【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生命科学领域，更具体地，本专利技术涉及一种胰蛋白酶消化液及其应用。
技术介绍
1、在生命科学领域中，实验细胞株扮演着至关重要的角色。作为实验研究和药物开发的标准化细胞系，实验细胞株具有遗传稳定性、可重复性和易于培养的特点，为生命科学研究提供了重要的细胞模型体系，使人们能够更深入的研究生命过程的复杂性和内理机制，探索疾病的发生和发展过程，以及评估药物的疗效和安全性。
2、细胞培养技术是研究实验细胞株在细胞生物学、药物研发、疾病机制研究以及生物医学应用中的基础，通过将细胞株在体外进行体内模拟培养，研究人员能够探索细胞的生理功能、信号通路、代谢过程以及相互作用。而细胞消化是细胞传代培养技术中的关键步骤之一，对于维持细胞株的生长活性、传代培养、冻存保种及进行实验研究都至关重要。细胞消化不仅能够有效地将细胞从培养底物上分离下来，使细胞能够在新的培养容器中继续生长和增殖，确保细胞株的可持续培养，还为细胞生物学和分子生物学研究提供了一个重要的工具。通过细胞消化分离出单个细胞，研究人员可以更深入地探究细胞的生理过程、信号通路、蛋白质表达等。此外，细胞消化也为细胞治疗和组织工程领域提供了重要的基础支持。
3、目前在细胞消化领域，常见的细胞消化法主要包括机械消化法、离子螯合法、酶消化法。机械消化法主要是通过机械力如直接用培养液吹打或用刮刀来破坏细胞与培养底物之间的粘附力，从而实现细胞的分离，一般用于贴壁性较弱的实验细胞株传代。相较于其它消化方法，机械消化法可能需要更多的实验操作，包括精确的机械刮取或振动的操作，
4、已有文献针对胰蛋白酶消化液进行了优化，使用柠檬酸胰酶(其中含有柠檬酸钠与传统的胰蛋白酶组分)，其消化细胞快，分散细胞效果好。柠檬酸钠作为胰蛋白酶消化液中可添加成分之一，不仅对钙离子、镁离子等金属离子具有良好的络合能力，在胰蛋白酶消化液中还可以用作细胞解聚剂。当需要将组织分解为单个细胞时，柠檬酸钠可与胰蛋白酶联合使用，促进组织间的解聚和细胞间的分离，使细胞间更分散，提供胰蛋白酶的高消化效率。此外，相较于同为螯合剂的edta来说，柠檬酸钠具有安全无毒性，即使连续传代实验细胞株也不会对其造成更多损伤，比较适合实验细胞株连续传代培养及生物医学应用。然而，作为一种弱酸强碱盐，柠檬酸钠在发生缓慢水解的同时在胰蛋白酶的酸性体系条件下更加不够稳定，必须保存在-20℃条件下，使用前需要先解冻且需避免反复冻融，无法在4℃条件或者常温下长期保存。此外，该柠檬酸胰酶缺少稳定剂，稳定性效果差，无法充分发挥柠檬酸胰酶的最佳酶活性。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种胰蛋白酶消化液，包括胰蛋白酶、柠檬酸钠、聚乙烯比咯烷酮(pvp)以及可选的缓冲体系。该消化液对于连续传代实验细胞株具有较高的消化能力和细胞分散率，还具有良好的稳定性和长时间的高活性，同时也为细胞株后续的规模化传代扩增培养提供了良好的生长条件。
2、在本专利技术的第一方面，提供一种胰蛋白酶消化液，包括胰蛋白酶、柠檬酸钠、聚乙烯比咯烷酮(pvp)以及可选的缓冲体系。
3、在一种或多种实施方案中，以胰蛋白酶消化液的总体积计算，
4、所述胰蛋白酶的含量为0.1-0.3g/100ml，较佳为0.25g/100ml；
5、所述柠檬酸钠的含量为0.1％-2％，较佳为0.1％-1.5％、0.1％-1％、0.1％-0.8％或0.1％-0.6％，更佳为0.3％-0.5％；
6、所述pvp的含量为：0.1％-2％，较佳为0.1％-1.5％、0.1％-1％、0.1％-0.8％、0.1％-0.6％或0.3％-0.6％，更佳为0.4％-0.6％。
7、在一种或多种实施方案中，所述缓冲体系包括但不限于如下的一种或多种：缓冲盐、碳源、ph调节剂、指示剂。
8、在一种或多种实施方案中，所述缓冲盐包括：钠盐、钾盐、磷酸盐、硼酸盐、乙酸盐；较佳地，所述缓冲液包括或为：氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾。
9、在一种或多种实施方案中，所述碳源包括或为：葡萄糖、海藻糖、蔗糖、果糖。
10、在一种或多种实施方案中，所述ph调节剂包括或为：碳酸氢钠、氢氧化钠、盐酸；较佳地，所述胰蛋白酶消化液的ph值为7.6±0.2。
11、在一种或多种实施方案中，所述指示剂包括或为：酚红、甲酚红、溴酚蓝、百里酚蓝；较佳为酚红；更佳为1％酚红。
12、在一种或多种实施方案中，以胰蛋白酶消化液的总体积计算，所述氯化钠含量为0.1-5g/100ml，较佳为0.1-3g/100ml、0.2-2g/100ml或0.5-2g/100ml，更佳为0.5-1g/100ml。
13、在一种或多种实施方案中，以胰蛋白酶消化液的总体积计算，所述氯化钾含量为0.001-1g/100ml，较佳为0.001-0.5g/100ml、0.001-0.1g/100ml或0.005-0.1g/100ml，更佳为0.01-0.1g/100ml。
14、在一种或多种实施方案中，以胰蛋白酶消化液的总体积计算，所述磷本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种胰蛋白酶消化液，包括胰蛋白酶、柠檬酸钠、聚乙烯比咯烷酮(PVP)以及可选的缓冲体系。
2.如权利要求1所述的胰蛋白酶消化液，其特征在于，以胰蛋白酶消化液的总体积计算，
3.如权利要求1或2所述的胰蛋白酶消化液，其特征在于，所述缓冲体系包括如下的一种或多种：缓冲盐、碳源、pH调节剂、指示剂；
4.如权利要求3所述的胰蛋白酶消化液，其特征在于，以胰蛋白酶消化液的总体积计算，
5.一种试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1-4中任一项所述的胰蛋白酶消化液。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒任选还包含细胞培养基(较佳为DMEM、MEM、MEM-α、F12K、DMEM/F12、Advanced DMEM/F12、RPMI 1640、L-15、BEGM)、血清或血清替代物、生长因子、抗生素(较佳为青链霉素)、胰岛素、G418；
7.如权利要求1-4中任一项所述的胰蛋白酶消化液或如权利要求5或6所述的试剂盒在细胞消化中的应用；
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述细胞包括贴壁细胞、
9.一种细胞的消化方法，包括使用权利要求1-4中任一项所述的胰蛋白酶消化液或如权利要求5或6所述的试剂盒进行细胞消化的步骤；
10.一种胰蛋白酶消化液的制备方法，所述制备方法包括：取柠檬酸钠、PVP以及缓冲体系中的各个组分，根据其各自溶解特性分类溶解，然后混合，加入蒸馏水或去离子水调节各组分的终浓度，加入pH调节剂调节pH值至7.4～7.8，即得；
...【技术特征摘要】
1.一种胰蛋白酶消化液，包括胰蛋白酶、柠檬酸钠、聚乙烯比咯烷酮(pvp)以及可选的缓冲体系。
2.如权利要求1所述的胰蛋白酶消化液，其特征在于，以胰蛋白酶消化液的总体积计算，
3.如权利要求1或2所述的胰蛋白酶消化液，其特征在于，所述缓冲体系包括如下的一种或多种：缓冲盐、碳源、ph调节剂、指示剂；
4.如权利要求3所述的胰蛋白酶消化液，其特征在于，以胰蛋白酶消化液的总体积计算，
5.一种试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1-4中任一项所述的胰蛋白酶消化液。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒任选还包含细胞培养基(较佳为dmem、mem、mem-α、f12k、dmem/f12、advanced dmem/f12、...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴军，张雨晴，夏晴，喻峰，童莹，
申请(专利权)人：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心，
类型：发明
国别省市：
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