本发明专利技术公开了一组用于强直性脊柱炎诊断的寡聚核苷酸，包括逆转录引物、探针、正向引物和反向引物，以及所述寡聚核苷酸用于微小ＲＮＡ表达量检测的用途。寡聚核苷酸包括用于检测下述微小ＲＮＡ：ｈｓａ－ｍｉＲ－１７－５Ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２６－３Ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２７－ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９－ａ的探针和引物。本发明专利技术进一步提供了包含上述寡聚核苷酸的试剂盒及检测方法，对强直性脊柱炎患者的微小ＲＮＡ进行杂交检测，能检测出患者样本中上述微小ＲＮＡ的表达量高于正常人，可作为强直性脊柱炎的诊断试剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一组微小核酸的用途，尤其是涉及hsa-miR-17-5p 、 hsa-miR-126-3p、 hsa-miR-27_a、 hsa-miR-29-a作为生物标记物的应用，属于 生物医学材料
技术介绍
近几年来，从植物、线虫到人的细胞中广泛存在一种非编码的单链RNA小分 子(micro脂A — miRNA )，它们能以不完全互补的方式与其靶mRNA的3'非翻 译端特定区域相互作用，抑制蛋白质的合成。1993年Lee等采用经典克隆方法 在线虫中首次克隆了 lin-4基因，通过点突变的方法证实小分子RNA的存在。2000 年Reinhart等在人和果蝇中发现了 let-7基因的存在，于是推测这类小分子可 能是一类进化上保守，在生命过程中起重要作用的调节分子。随后人们在植物、 线虫、果蝇和哺乳动物中己发现了一千多个miRNA基因。小RNA的研究给我们带 来重要的启迪是基因组非组蛋白编码区蕴含着重要的生命功能活动信息。现有研 究表明生命的一些重要活动如幼虫的生长发育、细胞的发生和分化、神经系统的 分化等都被一些非蛋白编码小RNA的调控;而除miRNA, siRNA以外的小RNA我们 更是知之甚少。长期以来，有关基因的研究重点都在蛋白编码基因上，而小RNA 的发现和研究对揭示基因的表达调控机制，让我们更为深入的了解生命之奥秘无 疑具有重大的科学价值。据统计，miRNA在人类基因组中约占1%的数量，在不同的时空发育阶段表达 量存在显著差异。Bartel等(Ambros V， Bartel B, Bartel DP, Burge CB， Carrington JC，Chen X， Dreyfuss q Eddy SR， Crriffiths_Jones S， Marshall M， Matzke M， Ruvkunq Tuschl T.)提出,由于miRNA与耙miRNA互补程度不同， 起着切割或微弱抑制作用。由于其作用靶点的多寡，miRNA表达量亦不同，通过 基因芯片技术，可以同时检测所有miRNA时空表达的状况。在此基础上，寻找 mi認A耙基因，揭示其作用机制是目前研究的重点，也是后基因组时代需要解决 的问题之一。全部miRNA基因功能的揭示可能会给人们对生命现象的理解带来一 场深刻的革命。5目前的研究已经发现多种miRNA与疾病的发生有关。如MiR-15a在白血病细 胞中有调控作用(MiR-15a and miR-16-l cluster functions inhuman leukemia. Calin GA， Cimmino A, Fabbri M， et al. Proc Natl Acad Sci USA. 2008， 1; 105(13) :5166-71.)。有研究表明，MiR-15a通过耙向BCL2诱导凋亡(miR-15 and miR-16 induce apoptosis by targeting BCL2. Cimmino A， Calin GA, Fabbri M， et al. Proc Natl Acad Sci USA. 2005， 27; 102 (39) : 13944-9. )。 MiR-342 在多发性骨髓瘤骨髓微环境调控中起重要作用(An integrative genomic approach reveals coordinated expression of intronic miR-335， miR—342， and miR_561 with deregulated host genes in multiple myeloma. Ronchetti D, Lionetti M， Mosca L， et al. BMC Med Genomics. 2008， 13; 1 (1) :37.)，在结 肠癌中可通过宿主基因的表观遗传学改变被沉默(Epigenetic silencing of the intronic microRNA hsa-miR-342 and its host gene EVL in colorectal cancer. Grady WM，Parkin RK，MitchellPS，etal.Oncogene. 2008， 19:27(27) :3880-8.)。其他如let-7a， miR-98， miR-17-5p也在各种肿瘤中被广 泛研究。MiR-17-5p被研究的较广泛较多，可通过与其他miRNA相互作用发挥 作用。MiR-17-5p通过抑制AIB1 mRNA的翻译调控乳腺癌细胞增殖(Mir-17-5p regulates breast cancer cell proliferation by inhibiting translation of AIB1 mRNA.Hossain A，Kuo MT,Saunders GF.Mol Cell Biol. 2006:26(21) :8皿-201. )。 MiR-17-5p拮抗剂可以通过上调p21和BIM抑制难治 性神经母细胞瘤的生长(Antagomir-17-5p abolishes the growth of therapy-resistant neuroblastoma through p21 and BIM. Fontana L， Fiori ME, Albini S， et al. PLoS ONE. 2008 May 21 ;3(5) :e2236. )。 Mir-29a在艾滋病 中靶向重要的基因nef基因，在延缓疾病进展中起重要作用(Targets for human encoded microRNAs in HIV genes. Hariharan M， Scaria V， Pillai B， et al. Biochem Bi叩hys Res Commun. 2005， 2;337 (4) : 1214-8.)。在散发的早老性痴 呆患者中，miR-29a的缺失与BACEl/ P分泌酶的表达增加相关(Loss of microRNA cluster tniR-29a/b-l in sporadic Alzheimer's disease correlates with increased BACEl/beta-secretase expression. Related Articles, H6bert SS, Horr6K，Nicola'iLetal.ProcNatlAcadSci USA. 2008, 29:105(17):6415-20.)。强直性脊柱炎由于该病一般先侵犯骶髂关节，并重点累及脊柱，最终导致脊6柱骨性强直，故目前国内外多称之为强直性脊柱炎(AnkglosingSpondytitis)， 简称AS。强直性脊柱炎是一种严重威胁人类健康的疾病，本病在不同人种、不 同地区发病率不尽相同，平均患病率约占人口的O. 1%。本病多发于16-25岁人 群，男女性别比例约为10: 1。目前，强直性脊柱炎的诊断仍沿用1966年纽约 标准，或1984年修订的纽约标准，条件如下纽约标准(1966年)有X片证实的双侧或单本文档来自技高网...
【技术保护点】
微小核酸ｈｓａ－ｍｉＲ－１７－５Ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２６－３Ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２７－ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９－ａ作为强直性脊柱炎诊断标志物的应用。
【技术特征摘要】
1.微小核酸hsa-miR-17-5P、hsa-miR-126-3P、hsa-miR-27-a、hsa-miR-29-a作为强直性脊柱炎诊断标志物的应用。2. —组寡聚核苷酸，其特征在于包括逆转录引物、探针、正向引物和反向引物，并用于 通过荧光实时定量PCR法检测hsa-miR-17-5P、 hsa-miR-126-3P 、 hsa-raiR-27-a或 hsa-miR-29-a的表达。3. 如权利要求2所述的寡聚核苷酸，其特征在于，具有Seq ID No 5 36的序列， <table>table see original document page 2</column></row><table><table>table see original document page 3</column></row><table>其中RT-Primer为逆转录引物，Probe为探针，F-Primer为正向引物，R-Primer为反向 引物。4. 权利要求2或3所述的寡聚核苷酸，其特征在于所述探针5'端连接荧光报告基团，3' 端连接对应的荧光淬灭基团。5. 权利要求4所述的寡聚核苷酸，其特征在于所述探针5'端连接的荧光报告基团为 6-羧基-荧光素，3'端...
【专利技术属性】
技术研发人员：古洁若，张佩琢，段春晓，李志甲，
申请(专利权)人：苏州吉玛基因药物科技有限公司，古洁若，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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