一种从褐藻中提取褐藻黄素的方法技术

本发明专利技术涉及一种从褐藻中提取褐藻黄素的方法。提取时将粉碎的褐藻先经过水溶涨预处理，再用水溶性有机溶剂浸提，依次采用萃取法，两次柱层析法对浸提液中的褐藻黄素进行纯化，最后经制备薄层层析法或制备高效液相色谱法进一步纯化得到纯度９０％以上或９９％以上的褐藻黄素标准品。本发明专利技术工艺简单、经济、高效，为褐藻黄素工业化生产和提高海藻的工业利用率提供了实验依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然产物提取
更具体地，本专利技术涉及一种从褐藻中提取褐 藻黄素的方法。
技术介绍
褐藻黄素，又名墨角藻黄素、岩藻黄质，是一种重要的类胡萝卜素，呈黄褐色，具有 非常强的抗氧化作用，分子式为C42H58O6, CAS登录号3351-86-8。褐藻黄素大量存在于褐藻和硅藻中，目前尚未发现在其他藻类和陆生植物中存在 褐藻黄素。褐藻黄素作为一种很强的抗氧化剂，甚至优于维生素C和维生素E，具有抗衰 老、增强免疫力、预防、治疗癌症的作用，可添加到非处方药或营养保健品中。日本北海道大 学研究生院细川雅史教授领导的研究小组发现褐藻黄素具有抑制癌细胞增殖的作用，使癌 细胞增殖率约减少15%，远远超过水果和蔬菜色素成分。另外，日本北海道大学研究人员 Hayato Maeda通过小鼠实验还发现褐藻黄素具有显著的减肥功效，认为是通过两种方式消 除脂肪堆积的(1)增强了 UCP 1蛋白在脂肪组织中的表达，这种蛋白可以促进脂肪分解； ⑵刺激肝脏生成降低胆固醇水平的DHA。在动物实验中，研究人员证实褐藻黄素不会引起 实验动物的成瘾，也没有任何其它的副作用。褐藻黄素拥有如此多的对人类健康有益的生物学功能，拥有非常广阔的开发利用 价值。但褐藻黄素的大规模提取技术及其应用的研究在国内较少，即使在国外，褐藻黄素大 规模提取分离技术亦不成熟。现在市场上出售的褐藻黄素产品成本高，价格昂贵，尚不能达 到大众消费水平。海带属褐藻属，含有大量的褐藻黄素，约47. 5mg/100g (干重)，占海带中类胡萝卜 素总量的60%以上。我国海带年产量达50万吨(鲜品)，占世界年总产量的一半以上。但 我国海带的工业利用率仅为30%，还有约70%具有很大经济效益的成分(如褐藻黄素，褐 藻糖胶)被丢弃掉了，造成了大量自然资源的浪费。专利CN 100999508A公开了一种从褐藻中提取藻褐黄素的方法，该方法以褐藻为 原料，经60%-100%乙醇提取、浓缩、过滤沉淀、大孔吸附树脂柱层析、喷雾干燥制得产品， 经HPLC法测定，产品中褐藻黄素的重量含量为-20%。本方法存在浸提时间长，提取得 率较低，杂质多等缺陷。专利CN 1706836A公开了一种从海藻中分离褐藻黄素的方法，该方法为将海藻用 二甲基亚砜在黑暗中浸提，浸提时间为15-60分钟，二甲基亚砜的用量为2-6ml/每克海藻。 然后用0. 5-1. 5倍体积的乙酸乙酯和1倍体积的0. 25-3. Omol/L的(NH4)2SO4溶液将浸提 液中的色素萃取到乙酸乙酯中，最后经过3-4次硅胶层析柱得到高纯度的褐藻黄素。此方 法与传统的方法相比缩短了提取时间，褐藻黄素的得率也提高了，但二甲基亚砜作为浸提 溶剂存在一定的缺陷(1) 二甲基亚砜与各种溶剂互溶性好，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机 溶剂，经过乙酸乙酯和硫酸铵溶液萃取后，在乙酸乙酯相中有残留，而二甲基亚砜又具有高沸点，不能通过低温减压蒸馏的方法除去，使得样品无法干燥，并且它的存在会影响之后的褐藻黄素纯化；(2)乙酸乙酯对浸提液的萃取是将二甲基亚砜溶液中的所有色素全部转移，没有 实现色素分离，所以之后要经过多次的柱层析才能得到高纯度的褐藻黄素。如果能在萃取 时除去部分杂质，便能简化之后的纯化过程。本专利技术提取褐藻黄素时将粉碎的褐藻先经过水溶涨预处理，再用水溶性有机溶剂 在黑暗中浸提1-3次，依次采用萃取法，两次柱层析法对浸提液中的褐藻黄素进行纯化。水 对海带的预处理可能改变了海带表面胶质层的组织结构和细胞的渗透压，防止有机溶剂使 海藻细胞壁硬化，相同时间内使浸提液中褐藻黄素的含量提高了两倍多，叶绿素a的含量 降低，改善了传统色素提取法提取褐藻黄素，浸提时间长，提取得率较低，杂质多的缺陷，仅 需一小时就能使褐藻黄素浸提得率在70%以上。萃取时只针对褐藻黄素，其它杂质大部分 都留在了浸提液中。与高效的DMSO提取法相比，提取效率更高，分离方法更简便，成本更 低。
技术实现思路
[要解决的技术问题] 本专利技术的目的是提供。[技术方案]本专利技术是通过下述技术方案实现的。本专利技术涉及。该方法的步骤如下粉碎的褐藻 先用水进行水溶涨预处理5-20min，然后在避光的条件下用甲醇、丙酮或二甲基亚砜水溶性 有机溶剂进行浸提，其浸提液在除去不溶物后使用正己烷萃取剂萃取，其萃取液使用硅胶 柱层析分离两次，该层析液然后进行制备薄层层析分离，这样分离得到纯度90%以上的褐藻黄素。根据本专利技术的一种优选实施方式，所述的层析液进行制备高效液相色谱分离，这 样分离得到纯度99%以上的褐藻黄素。根据本专利技术的另一种优选实施方式，所述的粉碎褐藻是淡干褐藻于室温下用自来 水清洗2-3次，除去附着在其表面上的泥沙杂物，然后在阴暗处自然风干，再用粉碎机粉碎 至-30目的褐藻。根据本专利技术的另一种优选实施方式，所述的褐藻是一种或多种选择自海带、马尾 藻、墨角藻、裙带菜或羊栖菜的褐藻。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在所述的水溶涨预处理中，所述褐藻与水的 重量比是1 3-6。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在所述的水溶性有机溶剂浸提中，所述的褐 藻在浸提温度15-35°C、褐藻重量克与水溶性有机溶剂体积毫升之比1 3-7的条件下浸提 20-60min，重复浸提1-3次。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在所述的萃取中，所述萃取剂与所述浸提液 的体积比是0.5-1. 5 1。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在所述的两次硅胶柱层析分离中，第一次流动相是由丙酮与正己烷按照体积比1 2至1 3组成的；第二次流动相是由丙酮与氯仿 按照体积比1 6至1 13组成的。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在所述的制备薄层层析分离中，展开剂是由 丙酮与氯仿按照体积比1 9-1 12组成的。根据本专利技术的另一种优选实施方式，在所述制备高效液相色谱分离中，流动相是 由甲醇与水按照体积比85 15至90 10组成的。下面将更详细地描述本专利技术。本专利技术涉及。该方法的步骤如下粉碎的褐藻 先用水进行水溶涨预处理5-20min，然后在避光的条件下用甲醇、丙酮或二甲基亚砜水溶性 有机溶剂进行浸提，其浸提液在除去不溶物后使用正己烷萃取剂萃取，其萃取液使用硅胶 柱层析分离两次，该层析液然后进行制备薄层层析分离，这样分离得到纯度90%以上的褐藻黄素。根据本专利技术，所述的褐藻是一种或多种选择自海带、马尾藻、墨角藻、裙带菜或羊 栖菜的褐藻。海带是一种在低温海水中生长的大型海生褐藻植物。海带一般长2-4米，最长达7 米。可分固着器、柄部和叶片三部分。固着器叉形分枝，用以附着海底岩石。柄部短粗，圆 柱形。叶片狭长，带形。它分布在中国北部及东南沿海及朝鲜、日本太平洋地区沿岸。马尾藻藻体分为固着器、主干和“叶”三部分。固着器盘状或假根状等；主干圆柱 状，向四外分枝；“叶”扁平或棍棒状，扁平叶在中央有中肋。从叶状体的柄长出气囊和生殖 托。它生长在低潮带石沼中或潮下带2-3米水深处的岩石上。我国是马尾藻主要产地之一， 盛产于广东、广西、海南岛沿海。墨角藻为多年生藻类，呈扁平或圆柱形状，二叉状分枝或在主干周围呈辐射状分 枝。顶端生长，每个表皮细胞内具有数个盘状色素体。大部分墨角藻分布在热带和亚热带 海洋。裙带菜的孢子体黄褐色，外形很象破本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从褐藻中提取褐藻黄素的方法，其特征在于该方法的步骤如下：粉碎的褐藻先用水进行水溶涨预处理５－２０ｍｉｎ，然后在避光的条件下用甲醇、丙酮或二甲基亚砜水溶性有机溶剂进行浸提，其浸提液在除去不溶物后使用正己烷萃取剂萃取，其萃取液使用硅胶柱层析分离两次，该层析液然后进行制备薄层层析分离，这样分离得到纯度９０％以上的褐藻黄素。

【技术特征摘要】
一种从褐藻中提取褐藻黄素的方法，其特征在于该方法的步骤如下粉碎的褐藻先用水进行水溶涨预处理5 20min，然后在避光的条件下用甲醇、丙酮或二甲基亚砜水溶性有机溶剂进行浸提，其浸提液在除去不溶物后使用正己烷萃取剂萃取，其萃取液使用硅胶柱层析分离两次，该层析液然后进行制备薄层层析分离，这样分离得到纯度90％以上的褐藻黄素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的层析液进行制备高效液相色谱分 离，这样分离得到纯度99%以上的褐藻黄素。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的粉碎褐藻是淡干褐藻于室温下用自 来水清洗2-3次，除去附着在其表面上的泥沙杂物，然后在阴暗处自然风干，再用粉碎机粉 碎至-30目的褐藻。4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于所述的褐藻是一种或多种选择自海带、 马尾藻、墨角藻、裙带菜或羊栖菜的褐藻。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在所述的水溶涨预处理中，所述褐藻与水...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕广，孟永宏，徐志文，
申请(专利权)人：秦皇岛领先科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：13[中国|河北]