一种用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，其特征在于：将射干药材水提取２－３次，滤过，合并滤液；回收合并后的滤液中提纯所用水，并加入乙醇沉淀，上清液回收乙醇，浓缩至无醇味；上于苯乙烯类大孔吸附树脂上，水洗脱，再经两次乙醇洗脱，收集最后一次的乙醇洗脱液，减压干燥至干。本发明专利技术的优点：采用现代分离手段，获得了药物作用的有效部位；对方中的主要成分采用色谱法进行鉴别和含量测定，提高产品的质量标准；解决临床用药制剂粗糙，存放、包装、携带不便，产品稳定性差等不利因素，提高产品的稳定性和临床疗效。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中医药领域。
技术介绍
流感是由流感病毒引起的一种严重危害人类健康的急性病毒性呼吸道传染病，具有发病率高、传播快、流行性广、变异性大的特点，特别是近年来禽流感的暴发，使得对抗流感病毒药物的研究具有现实意义和紧迫性。祖国医学运用中医中药治疗病毒性疾病有着悠久的历史与丰富的经验，中成药、单味草药与复方制剂都有。如治疗上呼吸道感染的中成药和复方制剂银翘散、羚翘解毒丸、银翘解毒片、复方银黄口服液、清开灵、双黄连、板蓝根冲齐U、大青叶口服液、抗腮腺炎针等品种，经过实验室研究，都具有较好的抗病毒作用。但是，尽管实验室已经显示出中药的抗流感病毒作用，而实际应用于临床的仍寥寥无几，其主要的原因是前期研究工作薄弱，药品抗病毒谱、有效成分、作用靶点不明确，而流感病毒致病的特点是种类多、起病急、来势凶猛，临床医生不可能也不敢采用作用机理及成分均不明确的中药制剂来治疗；另外由于大部分抗流感病毒中药制剂粗糙治疗指数低，临床需要大剂量服用方能达到治疗目的，大大降低了患者的顺应性。因此研制高效、特效、抗病毒谱广的现代抗病毒制剂成为当务之急。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺。 本专利技术提供一种用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，将射干药材粉碎成极粗粉，水提取2-3次，每次对射干药材水提1-2. 5小时，滤过，合并滤液；回收合并后滤液中提纯所用水，并加入乙醇沉淀，静置30 60小时，上清液回收乙醇，浓縮至无醇味；上于苯乙烯类大孔吸附树脂上，水洗脱，再依次经低、高浓度两次乙醇洗脱，收集最后一次的乙醇洗脱液，减压干燥至干，见图1。 本专利技术提供的用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，所述的水提取用5 10倍量柱体积水，优选为6倍量柱体积。 本专利技术提供的用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，所述的水洗脱为用3 6倍量柱体积水，优选为5倍量柱体积。 本专利技术提供的用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，所述的两次乙醇洗脱中的低浓度乙醇体积分数5 % 30 % ，高浓度乙醇体积分数50 % 90 % 。 本专利技术提供的用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，所述的两次乙醇洗脱的洗脱倍数依次分别为4-6倍、3-10倍。 采用本专利技术提供的制备工艺制备出的射干提取物加入淀粉适量，装胶囊即可，其中，每1000粒胶囊含射干提取物3-15g。 药效学实验 试验1.射干体外抗流感病毒FM1的作用 1. 1流感病毒FM1在MDCK细胞中组织半数感染量(TCID5。)的测定 用含胰酶的维持液将病毒稀释成1(^、102、103、1()4、105、106、107倍七个浓度。将细胞已长成单层的96孔培养板，弃去细胞生长液，用PBS冲洗三次，按200 1/孔分别加入不同浓度病毒液，每个浓度感染4孔细胞，置于35. 5°C、5% (A温箱内孵育2小时，弃去病毒液，更换含胰酶的维持液。继续培养，倒置显微镜下观察细胞病变(CPE)程度并记录，连续观察3天。同时设正常细胞对照。计算组织半数感染量(TCID5。)。 1.2射干毒性测定 用含胰酶的维持液将射干提取物连续2倍稀释成5000 ii g/ml 、 2500 y g/ml 、 1250 ii g/ml 、625 ii g/ml 、312. 5 ii g/ml 、 156 ii g/ml 、78. 1 ii g/ml 、39. 1 ii g/ml 、19. 5ii g/ml、 9.8iig/ml IO个剂量组。将细胞已长成单层的96孔细胞培养板，弃去细胞生长液，用PBS 冲洗三次，按200 1/孔分别加入不同浓度的射干提取物，每个剂量加入4孔细胞，置于 35. 5°C、5% 0)2温館内培养，每天倒置显微镜下观察细胞形态改变并记录，连续观察3天。 同时设立正常细胞对照。计算半数中毒浓度(TC5。)。 1.3病毒唑毒性测定用含胰酶维持液将病毒唑注射液稀释成浓度为800. 0 ii g/ml 、 400. 0 y g/ml 、 200. Oil g/ml、100. 00 ii g/ml、50. 00 ii g/ml、25. 00 ii g/ml、12. 50 ii g/ml、6. 25 ii g/ml、 3. 13ii g/ml、l. 56ii g/ml、0. 78ii g/ml、0. 39 ii g/ml 12个剂量组，其余同上。 1.4药物对流感病毒FM1的抑制作用 采用细胞病变抑制实验(CPEI)对射干和病毒唑进行抗流感病毒FM1作用的药效 实验。以46. 8TCID5。/200iil病毒接种MDCK细胞，35. 5°C、5% C02温箱内孵育2小时，更换 含不同浓度射干提取物和病毒唑的维持液，再置35. 5°C 、5% 0)2温箱内继续培养，观察记录 细胞病变程度(CPE)。每个药物浓度至少设4孔细胞，同时设正常细胞对照和病毒对照。计 算药物半数有效浓度(EC5。)和治疗指数(TI)。 1. 5观察指标与结果计算 观察指标细胞病变(CPE)。流感病毒在MDCK细胞中所致CPE的特征为颗粒增 多，细胞肿胀圆化，严重时出现细胞核固縮和碎裂，甚至脱落。记录每孔细胞CPE的程度0，，:表示无明显CPE'T:表示CPE为0 25%2，，:表示CPE为25 - 50%3，，:表示CPE为50 - 75%4，，:表示CPE为75 - 100%。 以CPE达25%以上者判为感染阳性。 结果计算病毒毒力根据所得数据，按Reed-Muench法计算组织半数感染量 (TCID50)。 药物毒性Reed-Muench法计算药物半数中毒浓度(TC5。)。 药物药效 1) Reed-Muench法计算药物半数有效浓度(EC5。)。 2)治疗指数(TI)=半数中毒浓度(TC5。)/半数有效浓度(EC5。)。 3)Kruskal-Wallis检验法比较药物各剂量组与病毒对照组细胞病变程度的总体分布，数据处理运用SAS软件完成。 4)以药物剂量对数为横轴，CPE抑制率为纵轴绘制散点图，求相关系数，进行相关 系数显著性检验，以判定是否存在剂量效应关系。数据处理运用SAS软件完成。 1. 6流感病毒FMl在MDCK细胞中组织半数感染量测定结果 为了解流感病毒FMl在MDCK细胞中的毒力情况，确定抗病毒药效学试验中病毒攻 击量，进行病毒毒力测定(见表1-1)。采用Reed-Muench法计算流感病毒FMl在MDCK细胞 中的TCIDs。。 表1-1流感病毒FMl在MDCK细胞中的组织半数感染量 <table>table see original document page 5</column></row><table>距离比例:大于50%的阳性百分比-5068.75-50:0.27大于50%的阳性百分比-小于50%的阳性百分比 68.75 — 0.00 TCID5。的对数=大于50%的阳性百分比的稀释对数+距离比例X稀释系数的对 数=5+0. 27X1 = 5. 27 因此，TCID5。 = 10—5' 27/200 y 1 。在本试验中病毒攻击量为46. 8TCID5。，即将病毒稀 释为10—36倍。 1. 7药物毒性测定结果本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，其特征在于：将射干药材水提取２－３次，滤过，合并滤液；回收合并后的滤液中提纯所用水，并加入乙醇沉淀，上清液回收乙醇，浓缩至无醇味；上于苯乙烯类大孔吸附树脂上，水洗脱，再依次经低、高浓度两次乙醇洗脱，收集最后一次的乙醇洗脱液，减压干燥至干。
【技术特征摘要】
一种用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，其特征在于将射干药材水提取2-3次，滤过，合并滤液；回收合并后的滤液中提纯所用水，并加入乙醇沉淀，上清液回收乙醇，浓缩至无醇味；上于苯乙烯类大孔吸附树脂上，水洗脱，再依次经低、高浓度两次乙醇洗脱，收集最后一次的乙醇洗脱液，减压干燥至干。2. 按照权利要求1所述的用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，其特征在于 每次对射干药材水提1-2. 5小时。3. 按照权利要求1或2所述的用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，其特征在 于所述的水提取用5 10倍量柱体积水。4. 按照权利要求3所述的用于治疗流感病毒的射干提取物的制备工艺，其特征在于所述的水洗脱为用3 6倍量柱体...
【专利技术属性】
技术研发人员：李国信，
申请(专利权)人：辽宁省中医药研究院，
类型：发明
国别省市：89[中国|沈阳]
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