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基于核酸外切酶Ⅲ/Ⅰ保护分析检测单核苷酸多态性的荧光生物传感方法技术

技术编号:4233964 阅读:283 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种基于核酸外切酶保护分析检测单核苷酸多态性的荧光生物传感方法,它包括小分子修饰的单个脱氧核苷酸等位特异性延伸和延伸后带有小分子的寡核苷酸DNA链引物与结合蛋白的相互作用以及核酸外切酶III/I的保护分析及基于双链指示染料进行末端保护的发夹型寡核苷酸DNA探针引物的荧光定量检测。本发明专利技术利用引物等位特异性延伸在特定引物的3’末端结合单个小分子修饰的脱氧核苷酸,在和小分子结合蛋白特异性结合保护该引物不被核酸外切酶III/I降解,通过被保护的寡核苷酸DNA引物与双链嵌合染料的复合物的荧光进行单核苷酸多态性基因分型的检测。该方法操作简便、经济快速、灵敏、特异性强,可望为基因突变相关的遗传病的人群筛查、产前诊断提供一个通用的技术平台。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于一种检测单核苷酸多态性的生物传感方法,包括小分子修饰的单个脱氧核苷酸等位特异性延伸技术,延伸后带有小分子的寡核苷酸DNA链引物与结合蛋白的相互作用以及核酸外切酶III/I的保护分析和基于双链指示染料进行末端保护的双链结构寡核苷酸DNA链的荧光定量检测。
技术介绍
人类的许多遗传疾病如a和|3地中海贫血症等都是由于单基因突变产生的。这些遗传疾病是我国最主要的出生缺陷之一,严重影响我国的人口质量,给社会与家庭带来沉重的经济负担,因此,需要建立一种快速、灵敏、特异性的检测技术。传统基因突变检测主要借助于电泳、质谱或基因芯片方法,这些方法需昂贵精密仪器,操作程序复杂,技术外延性差,分析周期长,故不适于进行大规模人群筛查与产前诊断。目前国际上的主要趋势都集中于以DNA修饰酶为基础,利用酶催化反应提高基因突变鉴定方法的忠实性、可靠性与灵敏度,发展操作简便、快速可靠、低成本、高通量的基因突变分析手段。例如,基于DNA聚合酶的等位特异性延伸或外切建立的T叫Man探针分析、单核苷酸延伸分析等,基于DNA连接酶的等位特异性连接建立的寡核苷酸连接分析、连接酶链分析等,基于DNA内切酶结构识本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于核酸外切酶Ⅲ/Ⅰ保护分析检测单核苷酸多态性的荧光生物传感方法,其特征是,该方法包括:  (1)小分子修饰的单个脱氧核苷酸等位特异性延伸和延伸后带有小分子的寡核苷酸DNA链引物与结合蛋白的相互作用以及核酸外切酶Ⅲ/Ⅰ的保护分析  (2)基于双链指示染料进行末端保护的双链结构寡核苷酸DNA链的荧光定量检测。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:蒋健晖吴战楚霞沈国励俞汝勤
申请(专利权)人:湖南大学
类型:发明
国别省市:43[中国|湖南]

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