猪抑肌素基因（ＭＳＴＮ）真核表达载体的构建制造技术

从大白猪的肌肉组织的ｃＤＮＡ中，ＰＣＲ扩增出猪抑肌素基因（Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ）全长ｃＤＮＡ序列，产物全长１１２８ｂｐ，即为猪Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ编码蛋白３７６个氨基酸序列。构建了大白猪Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ蛋白编码序列的真核表达载体ｐＰＩＣＺαＣ－ＭＳＴＮ，经ＰＣＲ、酶切和测序检测分析，片段大小与理论相符，证明构建成功。可为进一步表达具有生物活性的猪抑肌素蛋白奠定基础，也可为深入研究Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ基因的生物学特性和功能提供一个方便有效的基本材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种真核表达载体的构建，具体的说是构建了猪抑肌素基因的真核表达载体。
技术介绍
Pichia pastoris表达系统是近年来迅速发展起来的一种真核表达系统。Pichia pastoris是一种甲醇酵母，可以在以甲醇为唯一碳源和能源的培养基中生长。在表达 真核细胞外源蛋白时，不仅具有原核生物生长快、操作简便、成本低的特点，又具备哺乳 动物的翻译后加工修饰的功能，从而表达有生物活性的外源蛋白。肌肉生长抑制素基因 (Myostatin， MSTN)属TGF-P超家族，其主要功能是特异性的抑制骨骼肌细胞的增殖与分 化，是骨骼肌生长和发育的负调控因子。随着对该基因进一步了解现已发现Myostatin在 体内众多代谢调控中起着重要的作用。因此采用DNA重组技术在真核系统中表达该蛋白对 其进行研究无疑具有重要的意义。本专利技术以含有强启动子P皿i和a-factor信号肽序列的 巴斯德毕赤酵母载体质粒PPICZ a C构建猪Myostatin基因的真核表达载体。
技术实现思路
本专利技术的目的是利用已有的毕赤酵母真核表达载体，通过基因工程的方法，构建猪的抑肌素基因的真核表达载体。 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪全长Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ基因真核表达载体，其特征在于猪Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ基因的重组载体：ｐＰＩＣＺαＣ－ＭＳＴＮ，是通过以下方法构建获得的：　　（１）猪Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ基因ｃＤＮＡ的克隆测序：取猪大腿骨骼肌外侧肌肉组织，用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取总ＲＮＡ，用ＢｃａＢＥＳＴ试剂盒合成ｃＤＮＡ，连入ｐＭＤ１８－Ｔ载体，ＢａｍＨ　Ⅰ和ＨｉｎｄⅢ双酶切鉴定后，寄往测序公司测序。　　（２）Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ基因转录片段的获得：以ｐＭＤ１８－Ｔ－ＭＳＴＮ质粒为模板，进行ＣｌａⅠ和ＸｂａⅠ的双酶切，将酶切下来的片段用胶回收试剂盒回收，用于和ｐＰＩＣＺαＣ的连接反应。　　（３）ｐＰＩＣＺαＣ质粒的提取、酶切...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘娣，
申请(专利权)人：刘娣，丁镌，张冬杰，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]