一种基于微卫星指纹图谱的湖羊和无角陶塞特羊鉴别方法技术

本发明专利技术公布了湖羊和无角陶赛特羊的微卫星指纹图谱，属于分子生物学领域。其建立方法包括以下步骤：（１）湖羊和无角陶赛特羊ＤＮＡ的提取；（２）微卫星引物的筛选和扩增；（３）选择有品种特征性的引物构建指纹图谱。该ＤＮＡ指纹图谱中湖羊和无角陶赛特都有特异的ＤＮＡ指纹，因此可以将湖羊和无角陶赛特羊及其杂交品种分开。本发明专利技术ＤＮＡ指纹图谱以图的形式表现，直观、易懂。本发明专利技术能从遗传本质上对湖羊和无角陶赛特及其杂交品种进行种质鉴定，因此准确、可靠，检测迅速。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术构建了湖羊和无角陶塞特的微卫星指纹图谱，属于分子遗传学领域，适用于湖羊和无角陶塞特羊及其杂交后代的鉴定。二
技术介绍
湖羊原产我国太湖流域，素以波浪型羔皮和高繁殖力闻名于世，是我国重点保护 的绵羊品种资源。具有性成熟早、四季发情、多胎率高、肉质细嫩鲜美、耐湿热、耐粗饲等优 良特性。近年来，由于羔皮市场疲软，羊肉市场持续坚挺，纯种湖羊饲养的经济效益下降，加 之原产地太湖流域经济发达，湖羊养殖比较效益较低，因此纯种湖羊数量锐减。湖羊由于具 有高繁殖力的特性，主要作为杂交的母本利用，而无角陶赛特羊具有生长发育快、个体大、 胴体品质好和产肉性能高等特点，是常用的优良杂交父本之一。目前我国绵羊品种市场还 欠规范，用高代杂交羊以次充好，假冒伪劣的现象时有发生，由于高代杂交羊与纯种羊仅根 据形态特征对其进行鉴定有一定困难，而生产性能的鉴定周期长、费用高，因此建立一种准 确、快速、客观的鉴定方法对于肉羊产业具有重要意义，另外纯种湖羊的鉴别对于湖羊的资 源保护也具有重要价值。 随着分子生物学研究水平的快速发展，特别是微卫星分子标记技术的发展为该 问题的解决提供了技术基础。微卫星(Microsatellite)又称为简单序列重复(Short Sequence R印eat， SSR)，以2_6bp的短核苷酸为基本单位，呈串联重复状广布于生物体整 个基因组，平均每10kb就出现一个。因其在基因组中数量多、分布广、多态性丰富、易于检 测、呈共显性遗传进化、所受选择压力小等优点，已广泛应用于人类亲子鉴定、个体识别领 域。目前利用分子遗传标记研究无角陶赛特羊、湖羊等亲缘关系、遗传多样性、杂种优势及 与生产性能关联的报道较多，而利用分子标记对无角陶赛特羊和湖羊进行种质鉴定仍未见 报道。本专利技术建立纯种湖羊和纯种无角陶赛特微卫星指纹图谱，并以此为基础准确快速的 对其进行种质鉴定。三、
技术实现思路
技术问题 本专利技术的目的是克服传统的品种鉴定方法存在的准确性差、成本高以及时间长等 方面的缺陷，提供一种能快速、准确的鉴定纯种湖羊、无角陶赛特及其杂交后代的DNA指纹图谱方法。 技术方案 —种基于微卫星指纹图谱的湖羊和无角陶塞特羊鉴别方法，其特征在于采集代表性样本，筛选微卫星标记构建湖羊和无角陶赛特羊指纹图谱，以此进行湖羊和无角陶塞特羊及其杂交后代的鉴定。其步骤包括 (1)提取湖羊和无角陶赛特羊基因组DNA ; (2)采用微卫星引物，以湖羊和无角陶赛特羊基因组DNA为模板进行PCR扩增分4析； (3)选择有品种特征性的引物，即含有特异性条带能区分湖羊和无角陶赛特羊的 引物，构建微卫星指纹图谱； 所选择的具有品种特征性的微卫星引物为 MCM147 上游引物序列TCCGATGTTAGATGACTTTTGTGC 下游引物序列AGCTGGTATCTGTGTCTGTCATCC 扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得192bp和208bp的湖羊特有片断及221bp的陶赛特羊特有片断。 或BMS1248 上游引物序列GTAATGTAGCCTTTTGTGCCG 下游引物序列TCACCAACATGAGATAGTGTGC 扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得141bp的湖羊特有片断和135bp的陶赛特羊的特有片断。 或RM128 上游引物序列GTGAGGAGGAGGGGCGAGGAG 下游引物序列AGGCCTGTGAGAAGATGGTGAG 扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得114bp、121bp、123bp的湖羊特有片断和 153bp的陶赛特羊特有片断。 或ILSTS58 上游引物序列GCCTTACTACCATTTCCAGC 下游引物序列CATCCTGACTTTGGCTGTGG 扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得127bp、129bp、148bp、196bp的湖羊特有片 断和228bp的陶赛特羊的特有片断。 或BMS744 上游引物序列CCGAGTGGAGTTCACACAAC 下游引物序列CATAGGGTCACAAAGAGCTGG 扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得142bp的湖羊特有片断和152bp、159bp的陶赛特羊特有片断。 或BP28 上游引物序列AGGTGACAGGTGAGAGGGC 下游引物序列CCTCCACAACACCATCCTTC扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得214bp、226bp、229bp、231bp、233bp的湖羊 特有片断和253bp、262bp、264bp的陶赛特羊特有片断。 或ILSTS56 上游引物序列GCTACTGAGTGATGGTAGGG 下游引物序列AATATAGCCCTGGAGGATGG 扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得182bp、184bp的湖羊特有片断和170bp的陶 赛特羊特有片断。 或CHIRUC5 上游引物序列GCCTCAGGAAAGACAAAGTCAC 下游引物序列GCACCTCCACCCCTTCATA 扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得260bp、272bp、276bp、278bp、282bp、286bp的湖羊特有片断。 或BMS875 上游引物序列TCCAGCTTGAATCCCTTCC 下游引物序列AAGCAAAGGCTGGGAACAC 扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得111bp、117bp、122bp的湖羊的特有片断。 或D216028 上游引物序列TGGATCTCTTTCTCCCCACTT 下游引物序列CAGCAGTGCCCACTTGTTCT 扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得214bp、216bp、229bp、236bp的湖羊特有片 断。 有益效果本专利技术具有以下优点 (1)本专利技术创建了湖羊、无角陶塞特羊微卫星指纹图谱，公开了用微卫星指纹分析 技术对绵羊种质鉴定的研究结果，建立的方法能从遗传本质上对湖羊、无角陶塞特及其杂 交羊进行鉴定，比传统的外形鉴定准确、可靠。 (2)采用本专利技术的方法对湖羊、无角陶塞特及其杂交羊进行真实检测时，用目前广 泛应用的快速、微量DNA提取法提取待测样品DNA，进行微卫星检测，几小时内就能得到准 确的结果。 (3)由于本专利技术微卫星指纹图谱以模式图的形式表达，直观、易懂，便于应用。四附图说明 图1根据微卫星分子标记方法所绘制的湖羊DNA指纹图谱的模式图。横坐标为 所选择的具有品种特征性的引物(1-10分别为MCM147、BMS1248、RM128、 ILSTS58、 BMS744、 BP28、 ILSTS56、 CHIRUC5、 BMS875和D216028， M为Marker pUC18/MspI)，纵坐标为分子量。 图2根据微卫星分子标记方法所绘制的无角陶赛特羊DNA指纹图谱的模式图。横 坐标为所选择的具有品种特征性的引物(1-10分别为MCM147、 BMS1248、 RM128、 ILSTS58、 BMS744、 BP28、 ILSTS56、 CHIRUC5、 BMS875和D216028， M为Marker pUC18/MspI)，纵坐标为 分子量。五具体实施方式 材料与方法 ( — )样本 采用2个绵羊品种共114份耳组织样品。其中湖羊83只、陶塞特31只，均采自江 苏省，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于微卫星指纹图谱的湖羊和无角陶塞特羊鉴别方法，其步骤包括：　　１）提取湖羊和无角陶赛特羊基因组ＤＮＡ；　　２）采用微卫星引物，以湖羊和无角陶赛特羊基因组ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增分析；　　３）获得区分湖羊和无角陶赛特羊的特异性条带，从而区分湖羊和无角陶赛特羊。

【技术特征摘要】
一种基于微卫星指纹图谱的湖羊和无角陶塞特羊鉴别方法，其步骤包括1)提取湖羊和无角陶赛特羊基因组DNA；2)采用微卫星引物，以湖羊和无角陶赛特羊基因组DNA为模板进行PCR扩增分析；3)获得区分湖羊和无角陶赛特羊的特异性条带，从而区分湖羊和无角陶赛特羊。2. 按权利要求l所述的鉴别方法，其特征是， 用引物MCM147上游引物序列TCCGATGTTAGATGACTTTTGTGC 下游引物序列AGCTGGTATCTGTGTCTGTCATCC扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得192bp和208bp的湖羊特有片断及221bp的陶赛 特羊特有片断；或者用引物BMS1248上游引物序列GTAATGTAGCCTTTTGTGCCG下游引物序列TCACCAACATGAGATAGTGTGC扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得141bp的湖羊特有片断和135bp的陶赛特羊的特 有片断；或者用引物RM128上游引物序列GTGAGGAGGAGGGGCGAGGAG 下游引物序列AGGCCTGTGAGAAGATGGTGAG扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得114bp、121bp、123bp的湖羊特有片断和153bp的 陶赛特羊特有片断；或者用引物ILSTS58上游引物序列GCCTTACTACCATTTCCAGC下游引物序列CATCCTGACTTTGGCTGTGG扩增湖羊和无角陶赛特羊的DNA，获得127bp、129bp、148bp、196bp的湖羊特有片断和 228bp的陶赛特羊的特有片断； 或者用引物BMS744上游引物序列CCGAGTGGAGTTCACACAAC 下游引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹少先，曾检华，刘铁铮，孟春花，丰秀静，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]