海产绿藻之培养方法技术

技术编号:28580 阅读:299 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
海产绿藻之培养方法,系利用海水系培养基进行培养海产绿藻,其特征为,于该培养基中,添加选自碳酸氢盐,乙酸和乙酸盐中至少一种为碳源,并加生物素(biotin)以进行培养者.(*该技术在2005年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】
本专利技术系关于海产绿藻之培养方法,尤指可提高廿碳五烯酸含量,以提高所培养之海产绿藻中总脂价含量,且可加速生育速度的海产绿藻培养方法。廿碳五烯酸(Eicosapentanoic    acid以下称EPA)是生物体内各种前列腺素(Prostaglandin)关联物质之前驱体,近年来因发现具有抗血小板凝集等生理活性,颇受瞩目。以往,EPA虽可由鱼油分离精制,但对鱼油中之总脂质而言,EPA含量低至10-15%左右,且在鱼油中,EPA以外的高纯度不饱和脂肪酸中,含有较大量与EPA构造相似的脂肪酸,不容易进一步加以浓缩。另方面,海产绿藻在一定条件下培养时,其EPA含量可达相当于总脂肪酸量之30%左右或以上,比鱼油为高。然而,海产绿藻之生育速度慢,且总脂肪酸含量低,故绝对量亦低,为其问题所在。因此,本专利技术之目的,在于提供一种海产绿藻之培养方法,可提高总脂质量(因而可提高EPA含量)而且可提高生育速度。依照本专利技术所提供之海产绿藻培养方法,是利用海水系培养基培养海产绿藻,其特征为,在该培养基中,添加选自碳酸氢盐,乙酸和乙酸盐中,至少一种为碳源,并加生物素加以培养者。兹进一步详述本专利技术。-->如上所述,本专利技术海产绿藻之培养方法,其特征在于采用之培养基,系于海水系培养基中添加特定碳源及生物素。所用基本培养基,凡天然海水或人工海水(总称「海水培养基」)均可用。然而,在培养基中之氯化钠浓度以0.1-0.2重量%为佳(使用天然海水时,可藉加水等以调节其浓度)。氯化钠含量超出此范围时,生育速度会显著下降,附带降低EPA含量。依照本专利技术,在上述海水系培养基所添加之碳源,有碳酸氢盐,乙酸,乙酸盐,或其任二种以上之混合物。此碳源之添加量,通常为每公升培养基约30至1000毫克。此添加量未满30毫克/公升培养基,则结果无法提高所培养绿藻之总脂质含量,另方面,添加量如超过1000毫克/公升培养基,显示不出效果有何特殊提高。碳源较佳添加量为100-600毫克/公升培养基。碳酸氢钠之例有碳酸氢钠,碳酸氢钾等,乙酸盐则有乙酸钠,乙酸钾,乙酸铵等。依照本专利技术,与上述碳源同时添加于海水系培养基的生物素(biotin),其量无特别规定,惟在0.1微克/公升培养基以下时,几天效果。生物素较佳添加量为0.5-10微克。除上述碳源和生物素外,海水系培养基尚可添加硫酸铵等氮源,过酸钙等磷源。氮源以约100毫克/公升培养基之比率,而磷源以约10毫克/公升培养基之比率添加为佳。培养基之pH值会随培养时间经过而变化,但至少在海产绿藻培养开始之前(即海产绿藻接种之前)的培养基,以设定于6至8之pH值为佳。在本专利技术中,采用上述培养基时,海产绿藻(例如chlorellaminutissima)最好在15℃至25℃温度培养。培养温度超出-->此范围时,生育速度下降,且绿藻中EPA含量有下降之虞。培养种间通常为3-20天。依照本专利技术培养海产绿藻时,绿藻接种量无特别限制,通常是以0-0.5克(湿菌体重量)/公升培养基之比率接种。依照本专利技术海产绿藻培养方法,可加快生育速度,保持总脂质中所占EPA含量高,得以安定生产总脂质含量高之海产绿藻,此与选自碳酸氢盐,乙酸和乙酸盐群中选出之至少一种碳源,以及生物素的相乘效果,据推论系脂肪酸生成第一步骤中,促进丙二醯基COA生成之故。又,利用光合作用之碳源供给方法,已知有将碳酸气在暴气中混入之方法,但依本专利技术,与习知方法相较,碳源之利用较佳,可降低生产成本。依照本专利技术培养海产绿藻后,将培养绿藻菌体以适当溶剂,例如己烷和异丙醇之混合溶剂萃取,分离脂质成分,利用常法卤化分解。除去不卤化成分后,收集脂肪酸,以尿素附加物法饱和,并除去不饱和单脂肪酸。如此所得脂肪酸,其EPA含量相当高,如欲再提高纯度,则可利用矽胶等柱型色层分析法。藉此柱型色层分析法分离,可得95%以上之纯度。兹记述本专利技术实例如下。实施例表1所示碳源和生物素,分别以该表所示比率(/公升培养基),添加于海水系基本培养液(以下称BM)调制成培养基,pH调节至7.4。基本培养液之组成如表2所示。如此备妥之各培养基。接种海产绿藻(0.1克/公升培养基)后以萤光灯连续照射,在20℃,于-->暴气下培养4天。培养完成后,利用离心分离法收集菌体冷冻干燥后,萃取脂质,分析脂肪酸组成分。结果如表3所示。又,生育速度是以培养完成时的菌体浓度(湿菌体重量/公升培养基)表示。表1    (培养基组成分)-->-->由表3所示结果可知,本专利技术方法(培养基4-6)与其他方法(培养基1-3)相较,确定生育速度加快,总脂质含量增加。此结果虽不改变EPA含量,但依照本专利技术,可显著提高EPA的总收量。本文档来自技高网...

【技术保护点】
海产绿藻之培养方法,系列用海水系培养基培养海产绿藻,其特征为,在该培养基中,添加选自碳酸氢钠,乙酸和乙酸钠中至少一种碳源,以及生物素,加以培养者。

【技术特征摘要】
1、海产绿藻之培养方法,系利用海水系培养基培养海产绿藻,其特征为,在该培养基中,添加选自碳酸氢钠,乙酸和乙酸钠中至少一种碳源,以及生物素,加以培养者。2、如请求专利...

【专利技术属性】
技术研发人员:濑户明藤田匡
申请(专利权)人:日清制油株式会社
类型:发明
国别省市:JP[日本]

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