本发明专利技术提供了一种紫薇微卫星ＤＮＡ分子标记，其包括１２个紫薇的微卫星位点。本发明专利技术还提供了该紫薇微卫星ＤＮＡ分子标记的筛选方法及其在鉴定紫薇与尾叶紫薇远缘杂交后代中的应用。此外，本发明专利技术还提供了扩增该１２个紫薇微卫星位点的引物序列和扩增方法，同时筛选出２个适用于鉴定紫薇品种‘俏佳人’、‘白云映霞’、‘ＸＴＳＣ３’、‘粉蝴蝶’、‘多花粉’和尾叶紫薇杂交后代的ＤＮＡ分子标记，建立了紫薇微卫星ＤＮＡ分子标记技术体系，在紫薇与尾叶紫薇育种实践中，利用这些ＤＮＡ分子标记可以快速鉴定种间杂交后代的真实性，提高紫薇种质创新和杂交育种效率，重复性好，是一种可靠有效的ＤＮＡ分子标记。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及DNA分子标记技术，具体地说，涉及一种紫薇微卫星DNA分子标记以及 利用该标记鉴定紫薇与尾叶紫薇远缘杂交后代的方法。
技术介绍
紫薇(Lagerstroemia indica)，属千屈菜科(Lythraceae)落叶灌木或小乔木,树 皮光滑，花淡红、紫色或白色，径3-4厘米，圆锥花序，花瓣6，皱缩，具长爪，花期6-9月，果期 9-12月。紫薇花期长，观赏性强，盛开在夏季，有长达1600多年的栽培历史。目前全世界约 有紫藏品禾中 260 个(DIX，2005，Cultivars and names ofLagerstroemia, http: //www. usna. usda.gov/ ；ZHANG,1991,Studies oncultivars of Crape-Myrtle(Lagerstroemia indica) and their uses in urbangreening，Journal of Beijing Forestry University,13 (4) 59 68 ；张启翔等，2008，我国紫薇品种调查研究，中国园艺学会观赏园艺专业委员会学术 年会论文集，56 65)，大多花色鲜艳、开花繁密，但未见有关培育芳香紫薇品种或早花紫 薇品种的报道。尾叶紫薇(Lcaudata)为紫薇属落叶大乔木，花期4_5月，花芳香。利用尾 叶紫薇与紫薇进行远缘杂交，可培育出具有花香、早花性状的紫薇品种。研究表明紫薇具有一定的自交亲和性(POUNDERS等，2006，Comparison of self—and cross-pollination on pollen tube growth, seeddevelopment, and germination in crapemyrtle, HortScience, 41 (3) :575 578),因此杂交后代可能混杂有 部分自交后代。另外，尾叶紫薇和部分紫薇品种的播种实生苗开花需要2 3年时间，这些 因素导致紫薇育种工作进展缓慢。利用分子标记手段对杂交后代进行早期鉴定可以提高后 代选择效率、缩短育种周期。简单重复序列(simple sequence repeat, SSR), 也称微卫星 DNAOiiicrosatellite)，是一种由2 5个核苷酸为单位多次串联重复的长达几十甚至几百 个核苷酸的序列。这些序列广泛存在于真核生物基因组的不同座位上，每个座位重复单位 的数量可能不完全相同，因而形成多态性。由于其具有多态性丰富、重复性高、共显性遗传 等优点，被广泛应用于植物的杂种后代鉴定、遗传多样性分析、指纹图谱构建等领域。有研 究者利用SSR标记对紫薇和大花紫薇(L. speciosa)远缘杂交后代进行亲子鉴定(Pounders 等，2007, Evaluation ofInterspecific Hybrids between Lagerstroemia indica and L. speciosa. HORTSCIENCE, 42 (6) 1317 1322)。目前已发表的紫薇 SSR 位点只有 15 个， 无法利用这些SSR位点有效地开展紫薇和尾叶紫薇远缘杂交的分子标记辅助育种工作。因 此，开发全新的、多态性高的SSR标记在紫薇育种方面具有十分重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种紫薇微卫星DNA分子标记。本专利技术的另一目的是提供上述DNA分子标记的筛选方法。本专利技术的还一目的是提供上述DNA分子标记在鉴定紫薇与尾叶紫薇远缘杂交后代中的应用。本专利技术的再一目的是提供上述DNA分子标记在紫薇筛选或辅助育种中的应用。本专利技术更进一步的目的是提供紫薇品种‘俏佳人’、‘白云映霞’、‘XTSC3’、‘粉蝴 蝶’、‘多花粉’与尾叶紫薇杂交后代的DNA分子标记。为了实现本专利技术目的，本专利技术的一种紫薇微卫星DNA分子标记，其中扩增所述分 子标记的引物选自如下引物对1)CI3F F 5' -GAATCAATTACTTTGGGTTG-3‘CI3F R 5' -TGCCTTGTCTACGGTTTT-3‘2)CI5D F 5' -GATTCCCTCCTCCCATTC-3‘CI5D R 5' -TTGAGCCGTCTCGTGTCT-3‘3)CI5G F 5' -CTCTCAAATGACCCTCTT-3‘CI5G R 5' -TTGAGTAATAACAAGTCCC-3‘4)CI6H F 5' -GAGTTCATGCAGTTAGGT-3‘CI6H R 5' -ATATCGGATTTATCTTCC-3‘5)CI7H F 5' -TCTACCTGGGAAATGTTA-3‘CI7H R 5' -GTTGAGTCCTCCTCTGTT-3‘6)CII1A F 5' -GGAAGAGGGATTGGAACC-3‘CII1A R 5' -TCTCACTGAAAGAAACTA-3‘7)CII1C F 5' -ACGGTAGATAAGGTGAGC-3‘CII1C R 5' -GGTTTCGTATCGTCGTAG-3‘8)CII1D F 5' -TACTGGGTATCCGTTTCT-3‘CII1D R 5' -ACAGGTGCATTTACTTCC-3‘9)CII1E F 5' -TGATGGTGGTAATGCTGGTG-3‘CII1E R 5' -TCTTCTATAGGCCCATGCAG-3‘10)CII6A F 5' -TCCGAGTCTGACAGAGGT-3‘CII6A R 5' -TATAACGGGTGTATGAAG-3‘11)CII7E F 5' -TTCTGACCCAGCAGTAAA-3‘CII7E R 5' -CGTATCTCATCTGTAGCGTA-3‘12)CII12HF 5' -GGGAATTTGGGATATGGA-3‘CII12HR 5' -TAAAGAAACGACCGAGCC-3‘前述的DNA分子标记，其选自编号分别为CI3F、CI5D、CI5G、CI6H、CI7H、CII1A、 CII1C、CII1D、CII1E、CII6A、CII7E、CII12H 的核苷酸序列，所述核苷酸序列如 SEQ ID No. 1 至 SEQ ID No. 12 所示。本专利技术的一种紫薇微卫星DNA分子标记的筛选方法，其包括以下步骤(1)提取紫薇基因组DNA，用内切酶Rsa I进行酶切，得到大小为300 lOOObp的 DNA片段；(2)将寡核苷酸 SuperSNX24F(5，-GTTTAAGGCCTAGCTAGCAGAATC-3，)和末端磷酸化 的 SuperSNX24R(5，-pGATTCTGCTAGCTAGGCCTTAAACAAAA-3，)等摩尔混合，形成接头；(3)将步骤⑵的接头与步骤(1)的酶切产物连接；4(4)以SuperSNX24F为引物，步骤(3)的连接产物为模板，进行PCR反应，富集大小 为300 IOOObp的DNA片段；(5)合成 3，Biotin 标记的探针 20 种，分为三组，按照[Group2 = (AG)12, (TG)12, (AAC)6, (AAG)8, (AAT)12, (ACT)12, (ATC)8 ；Group3 = (AAAC)本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种紫薇微卫星ＤＮＡ分子标记，其特征在于，扩增所述分子标记的引物选自如下引物对： １）ＣＩ３Ｆ Ｆ：５′－ＧＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＴＴＴＧＧＧＴＴＧ－３′ ＣＩ３Ｆ Ｒ：５′－ＴＧＣＣＴＴＧＴＣＴＡＣＧＧＴＴＴＴ－３′ ２）ＣＩ５Ｄ Ｆ：５′－ＧＡＴＴＣＣＣＴＣＣＴＣＣＣＡＴＴＣ－３′ ＣＩ５Ｄ Ｒ：５′－ＴＴＧＡＧＣＣＧＴＣＴＣＧＴＧＴＣＴ－３′ ３）ＣＩ５Ｇ Ｆ：５′－ＣＴＣＴＣＡＡＡＴＧＡＣＣＣＴＣＴＴ－３′ ＣＩ５Ｇ Ｒ：５′－ＴＴＧＡＧＴＡＡＴＡＡＣＡＡＧＴＣＣＣ－３′ ４）ＣＩ６Ｈ Ｆ：５′－ＧＡＧＴＴＣＡＴＧＣＡＧＴＴＡＧＧＴ－３′ ＣＩ６Ｈ Ｒ：５′－ＡＴＡＴＣＧＧＡＴＴＴＡＴＣＴＴＣＣ－３′ ５）ＣＩ７Ｈ Ｆ：５′－ＴＣＴＡＣＣＴＧＧＧＡＡＡＴＧＴＴＡ－３′ ＣＩ７Ｈ Ｒ：５′－ＧＴＴＧＡＧＴＣＣＴＣＣＴＣＴＧＴＴ－３′ ６）ＣＩＩ１Ａ Ｆ：５′－ＧＧＡＡＧＡＧＧＧＡＴＴＧＧＡＡＣＣ－３′ ＣＩＩ１Ａ Ｒ：５′－ＴＣＴＣＡＣＴＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＡ－３′ ７）ＣＩＩ１Ｃ Ｆ：５′－ＡＣＧＧＴＡＧＡＴＡＡＧＧＴＧＡＧＣ－３′ ＣＩＩ１Ｃ Ｒ：５′－ＧＧＴＴＴＣＧＴＡＴＣＧＴＣＧＴＡＧ－３′ ８）ＣＩＩ１Ｄ Ｆ：５′－ＴＡＣＴＧＧＧＴＡＴＣＣＧＴＴＴＣＴ－３′ ＣＩＩ１Ｄ Ｒ：５′－ＡＣＡＧＧＴＧＣＡＴＴＴＡＣＴＴＣＣ－３′ ９）ＣＩＩ１Ｅ Ｆ：５′－ＴＧＡＴＧＧＴＧＧＴＡＡＴＧＣＴＧＧＴＧ－３′ ＣＩＩ１Ｅ Ｒ：５′－ＴＣＴＴＣＴＡＴＡＧＧＣＣＣＡＴＧＣＡＧ－３′ １０）ＣＩＩ６Ａ Ｆ：５′－ＴＣＣＧＡＧＴＣＴＧＡＣＡＧＡＧＧＴ－３′ ＣＩＩ６Ａ Ｒ：５′－ＴＡＴＡＡＣＧＧＧＴＧＴＡＴＧＡＡＧ－３′ １１）ＣＩＩ７Ｅ Ｆ：５′－ＴＴＣＴＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧＴＡＡＡ－３′ ＣＩＩ７Ｅ Ｒ：５′－ＣＧＴＡＴＣＴＣＡＴＣＴＧＴＡＧＣＧＴＡ－３′ １２）ＣＩＩ１２ＨＦ：５′－ＧＧＧＡＡＴＴＴＧＧＧＡＴＡＴＧＧＡ－３′ ＣＩＩ１２ＨＲ：５′－ＴＡＡＡＧＡＡＡＣＧＡＣＣＧＡＧＣＣ－３′...
【技术特征摘要】
一种紫薇微卫星DNA分子标记，其特征在于，扩增所述分子标记的引物选自如下引物对1)CI3F F5′-GAATCAATTACTTTGGGTTG-3′CI3F R5′-TGCCTTGTCTACGGTTTT-3′2)CI5D F5′-GATTCCCTCCTCCCATTC-3′CI5D R5′-TTGAGCCGTCTCGTGTCT-3′3)CI5G F5′-CTCTCAAATGACCCTCTT-3′CI5G R5′-TTGAGTAATAACAAGTCCC-3′4)CI6H F5′-GAGTTCATGCAGTTAGGT-3′CI6H R5′-ATATCGGATTTATCTTCC-3′5)CI7H F5′-TCTACCTGGGAAATGTTA-3′CI7H R5′-GTTGAGTCCTCCTCTGTT-3′6)CII1A F5′-GGAAGAGGGATTGGAACC-3′CII1A R5′-TCTCACTGAAAGAAACTA-3′7)CII1C F5′-ACGGTAGATAAGGTGAGC-3′CII1C R5′-GGTTTCGTATCGTCGTAG-3′8)CII1D F5′-TACTGGGTATCCGTTTCT-3′C...
【专利技术属性】
技术研发人员：张启翔，蔡明，潘会堂，王学凤，宋平，高亦珂，孙明，程堂仁，田苗，王敏，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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