【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于海洋微生物发酵合成，具体涉及一种羊毛甾烷型三萜类化合物及其发酵制备方法和用途。
技术介绍
1、海岸带是陆海相互作用下形成的拥有海陆双属性的动态复杂生态系统。近年来，由于经济发展和人类活动的影响，给海岸带区域带来了一系列的生态问题，比如海水富营养化引发的赤潮、绿潮、水母以及水产养殖病害的爆发，从而导致海岸带生物多样性急剧减少。然而，随着高通量测序技术的发展，研究发现海岸带区域环境及生物体内却拥有丰富的微生物多样性，其中海洋真菌在海岸带生态平衡调节中发挥着关键作用。尤其在海洋动物体内，海洋真菌可以通过分泌抗菌素来减轻外界环境改变给宿主或寄主带来的生存压力，提高其生存竞争力。海岸带真菌产生的次生代谢产物同样具有一定的生态功能，并展现出良好的生物活性。此外，虽然海岸带真菌多来源于陆地环境，但其已经适应海洋环境，具有陆地真菌和海洋真菌的双重特性，其产生的次级代谢产物结构类型及多样性，同样有别于陆生真菌和专性海洋真菌。因此，海岸带真菌已成为海洋药物开发过程中先导化合物的重要来源。
2、撕裂蜡孔菌是一种具有多种用途的陆生白腐真菌，目前对海洋来源的撕裂蜡孔菌及其功能和应用报道甚少，其发酵产物中的主要小分子功能成分也尚未明确。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种羊毛甾烷型三萜类化合物及其发酵制备方法和用途。将制得的羊毛甾烷型三萜类化合物进行初步活性筛选发现，该类型化合物具有一定的抗菌活性，并且未表现出明显的动物毒性。
2、为实现上述目的，本专利技术公开
3、所述的羊毛甾烷型三萜类化合物的结构通式如下所示：
4、其中，r1为氢原子或乙酰基； r2为氢原子或羟基。
5、所述的羊毛甾烷型三萜类化合物的发酵制备方法为：将撕裂蜡孔菌ceriporialacerate 8-2接种于真菌培养基中发酵培养，发酵产物经分离纯化后即得羊毛甾烷型三萜类化合物。
6、所述的发酵制备方法的具体操作步骤为：
7、1）将撕裂蜡孔菌ceriporia lacerate 8-2接种于真菌培养基中进行发酵培养，得到菌株发酵液；
8、2）将步骤1）收集的菌株发酵液通过有机溶剂提取，减压浓缩，得到发酵液提取物；
9、3）将步骤2）得到的发酵液提取物进行硅胶柱层析，经洗脱液梯度洗脱，收集洗脱组分，并经薄层层析检测；
10、4）将步骤3）中洗脱组分再经反相硅胶柱层析和正相硅胶柱层析分离纯化后检测得到化合物1、化合物2、化合物3；
11、所述化合物1的结构式为；
12、所述化合物2的结构式为；
13、所述化合物3的结构式为 。
14、所述的真菌培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基、大米固体培养基或菊芋葡萄糖液体培养基。
15、所述步骤2）中的有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷、甲醇、乙醇中的一种或几种。
16、所述步骤3）中的洗脱液为石油醚-乙酸乙酯、二氯甲烷-甲醇、二氯甲烷-乙酸乙酯中的一组或几组。各组中两种溶剂的体积比≤50。
17、所述步骤4）中的反相硅胶柱层析的洗脱液为水-甲醇或水-乙醇；正相硅胶柱层析的洗脱液为石油醚-乙酸乙酯、二氯甲烷-甲醇或二氯甲烷-乙酸乙酯。水-甲醇或水-乙醇中两种溶剂的体积比≤5。石油醚-乙酸乙酯、二氯甲烷-甲醇或二氯甲烷-乙酸乙酯中两种溶剂体积比为50-1:1。
18、所述步骤3）和步骤4）的具体操作为：将步骤2）得到的发酵液提取物进行硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集洗脱组分，并经薄层层析检测；将体积比为10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱组分，依次用反相硅胶柱层析和正相硅胶柱层析分离，反相硅胶柱层析用水-甲醇洗脱液梯度洗脱，正相硅胶柱层析用二氯甲烷-甲醇洗脱液梯度洗脱，收集组分，经薄层层析检测，收集rf值为0.5-0.6的组分，即得化合物1、化合物2；将体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱组分，经反相硅胶柱层析分离，用水-甲醇洗脱液梯度洗脱，收集组分，经薄层层析检测，rf值为0.3-0.4的组分即为化合物3。
19、上述制备得到的羊毛甾烷型三萜类化合物作为抗菌剂的应用。
20、上述制备得到的羊毛甾烷型三萜类化合物在制备抗菌药物或保健品中的应用。
21、本专利技术具有以下优点：本专利技术涉及的羊毛甾烷型三萜类化合物是通过分离于海洋动物牡蛎中的撕裂蜡孔菌ceriporia lacerate 8-2经发酵提取分离获得，产率高，其中化合物1的产率高达8-10%，纯度达90%以上，且制备方法简单，原料容易获得，不受资源、地域及生产条件限制，易工业化大规模制备生产。初步生物活性测试得出，该类化合物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有一定的抑制作用，且在100μg/ml浓度下对卤虫并未表现出明显致死活性。本专利技术制备的羊毛甾烷型三萜类化合物可直接作为药物先导化合物或前体化合物，用于新的类天然药物的衍生合成，并且在抗菌药物或保健品开发领域具有很好的应用前景。
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1.一种羊毛甾烷型三萜类化合物，其特征在于，该化合物的结构通式如下所示：
2.根据权利要求1所述的羊毛甾烷型三萜类化合物的发酵制备方法，其特征在于，所述发酵制备方法为：将撕裂蜡孔菌Ceriporia lacerate 8-2接种于真菌培养基中发酵培养，发酵产物经分离纯化后即得羊毛甾烷型三萜类化合物。
3.根据权利要求2所述的羊毛甾烷型三萜类化合物的发酵制备方法，其特征在于，所述撕裂蜡孔菌Ceriporia lacerate 8-2于2023年12月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.41068。
4.根据权利要求3所述的发酵制备方法，其特征在于，所述制备方法的具体操作步骤为：
5.根据权利要求4所述的发酵制备方法，其特征在于，所述的真菌培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基、大米固体培养基或菊芋葡萄糖液体培养基。
6.根据权利要求4所述的发酵制备方法，其特征在于，所述步骤2）中的有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷、甲醇、乙醇中的一种或几种。
7.根据权利要求4
8.根据权利要求4所述的发酵制备方法，其特征在于，所述步骤4）中的反相硅胶柱层析的洗脱液为水-甲醇或水-乙醇；正相硅胶柱层析的洗脱液为石油醚-乙酸乙酯、二氯甲烷-甲醇或二氯甲烷-乙酸乙酯。
9.根据权利要求2-8任一项所述方法制备得到的羊毛甾烷型三萜类化合物作为抗菌剂的应用。
10.根据权利要求2-8任一项所述方法制备得到的羊毛甾烷型三萜类化合物在制备抗菌药物或保健品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种羊毛甾烷型三萜类化合物，其特征在于，该化合物的结构通式如下所示：
2.根据权利要求1所述的羊毛甾烷型三萜类化合物的发酵制备方法，其特征在于，所述发酵制备方法为：将撕裂蜡孔菌ceriporia lacerate 8-2接种于真菌培养基中发酵培养，发酵产物经分离纯化后即得羊毛甾烷型三萜类化合物。
3.根据权利要求2所述的羊毛甾烷型三萜类化合物的发酵制备方法，其特征在于，所述撕裂蜡孔菌ceriporia lacerate 8-2于2023年12月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.41068。
4.根据权利要求3所述的发酵制备方法，其特征在于，所述制备方法的具体操作步骤为：
5.根据权利要求4所述的发酵制备方法，其特征在于，所述的真菌培养基为马铃薯葡萄糖液体培养...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑茂坤，黄正，
申请(专利权)人：山东第一医科大学山东省医学科学院，
类型：发明
国别省市：
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