一种单碱基编辑系统和用途技术方案

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种单碱基编辑系统和用途。所述的包括：1)核酸切口酶或其编码多核苷酸；2)胞嘧啶脱氨酶或其编码多核苷酸；3)无碱基位点保护多肽或其编码多核苷酸。本发明专利技术构建了含有HMCES的融合蛋白或过表达质粒，构建了新的胞嘧啶至鸟嘌呤碱基编辑器CGBEpH，其能保护无碱基位点(AP位点)，能减少CGBEs产生的DNA双链断裂损伤，降低编辑过程中产生的有害低频产物的产生。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别是涉及一种单碱基编辑系统和用途。

技术介绍

1、单碱基编辑器旨在不产生dna双链断裂损伤的前提下，实现基因组dna序列特定位点的单碱基突变(gaudelli et al.,2017；komor et al.,2016；nishida et al.,2016)，有望成为一种更为安全可靠的临床基因编辑治疗方法。对于不同的基因组位置以及不同的序列，单碱基编辑器的编辑效果会有所不同(anzalone et al.,2020；porto et al.,2020)，在此过程中会产生的一些低频有害副产物，目前人们认为这些副产物的生产是随机的、无诱因性的，但在临床治疗中这些少量的副产物有可能足以产生严重的不良后果。由于单碱基编辑器的编辑副产物占比较少，目前对其潜在的产生机制尚不明了，需要进一步探索其产生机制从而减少其生成，这对促进单碱基编辑器在临床基因编辑治疗中发挥作用具有重要意义(doudna,2020)。

2、单碱基编辑器包含脱氨酶和切割活性缺陷的cas切割酶两个组分，能够在基因组特定的编辑窗口内通过脱氨酶起始实现特定碱基的突变(a本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种单碱基编辑系统，其特征在于，所述单碱基编辑系统包括：

2.如权利要求1所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述无碱基位点保护多肽为APEX1竞争性抑制剂和/或APEX1突变体；优选地，所述APEX1竞争性抑制剂选自HMCES。

3.如权利要求2所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述HMCES的氨基酸序列包括：

4.如权利要求1所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述核酸切口酶为Cas9切口酶；和/或，所述胞嘧啶脱氨酶选自APOBEC1、APOBEC2、APOBEC3A、APOBEC3B、APOBEC3C、APOBEC3D/E、APOBEC3F、AP...

【技术特征摘要】

1.一种单碱基编辑系统，其特征在于，所述单碱基编辑系统包括：

2.如权利要求1所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述无碱基位点保护多肽为apex1竞争性抑制剂和/或apex1突变体；优选地，所述apex1竞争性抑制剂选自hmces。

3.如权利要求2所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述hmces的氨基酸序列包括：

4.如权利要求1所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述核酸切口酶为cas9切口酶；和/或，所述胞嘧啶脱氨酶选自apobec1、apobec2、apobec3a、apobec3b、apobec3c、apobec3d/e、apobec3f、apobec3g、apobec3h、apobec4及其突变体或aid及其突变体中的一种或多种。

5.如权利要求1所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述核酸切口酶或胞嘧啶脱氨酶以融合蛋白的形式表达时，所述融合蛋白包含胞嘧啶脱氨酶片段和核酸切口酶片段；所述无碱基位点保护多肽融合表达或独立表达。

6.如权利要求5所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述融合蛋白还包括尿嘧啶糖基化蛋白片段和/或核定位片段和/或无碱基位点保护多肽片段。

7.如权利要求6所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述融合蛋白从n端至c端依次包括胞嘧啶脱氨酶片段和核酸切口酶片段。

8.如权利要求7所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述融合蛋白中，胞嘧啶脱氨酶片段的n端连接有尿嘧啶糖基化蛋白片段和/或无碱基位点保护多肽片段。

9.如权利要求7所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述融合蛋白包括氨基酸序列包括如seq id no.19或seq id no.20或seq id no.21所示序列。

10.如权利要求1-9任一项所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述单碱基编辑系统还包括sgrna或其编码多核苷酸。

11.根据权利要求10所述的单碱基编辑系统，其特征在于，所述sgrna不含有脱氨酶偏好的回文基序；优选的，所述脱氨酶偏好的回文基序为tcga。

12.一种单碱基编辑用融合蛋白，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟飞龙，黄敏，蔡燕妮，秦艺宁，尚雅芳，刘浏，刘晓静，
申请(专利权)人：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心，
类型：发明
国别省市：