【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药技术，尤其涉及一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用。
技术介绍
1、木犀草素(luteolin)是一种天然黄酮类化合物，广泛存在于多种植物中。具有多种药理活性，如消炎、抗过敏、降尿酸、抗肿瘤、抗菌和抗病毒等，临床主要用于止咳、祛痰、消炎、降尿酸及治疗心血管疾病，治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症、sars、肝炎等。木犀草素是口服生物可利用的，fda批准用于治疗转移性黑色素瘤和间变性甲状腺癌，欧盟批准用于非小细胞肺癌，可通过血脑屏障。
2、在众多实体肿瘤的治疗中，化疗起着着举足轻重的作用，顺铂是临床常用铂类化疗药物，而顺铂导致的听力损失(cihl)是化疗后常见的一种副作用，听力损失严重影响患者生活质量，会对正常的生活和社交产生负面影响，不利于患者的康复。铂类和紫杉醇类药物导致的听力损伤是永久性的，后期通过药物调理、物理治疗等来恢复受损的听力的效果甚微。临床上没有针对性药物，只能通过改善内耳循环、激素冲击治疗等尝试性治疗。据报道，顺铂介导的耳毒性涉及几种机制，如活性氧(ros)的产生、细胞凋亡的激活和细胞内脂质过氧化的积累。如果能在顺铂导致毛细胞损伤之前使用某种药物使毛细胞受损减少，那将会对患者的听力起到预防性治疗的作用。
3、中国专利一种偶联物及其在治疗内耳疾病上的应用(cn114848836b)，公开了一种偶联物及其在内耳疾病上的应用，结合内耳靶向多肽和诊断、预防或治疗内耳疾病的主药形成偶联物，从而借助内耳靶向多肽以协助主药靶向内耳或内耳中具体结构、细胞，实现主药的富集，具有精准，高效率，
4、目前在记载的关于顺铂诱发耳毒性的相关机制研究中，仍没有发现fda批准的小分子可用于临床治疗，顺铂耳毒性的预防与治疗是临床亟待解决的问题。
技术实现思路
1、为了克服以上不足，本专利技术目的在于提供一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，木犀草素通过抑制铁垂来减轻顺铂诱导的耳毒性，以解决顺铂诱导的耳毒性问题。
2、为实现上述目的，本申请提供的技术方案如下：
3、一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，抗顺铂诱导耳毒性药物的主要活性成分为木犀草素。
4、进一步地，耳毒性是顺铂诱导耳蜗毛细胞丢失增加。
5、进一步地，木犀草素抗顺铂耳毒性机制：减轻顺铂引起的耳蜗外植体中回和底回的ohcs损失、降低rsl3处理的hei-oc1细胞中tfr1的表达及对铁死亡的特异性抑制作用。
6、进一步地，抗顺铂类毛细胞hei-oc1细胞耳毒性的有效性验证：
7、(1)使用梯度浓度的顺铂处理类听毛细胞hei-oc1细胞；
8、(2)采用cck-8检测方法检测顺铂处理后的细胞活力，得到顺铂的半抑制浓度；
9、(3)使用木犀草素处理hei-oc1细胞，将木犀草素置换成步骤(2)所得浓度的顺铂处理细胞，cck-8检测方法测定细胞活力。
10、进一步地，药物在外植体中有效性验证：
11、(1)小鼠断头处死，头部取材并迅速置于预冷的磷酸盐pbs缓冲液中，从枕骨大孔处沿颅骨正中剪开颅骨，取出颞骨，剔除多余脑组织和骨质，在显微镜下分离获得完整耳蜗基底，将基底膜置于cell-tak预处理的4孔腔室载玻片中贴壁培养；
12、(2)给予木犀草素预处理，后加入顺铂处理，观察耳蜗外植体中回和底回中的ohcs损失；
13、(3)使用tfr1免疫荧光染色，观察hei-oc1细胞中tfr1的表达。
14、进一步地，步骤(2)中将2μm木犀草素预处理耳蜗外植体，6h后暴露于150μm顺铂。
15、培养基为含0.2％原代细胞抗生素、10％胎牛血清的高糖dmem，培养环境为37℃、5％二氧化碳的无菌培养箱。
16、进一步地，药物在小鼠模型上有效性验证：
17、(1)构建顺铂耳毒性小鼠模型：使用p30时的c57bl/6小鼠腹腔注射木犀草素后使用顺铂治疗；
18、(2)构建条件性敲除后导致耳蜗毛细胞铁死亡的小鼠：将他莫昔芬诱导的pou4f3-gpx4cre/er小鼠作为毛细胞成熟后，条件性敲除后导致毛细胞铁死亡的小鼠模型；
19、(3)在梯度频率下，比较使用药物溶剂组和木犀草素处理组的小鼠听性脑干反应阈值；
20、(4)他莫昔芬诱导小鼠，腹腔注射木犀草素，在梯度频率下，测试pou4f3-gpx4cre/er用木犀草素处理的小鼠；
21、(5)使用western blot测定木犀草素调节nrf2、ho-1、trf、tfr1及ros的水平；
22、(6)使用q-pcr比较顺铂处理的小鼠与木犀草素预处理组小鼠耳蜗中trf和slc40a1的表达；
23、(7)使用铁橙染色检测对照、rsl3处理、木犀草素及rsl3共同处理的hei-oc1细胞细胞内亚铁离子的浓度。
24、进一步地，木犀草素的给药方式包括口服给药、局部给药、注射给药。
25、进一步地，木犀草素剂型包括软胶囊、滴丸、乳剂、片剂、洗剂、搽剂、软膏剂、粉针剂、注射液或栓剂。
26、借由以上的技术方案，本申请的有益效果在于：
27、(1)木犀草素的发现改变了顺铂导致耳毒性无针对性药物的局面，治疗的模式从被动缓解到主动预防；
28、(2)木犀草素可口服，可以通过血脑屏障，简化治疗过程，患者依从性更好，且能使药物能达到更好的治疗效果；
29、(3)木犀草素安全性高，其能通过血脑屏障起到对毛细胞的保护作用，对化疗后对听力的影响降到最低。
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1.一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述抗顺铂诱导耳毒性药物的主要活性成分为木犀草素。
2.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述耳毒性是顺铂诱导耳蜗毛细胞丢失增加。
3.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述木犀草素抗顺铂耳毒性机制：减轻顺铂引起的耳蜗外植体中回和底回的OHCs损失、降低RSL3处理的HEI-OC1细胞中TfR1的表达及对铁死亡的特异性抑制作用。
4.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述药物抗顺铂类毛细胞HEI-OC1细胞耳毒性的有效性验证：
5.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述药物在外植体中有效性验证：
6.根据权利要求5所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，步骤(2)中将2μM木犀草素预处理耳蜗外植体，6h后暴露于150μM顺铂。
7.根据权利要求4-5所述的一种木犀
8.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述药物在小鼠模型上有效性验证：
9.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，木犀草素的给药方式包括口服给药、局部给药、注射给药。
10.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，木犀草素剂型包括软胶囊、滴丸、乳剂、片剂、洗剂、搽剂、软膏剂、粉针剂、注射液或栓剂。
...【技术特征摘要】
1.一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述抗顺铂诱导耳毒性药物的主要活性成分为木犀草素。
2.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述耳毒性是顺铂诱导耳蜗毛细胞丢失增加。
3.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述木犀草素抗顺铂耳毒性机制：减轻顺铂引起的耳蜗外植体中回和底回的ohcs损失、降低rsl3处理的hei-oc1细胞中tfr1的表达及对铁死亡的特异性抑制作用。
4.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述药物抗顺铂类毛细胞hei-oc1细胞耳毒性的有效性验证：
5.根据权利要求1所述的一种木犀草素制备抗顺铂耳毒性药物的新型应用，其特征在于，所述药物在外植体中有效性验证：
6.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：付小龙，刘子熠，郭娜，洪国栋，李美萱，
申请(专利权)人：山东第一医科大学山东省医学科学院，
类型：发明
国别省市：
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