磁性微粒大量提取ＤＮＡ的方法技术

本发明专利技术涉及纳微米材料的应用领域，具体涉及一种利用磁性微粒从生物样品中大量快速抽提基因组ＤＮＡ的方法。该方法具体步骤是：（１）裂解生物样品：取一定量血液、组织等生物样品，加入蛋白酶Ｋ溶液和浓度为４～６Ｍ的盐酸胍裂解液，混匀后于５６℃水浴中充分裂解５～２０ｍｉｎ；（２）在样品裂解液中加入结合液形成含磁性微粒－ＤＮＡ复合物的混合溶液；（３）将磁性微粒－ＤＮＡ复合物从混合溶液中分离；（４）清洗；（５）洗脱：加入洗脱液，使ＤＮＡ从磁性微粒上洗脱下来，在外加磁场作用下将磁性微粒和洗脱下来的ＤＮＡ分离，收集上清，即得纯化的ＤＮＡ。本发明专利技术可满足从大样本量中成功提取高纯度的ＤＮＡ；不需要离心机等大型仪器，操作步骤简便，时间短。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及纳微米材料的应用领域，具体涉及到分子生物学中，利用磁性微粒从 生物样品中快速抽提纯化大量基因组DNA。
技术介绍
核酸提取是许多分子生物学技术中的关键步骤，由于对纯度、完整性等要求，其提 取方法尤为重要。目前，提取DNA的方法多种各样。传统的酚-氯仿液相抽提法，操作繁琐 费时，使用溶液具有毒性；而新的固相提取法，较之操作简便，无毒环保。 关于核酸的固相提取法，已报道的方法包括利用硅表面、玻璃、离子交换树脂或 者经过修饰的磁珠等特异的吸附DNA。其中，中国专利CN 12430100、 CN 101033484A、 CN 1706959A、CN 101165182，需要使用离心机等大型仪器，提取过程长；CN 101173274A采用 滤器，滤膜等耗材，成本较高。 已有文献报道资料(如核壳型磁性纳米微球的制备及在核酸提取中的应用，现 代生物医学进展，2009，9 :470-474)，所提取血液的样品量都在200 iil以下。已有的核酸自 动提取仪，如欧达科仪MP-120，处理样品容量在20 200 ii 1，百维信Lab-Aid 800处理样 品容量在100 1000 i本文档来自技高网...

【技术保护点】
磁性微粒从生物样品中大量提取ＤＮＡ的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：　　（１）裂解样品：取一定量血液或组织样品，加入蛋白酶Ｋ溶液和浓度为３～６Ｍ的盐酸胍裂解液，混匀后于５６℃水浴中充分裂解５～２０ｍｉｎ；所述血液样品体积为１～１０ｍｌ，组织样品为１００～１０００ｍｇ；　　（２）形成含磁性微粒－ＤＮＡ复合物的混合溶液：取０．４～６ｍｇ磁性微粒与结合液混合，并加入到裂解后的溶液中，振荡混匀，于室温充分结合，形成含磁性微粒－ＤＮＡ复合物的混合溶液；　　（３）将磁性微粒－ＤＮＡ复合物从混合溶液中分离：将混合溶液磁性分离，弃去上清，将磁性微粒－ＤＮＡ复合物从混合溶液中分离出来，收集；　　（４）清洗...

【技术特征摘要】
磁性微粒从生物样品中大量提取DNA的方法，其特征在于该方法包括以下步骤(1)裂解样品取一定量血液或组织样品，加入蛋白酶K溶液和浓度为3～6M的盐酸胍裂解液，混匀后于56℃水浴中充分裂解5～20min；所述血液样品体积为1～10ml，组织样品为100～1000mg；(2)形成含磁性微粒-DNA复合物的混合溶液取0.4～6mg磁性微粒与结合液混合，并加入到裂解后的溶液中，振荡混匀，于室温充分结合，形成含磁性微粒-DNA复合物的混合溶液；(3)将磁性微粒-DNA复合物从混合溶液中分离将混合溶液磁性分离，弃去上清，将磁性微粒-DNA复合物从混合溶液中分离出来，收集；(4)清洗分别用2～40ml清洗液清洗收集的磁性微粒-DNA复合物，去除蛋白和其他杂质；所述清洗液为75％乙醇；(5)洗脱在磁性微粒-DNA复合物中加入0.5～5ml洗脱液，让DNA从磁性微粒上洗脱下来，在外加磁场作用下将磁性微粒和洗脱下来的DNA分离，收集上清，即为纯化的DNA。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)血液样品，蛋白酶K溶液和 盐酸胍裂解液的体积比为5 : 1 : IO;组织样品，蛋白酶K溶液和盐酸胍...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔亚丽，南婧，安德鲁G陈，周瑞民，李芳，
申请(专利权)人：陕西北美基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]