部分，它是动物和抗原作用物质或非病原体和病原体的接触中形成的。“完整抗体”它们可以理解为未片段化的免疫球蛋白，即它们含有一个Fc片段和2个Fab片段，Fc片段包括重链的恒定区，而Fab片段则包括重链和轻链的可变区。“IgY片段”在本专利技术中，它的含义是禽免疫球蛋白中不含或含一小部分残余Fc片段的Fab片段。出于简单，后文中的的术语“Fab”也可指诸如F(ab)2这样的片段。“Fab结构”术语“Fab结构”定义的是把2或多个不同的Fab片段合成在一起形成的结构(2价或3价结构等)，它能识别1或多个不同的抗原决定位点(单，双或三特异性结构等)，因此能满足1或多种功能，换句话说，它们具单、双和三功能。“抗原决定位点”这是一个位于抗原上的分子结构，能被抗体特异性地识别(也叫“表位”)。“IgY制备物”它们可被理解成蛋黄抗体(IgY)，IgY片段，Fab结构或如果需要，也可理解成从蛋黄中提取和纯化的嵌合蛋黄抗体。“信号物质”它们指的是能对病理或生理结果以可视或成像的方式进行分析评价的一类物质。“活性剂”它指的是治疗上可用的物质，例如酶，抗生素，病毒抑制剂，细胞毒素如毒素或放射性核素，不排除也具有信号物质性质的活性剂。“前体药物”它的定义是在体内从无活性的前期物质原位转化成活性剂的一类物质。“加强免疫”和“维持免疫(replenishment immunization)”这个术语将会和SPF鸡的免疫一起提及。加强免疫是用来获得最大的IgY效价。维持免疫的含义指的是通过接触更新抗原，从而使IgY的效价直到产卵期末均能保持最大。基于小鼠(鼠源MAK)或人(人MAK)的单克隆抗体的免疫共轭物是众所周知的。把信号物质(染料，氟化铬，诊断用放射性核素)或活性剂(如毒素，治疗用放射性核素，光敏剂，前体药物)结合抗体的许多方法已得以建立。这使得用ELISA，RIA，荧光显微术，脉冲细胞计量术，闪烁照相术，SPECT(单光子发射计算的断层显像)，PET(正电子发射断层显像)和光子免疫诊断等方法进行检测或用放射免疫疗法，免疫毒素疗法或光动力学疗法等方法进行治疗成为可能。单克隆抗体的不利之处主要是抗体的单特异性及其相对复杂和昂贵的研究和成型(confectioning)。一般而言，单克隆抗体的成型必须在发酵罐中进行，因为利用小鼠腹水来生产单克隆抗体在许多国家是被禁止的。哺乳动物(如绵羊，马，猪等)的多克隆免疫血清和免疫过的/受感染的供体(如来自HIV感染的p24抗体效价高的人的血)在不同的诊断过程及被动免疫疗法中均是重要的。从改善复杂抗原的靶向来看，这些免疫血清的单克隆性是有用的。然而，哺乳动物或常规鸡中的免疫血清含有相对少的确定的多特异性抗体混合物，其中所需的特异性抗体占一小部分，而非特异、因此也是不需要的抗体则占主要部分。从动物保护角度来说，从哺乳动物中获得免疫血清几乎不可接受，原因是这种做法在若干国家很大程度上被禁止。从人血捐赠者中获取免疫血清是昂贵的，也不是绝对没危险的(传播病毒，如HIV，HCV，甚至可能是朊病毒)，同时也涉及到伦理问题，因此，从宽的应用范围来说，这种做法不可行。在这些蛋黄抗体(IgY)中，禽源多克隆抗体也是众所周知的。当前，由不同制造者提供的IgY在用于体外诊断时，可以作为哺乳动物免疫血清或单克隆抗体的一种替代抗体。专业文献也提及到了如何将蛋黄抗体和生物素，FITC或辣根过氧化物酶(POD)偶联，从而使其在体外诊断中有用的例子(Schade等，2001)。口服常规鸡的禽源抗体也是众所周知的。人用药的肠胃外施用方式迄今大都是避免的，一方面是由于种系间隔，哺乳动物IgY既不能和补体因子C1，也不能和Fc受体偶联，这样它就不能有效地和哺乳动物防卫系统相互作用，另一方面是因为IgY可能会引起过敏反应。此外，从常规鸡的蛋黄中获得IgY也无效率，而从纯度和亲和力来说，这种IgY质量次。原因是常规鸡会形成许多针对别的微生物作用的非特异性抗体，而对靶免疫源的应答也就相对弱，持续时间短。由于这个原因，在常规鸡的免疫中，相对全部IgY，特异性IgY的比例远小于10％(美国专利4,550,019，Hansen等，1998；Bouhours等，1998，Gassmann等，1990)。本领域最接近的现有技术在一个德国专利说明书195 04 755中所描述，它涉及用IgY对HIV感染进行被动免疫治疗。来自特异性(SPF)鸡的IgY被靶向到HIV核心抗原p24和p17上。用人免疫血清进行被动免疫疗法也是众所周知的。和免疫血清与单克隆抗体相比，IgY的获得更容易和更便宜。用实施例2所述的免疫方案进行基础免疫和加强免疫的SPF鸡每个星期将会产5-7个蛋，时间长达16个月。因为凭经验，一个蛋黄包含至少50mg具所需特异性的IgY，就此而论，从250-350个SPF鸡蛋中，能获得大约15000mg的特异性IgY。此外，由于对这些动物规定了一些特异性处理，SPF鸡所受的污染显著低于农场用来产肉和产蛋的普通鸡。因此，抗多达19种在常规鸡养殖中常见的具商业意义的传染病的通常主动免疫，包括两次规定的接种也被消除了。这些免疫说明常规鸡IgY制备物的低质量及分离特异性IgY的复杂性和费用。SPF鸡的饲养场所没有人和禽病原体病菌。为了排除食物中的病原菌，水和免疫状态都是调节控制的。为了防止动物SPF的隐匿状态，食物没加抗生素。从医学角度来说，IgY的优点一般在于特异性抗体对若干抗原决定簇的识别，这样就能保证改善目标抗原的靶向，因为抗体是来自禽类，以及在于禽类的免疫系统与哺乳动物和人的免疫系统在抗原识别方面是有差异的事实。由于禽类免疫系统能识别(系统发生上调节的)与人免疫系统不同的抗原决定簇，这样就增强了目标抗原的靶向作用。因此，病人身上天然存在的抗体和禽类体内抗体之间对表位的竞争就会下降。而且，禽类抗原既不能和人补体系统也不能和Fc受体，蛋白A或蛋白G作用，这种假定的缺点在许多情况下并不显著，甚至于变成了优点。本专利技术的目的就是开发和利用传统的免疫共轭物的替代物，它们适用于诊断和治疗，并且从纯度和抗原靶向来说，要优于单克隆抗体和哺乳动物的免疫血清以及常规鸡的IgY制备物。此外，基本上不会形成人抗IgY的抗体，而且大量制备免疫共轭物是有成本效益的，也符合动物保护。在本专利技术描述之前，还有一些术语将会被定义，以便于在后面的本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
蛋黄抗体（ＩｇＹ）的免疫共轭物，其组成为来自转基因ＳＰＦ鸡或根据欧洲药典和ＤＡＢ１０的无特定病原体（ＳＰＦ）鸡的蛋中的多克隆ＩｇＹ制备物，形成具有人ＩｇＧ恒定区的多克隆ＩｇＹ，以及至少一种信号物质和／或活性剂和／或加强分子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：沃尔夫冈贝格特，哈特穆特科比尔克，
申请(专利权)人：沃尔夫冈贝格特，哈特穆特科比尔克，约阿基姆斯罗卡，
类型：发明
国别省市：DE[德国]