本发明专利技术涉及一种纳米胶原寡肽的制备方法，该方法包括：将鸡爪绞碎后加入一定量的水和脂肪酶，在温度为３０－５０℃，ｐＨ为８．０－１０．０的条件下脱脂；将脱脂后的鸡爪置于酶解罐中并加入一定量的水，升温至７０℃－９０℃保持１０－３０分钟，在温度４０－５０℃，ｐＨ?６．０－７．０的条件下加入一定量的木瓜蛋白酶水解１－２小时；在温度５０－６０℃，ｐＨ?６．０－８．０的条件下加入一定量的复合蛋白酶水解１－２小时；继续加入一定量的风味蛋白酶水解２－４小时，在水解结束后升温至７５－１００℃保持１０－３０分钟；后处理得到所述纳米胶原寡肽。通过本发明专利技术的方法制备的纳米胶原寡肽在分子量分布和羟脯氨酸含量上更具优势。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种胶原蛋白的提取方法，具体涉及。
技术介绍
胶原蛋白是由三条肽链拧成的螺旋形纤维状蛋白质，是一种糖蛋白，分子含糖、及 大量甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸等，存在所有多细胞动物体内，是体内含量最多的一类蛋白 质。在人体中约占总蛋白质含量的四分之一，存在于几乎所有组织中，是一种细胞外蛋白 质，以不溶纤维形式存在，对动物和人体皮肤、血管、骨骼、筋骨、软骨的形成十分重要，是结 缔组织的重要物质，是决定结缔组织韧性的主要因素，在动物细胞中扮演结合组织的角色。 随着年龄的增长，人体在25岁之后，体内的胶原蛋白就开始逐渐流失，尤其是女性。因此维 持骨骼健康及皮肤弹性就需要及时地补充胶原蛋白。胶原蛋白中蕴藏着多种生物活性肽， 如抑制血管紧张素转化酶活性、抑制血小板凝集活性、抗氧化活性、抗肿瘤活性等。胶原寡肽是以各种胶原(动物的皮、骨、关节等)为原料，经多种蛋白酶定向梯度 水解后的产物，其分子量在3000Da以下。胶原寡肽可完全溶解于水(冷水亦可溶解)，水溶 液低粘度，在60%的高浓度下也有流动性，耐酸性能好，在酸、碱的情况下均无沉淀；耐高 温性能好，200°C加热亦无沉淀，由于其分子量较小，所以更易被人体吸收。我国是世界上的养禽大国，鸡养殖业已成为农业产业化最迅速最典型的行业，并 以每年5% 10%的速度持续增长。随着市场的不断发展，鸡肉加工过程中，许多鸡副产品 如鸡内脏、鸡爪多用来作为食品原料加工制成熟食制品，产品的利用率及附加值较低，2008 年鸡爪的产量大约有100万吨，除了可制成熟食，大部份的鸡爪均未被充分利用。目前我国鸡爪深加工企业较少，大部分企业都是进行初级加工就上市销售，有的 企业甚至不加工就上市销售，存在着深加工滞后，科技含量少，现代化程度低下等突出问 题，已严重制约鸡爪产品附加值的提升。目前，国外很多文献报道了关于鸡爪胶原的生理功能一些研究，初步认识到了其 在提高人体骨骼强度、保护胃粘膜、抑制血压上升、抗衰老和促进皮肤胶原代谢等方面的作 用，报道了鸡爪胶原不仅在食品、化妆品上有广泛的应用前景，而且还具有预防高血压，防 治风湿性关节炎等医学上的应用。因此，利用鸡爪提取胶原蛋白作为原料应用到食品、化妆 品、药品上，具有重要的科学意义和巨大的应用与开发价值。现有技术的制备胶原蛋白肽的方法中，脱脂需要用到大量的有机溶剂或者碱来脱 出原料中的脂肪，有机溶剂和碱脱脂都存在严重的安全隐患和环境污染；酶解过程应用最 多的是复合酶水解法，但是现行的酶解工艺方法的主要缺点是酶解过程难以控制，制备的 胶原蛋白肽的分子量分布较广、且产品有苦味；有的厂家还采用超滤之后将滤液蒸发浓缩， 蒸发浓缩需要消耗大量的热量，且达不到脱盐和去除游离氨基酸的目的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，克服现有技术中的酶解过程难以控制，胶原蛋白肽的分子量分布较广和产品有苦味等问题。为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下方案，包括(1)绞碎将鸡爪清洗干净后绞碎得到鸡爪料；(2)脱脂将所述鸡爪料置于脱脂罐中，加入一定量的水和脂肪酶，在温度为 30-50pH为8. 0-10. 0的条件下进行脱脂，在脱脂结束后过滤洗涤得到脱脂鸡爪；(3)酶解将所述脱脂鸡爪置于酶解罐中，加入一定量的水，在温度40-50°C，pH 6. 0-7. 0的条件下加入一定量的木瓜蛋白酶水解1-2小时；在温度50-60°C，pH 6. 0-8. 0的 条件下加入一定量的复合蛋白酶水解1-2小时；继续加入一定量的风味蛋白酶水解2-4小 时，在水解结束后升温至75-100°C保持10-30分钟，过滤得到鸡爪初滤液；(4)后处理将所述鸡爪初滤液进行后处理得到所述纳米胶原寡肽。通过本专利技术的上述技术方案，采用脂肪酶进行脱脂操作，避免了现有技术中有机 溶剂和碱脱脂存在的严重的安全隐患和环境污染，省略了后续的去除残留的碱等工序，从 而具有很高的生物安全性。通过首先采用特定的两种内切酶(木瓜蛋白酶和复合蛋白酶) 酶解，再利用合适的特定的外切酶(风味蛋白酶)对疏水性氨基酸进行修饰，制备得到的纳 米胶原寡肽无任何苦味，提高了纳米胶原寡肽的品质。通过采用依次添加三种蛋白水解酶 (木瓜蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶)进行酶解，使得酶解过程易于控制，制备得到的 纳米胶原寡肽在分子量分布和羟脯氨酸HYP含量上更具优势。根据本专利技术的生产方法，工 艺简单，独特，生产周期短。根据本专利技术的一个优选实施例，所述脱脂操作中加入的水的质量是鸡爪质量的 2-10倍，优选为2-5倍，优选为4-5倍，更优选为4倍。根据本专利技术的一个优选实施例，所述脱脂操作中加入的脂肪酶的质量占鸡爪质量 的 0. 05% -0. 5%，优选为 0. 05% -0. 15%，优选为 0. 15%。根据本专利技术的一个优选实施例，所述脱脂操作中的温度优选为35-40°C，优选为 37 °C。根据本专利技术的一个优选实施例，所述脱脂操作中的pH优选为9. 0-10. 0，优选为 9. 0，优选为9. 5。根据本专利技术的一个优选实施例，所述脱脂进行1-2小时，优选为1. 5小时，优选为 1小时。 根据本专利技术的一个优选实施例，所述脱脂操作结束后过滤，将滤出的鸡爪料洗涤 30分钟，优选为在常温下洗至中性。根据本专利技术的一个优选实施例，所述酶解操作中加入的水的质量是鸡爪质量的 1-5倍，优选为2-4倍，优选为4倍。根据本专利技术的一个优选实施例，所述酶解操作中在加入木瓜蛋白酶水解之前，先 升温至70°C -90°C保持10-30分钟。通过本专利技术的上述技术方案，所述酶解操作中在添加 蛋白酶水解之前先升温至70°C -90°C保持10-30分钟，使得预处理后的蛋白能暴露出更多 的酶作用点，能加速之后的蛋白酶解反应。根据本专利技术的一个优选实施例，所述木瓜蛋白酶的质量占鸡爪质量的 0. 1% -1%，优选为0. 1% -0. 5%，优选为0. 2% -0. 3%，优选为0. 2% ；所述木瓜蛋白酶的4反应温度优选为40-50°C，优选为45°C ；所述木瓜蛋白酶的反应pH优选为6. 0-7. 0，优选为 6. 5 ；所述木瓜蛋白酶的反应时间优选为1-2小时，优选为1小时。根据本专利技术的一个优选实施例，所述复合蛋白酶的质量占鸡爪质量的 0. 1% -1%，优选为0. 1% -0. 5%，优选为0. 2% -0. 3%，优选为0. 2% ；所述复合蛋白酶的 反应温度优选为50-60°C，优选为50°C ；所述木瓜蛋白酶的反应pH优选为6. 0-8. 0，优选为 7 ；所述木瓜蛋白酶的反应时间优选为1-2小时，优选为1小时。根据本专利技术的一个优选实施例，所述风味蛋白酶的质量占鸡爪质量的 0.2% -2%,优选为0. 2% -1 %，优选为0. 4% -0. 6%，优选为0.4% ；所述复合蛋白酶的反 应温度优选为50-60°C，优选为50°C;所述木瓜蛋白酶的反应pH优选为6. 0-8. 0，优选为7 ； 所述木瓜蛋白酶的反应时间优选为2-4小时，优选为2小时。根据本专利技术的一个优选实施例，所述酶解操作结束后升温至75_100°C保持10-30 分钟，优选为85°C保持15分钟，离心过滤去上层油脂、去下层骨渣后得到粗提液。根据本专利技术的一个优选实施例，所述后处理操作包括加入0.5-本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种纳米胶原寡肽的制备方法，包括： （１）绞碎：将鸡爪清洗干净后绞碎得到鸡爪料； （２）脱脂：将所述鸡爪料置于脱脂罐中，加入一定量的水和脂肪酶，在温度为３０－５０℃，ｐＨ为８．０－１０．０的条件下进行脱脂，在脱脂结束后过滤洗涤得到脱脂鸡爪； （３）酶解：将所述脱脂鸡爪置于酶解罐中，加入一定量的水，在温度４０－５０℃，ｐＨ ６．０－７．０的条件下加入一定量的木瓜蛋白酶水解１－２小时；在温度５０－６０℃，ｐＨ ６．０－８．０的条件下加入一定量的复合蛋白酶水解１－２小时；继续加入一定量的风味蛋白酶水解２－４小时，在水解结束后升温至７５－１００℃保持１０－３０分钟，过滤得到鸡爪初滤液； （４）后处理：将所述鸡爪初滤液进行后处理得到所述纳米胶原寡肽。
【技术特征摘要】
一种纳米胶原寡肽的制备方法，包括(1)绞碎将鸡爪清洗干净后绞碎得到鸡爪料；(2)脱脂将所述鸡爪料置于脱脂罐中，加入一定量的水和脂肪酶，在温度为30 50℃，pH为8.0 10.0的条件下进行脱脂，在脱脂结束后过滤洗涤得到脱脂鸡爪；(3)酶解将所述脱脂鸡爪置于酶解罐中，加入一定量的水，在温度40 50℃，pH 6.0 7.0的条件下加入一定量的木瓜蛋白酶水解1 2小时；在温度50 60℃，pH 6.0 8.0的条件下加入一定量的复合蛋白酶水解1 2小时；继续加入一定量的风味蛋白酶水解2 4小时，在水解结束后升温至75 100℃保持10 30分钟，过滤得到鸡爪初滤液；(4)后处理将所述鸡爪初滤液进行后处理得到所述纳米胶原寡肽。2.如权利要求1所述的纳米胶原寡肽的制备方法，其特征在于，所述脱脂操作中加入 的水的质量是鸡爪质量的4-5倍。3.如权利要求1所述的纳米胶原寡肽的制备方法，其特征在于，所述脱脂操作中加入 的脂肪酶的质量是鸡爪质量的0. 05% -0. 15%。4.如权利要求1所述的纳米胶原寡肽的制...
【专利技术属性】
技术研发人员：荣耀中，蔡愈杭，何会，
申请(专利权)人：上海东锦饮品有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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