The invention relates to a new gene recombination technique in the biological technology field. On the two sides of the target gene, the sequence of 2~12 bases is respectively introduced, and the pairing sequence and the carrier sequence of the two connecting points are respectively homologous. Selective digestion of exonuclease activity of target gene and vector generated in the absence of specific substrates by T4DNA polymerase, produce complementary sequences and complementary. The paired products are transferred directly to the host cell and are connected through related enzymes within the host cell. The technique has the advantages of short cycle, low cost, simple operation, high success rate and no requirement for internal characteristics of target genes. It is suitable for routine gene expression research and large-scale gene expression manipulation in laboratory.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是生物
的一种定向基因重组技术。
技术介绍
自上世纪70年代PCR技术和限制性内切酶发现以来，基因重组技术己经建立了一套完善 的体系，其中主要主要包括目的基因的分离，目的基因和表达载体的切割，目的基因与表达 载体的定向连接，宿主细胞的转化，阳性克隆的筛选等。目的基因和载体的连接有正向和反 向两种方式，只有正向连接的基因才能够得到正确的表达，因此建立在双酶切基础上的定向 连接是传统重组技术的核心。目的基因和载体的切割和连接是其中操作作为最为繁琐，工作周期最长，并且失败几率 最高的步骤。目前国内外很多生物技术公司陆续都开发出了用于简化操,作的试剂盒产品，比 如凝胶回收试剂盒，PCR片段回收试剂盒，酶切片段回收试剂盒，快速连接试剂盒等，但仍 然难以避免操作过程中基因片段的丢失。因此寻找更为简单的方法是必然的选择。目前人们对定向重组技术的改造主要是通过以下两种方式实现的1、 模拟自然条件下生物基因重组的原理。比如Clontech公司以同源重组为基础的 In-fusion系统，Irwitrogen公司以位点特异性重组为基础的Gateway系统等，FA斯图...
【技术保护点】
本专利技术涉及生物技术领域一种新的定向基因重组操作技术，由重组载体，目的基因、定向配对复合物和宿主细胞构成；重组载体和目的基因经过定向配对复合物处理后按照碱基互补原则定向互补配对，配对产物直接转化宿主细胞，连接反应在细胞内进行。
【技术特征摘要】
1本发明涉及生物技术领域一种新的定向基因重组操作技术，由重组载体，目的基因、定向配对复合物和宿主细胞构成；重组载体和目的基因经过定向配对复合物处理后按照碱基互补原则定向互补配对，配对产物直接转化宿主细胞，连接反应在细胞内进行。2.根据权利要求(1)中所描述的定向基因重组技术，其特征是定向重组载体来源于质 粒，粘粒，噬菌体或者病毒；定向重组载体还有重组位点，经过限制性内切酶切割后形成两 个连接点序列，分别为连接序列A和连接序列B;连接序列是由A、 T、 C、 G中任意两种或 者任意三种碱基构成的2 12bp的碱基序列。3.根据权力要求(1)中所描述的定向基因重组技术，其特征是定向目的基因为PCR 产物或者酶切后加工的产物；目的基因两侧末端含有2 12bp的连接序列a和连接序列b， 分别与权力要求2所述载体连接序列与载体中连接序列A和连接序列B同源。4....
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