【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析化学及临床检验，特别涉及一种β-半乳糖苷酶的活性检测试剂盒与方法。
技术介绍
1、β-半乳糖苷酶(β-gal)作为细胞溶酶体里一种水解酶，在卵巢癌细胞中会过量表达，因此可作为原发性卵巢癌的特异性生物标志物。因此，建立灵活、准确、高灵敏、高便携的β-半乳糖苷酶活性分析方法对卵巢癌的早期诊断具有重要意义。
2、目前已经报道了多种β-半乳糖苷酶的检测方法，包括比色法、电化学法、表面增强拉曼散射法和荧光法等。其中，荧光法具有较高的灵敏度和选择性，广泛应用于酶活性检测中。此外，光热法能避免生物样品在紫外和可见区域竞争性吸收引起的干扰，在酶活性检测中展现出独特优势。而荧光-光热双模式分析法不仅具有荧光法和光热法的优点，还提高了检测结果的准确性和可靠性，是一种更有效、更经济的检测方法。因此，开发简便、灵敏、准确的荧光-光热双模式的β-半乳糖苷酶活性检测方具有十分重要的意义。
3、聚合物点(polymer dots,pds)通过聚合物单体与交联剂之间的交联反应产生，通常具有交联增强荧光发射。pds的制备工艺简单、快速、低成本、绿色温和(低温、低能量、有机溶剂较少)。然而，基于pds的荧光分析是一种单发射检测模式，为了更好地避免复杂样品对酶活性检测具有干扰，会对准确性、精密度和灵敏度产生影响。
4、因此，有必要开发一种准确性、精密度和灵敏度高的β-半乳糖苷酶的活性检测试剂盒与方法。
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供一种β-半乳糖苷酶的活性检
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、在本专利技术的第一方面，提供了一种β-半乳糖苷酶的活性检测试剂盒，所述试剂盒包括：
4、酶解反应底物4-氨基苯基-β-d-吡喃半乳糖苷；
5、交联剂；
6、缓冲液；
7、和β-半乳糖苷酶。
8、进一步地，所述交联剂包括二乙烯三胺、三乙烯四胺和四乙烯五胺中的至少一种；所述缓冲液包括pipes缓冲液、pbs缓冲液、hepes缓冲液中的至少一种。
9、在本专利技术的第二方面，提供了一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，所述方法采用所述的试剂盒，所述方法包括：
10、将酶解反应底物、缓冲液与待测血清混匀进行酶解反应，得到混合液；
11、向所述混合液加入交联剂进行交联反应，得到级联聚合物；
12、所述交联反应中，采用808nm激光激发，用智能手机辅助的便携式红外成像仪记录得到溶液温度，并根据以温度为纵坐标建立的β-半乳糖苷酶活性的响应标准曲线，得到待测血清中可视化的β-半乳糖苷酶含量。
13、进一步地，所述酶解反应底物、缓冲液与待测血清的体积比范围为100：90±5：10±2；
14、进一步地，所述交联剂可直接加入交联剂或溶解于乙醇溶液中制备成二乙烯三胺(20％±10％，v/v)的乙醇溶液加入或者配制成含有交联剂的pipes缓冲液加入(交联剂的pipes缓冲液中交联剂的质量分数为1％-20％)。
15、所述酶解反应底物、交联剂的用量比为(1.25-10)mm：(5-25)μl。
16、进一步地，所述酶解反应于温度20～37℃的恒温震荡条件下进行。
17、进一步地，所述交联反应于室温下进行。
18、进一步地，所述以温度为纵坐标建立的β-半乳糖苷酶活性的响应标准曲线为y＝0.3519x+0.2809。
19、在本专利技术的第三方面，提供了一种卵巢癌细胞中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，所述方法采用所述的试剂盒，所述方法包括：
20、将卵巢癌细胞与酶解反应底物、缓冲液以及无酚红培养基进行酶解反应，后加入交联剂进行孵育，用激光扫描共聚焦显微镜在63倍物镜、405nm激发波长下对所有细胞成像，采集460～580nm范围内的信号，根据荧光变化获得卵巢癌细胞中的β-半乳糖苷酶含量。
21、进一步地，所述酶解反应底物、缓冲液以及无酚红培养基的添加比例可根据情况调整；
22、作为一种具体的实施方式，4-氨基苯基-β-d-吡喃半乳糖苷浓度为2±0.5mg ml-1，无酚红培养基的体积与(酶解反应底物+缓冲液)的体积和的比值为：500±50：8±3。
23、在本专利技术的第四方面，提供了一种β-半乳糖苷酶的活性检测试剂盒，所述试剂盒包括：
24、酶解反应底物4-氨基苯基-β-d-吡喃半乳糖苷；
25、交联剂；
26、缓冲液；
27、β-半乳糖苷酶；
28、和cdte@sio2量子点。
29、在本专利技术的第五方面，提供了一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，所述方法采用所述的试剂盒，所述方法包括：
30、将酶解反应底物、缓冲液与待测血清混匀进行酶解反应，得到混合液；
31、向所述混合液加入交联剂进行交联反应，得到级联聚合物；
32、向所述级联聚合物加入cdte@sio2量子点，检测混合液的荧光信号，根据特征绿色荧光和特征红色荧光的变化分析，得到待测血清中可视化的β-半乳糖苷酶含量。
33、进一步地，所述酶解反应底物、交联剂、cdte@sio2量子点的用量比为(1.25-10)mm：(5-25)μl：(1-5)μl。
34、进一步地，所述酶解反应于温度20～37℃的恒温震荡条件下进行。
35、进一步地，所述交联反应于室温下进行。
36、进一步地，所述检测混合液的荧光信号，根据特征绿色荧光和特征红色荧光的变化分析，得到待测血清中可视化的β-半乳糖苷酶含量，包括以下方式之一进行检测：
37、荧光光谱仪检测：于380nm激发下分别读取505nm处和657nm处的发射峰峰值，并计算505nm和657nm的荧光强度比，通过以比率荧光为纵坐标建立的β-半乳糖苷酶活性的响应标准曲线y＝0.0287x-0.0909，得到待测血清中可视化的β-半乳糖苷酶含量；
38、或者在365nm紫外光下用智能手机检测色度读取rgb值，通过以比率色度为纵坐标建立的β-半乳糖苷酶活性的响应标准曲线y＝0.0208x-0.0413，得到待测血清中可视化的β-半乳糖苷酶含量。
39、本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
40、1、本专利技术实施例提供的一种β-半乳糖苷酶的活性检测试剂盒，所述试剂盒包括：酶解反应底物4-氨基苯基-β-d-吡喃半乳糖苷；交联剂二乙烯三胺；缓冲液；和β-半乳糖苷酶。(1)可以对待测血清样本中β-半乳糖苷酶进行活性检测：酶解反应中，采用808nm激光激发，用智能手机辅助的便携式红外成像仪记录得到溶液温度，并根据以温度为纵坐标建立的β-半乳糖苷酶活性的响应标准曲线，得到本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种β-半乳糖苷酶的活性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
2.根据权利要求1所述的一种β-半乳糖苷酶的活性检测试剂盒，其特征在于，所述交联剂包括二乙烯三胺、三乙烯四胺和四乙烯五胺中的至少一种；所述缓冲液包括PIPES缓冲液、PBS缓冲液、HEPES缓冲液中的至少一种。
3.一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，其特征在于，所述方法采用权利要求1-2任一所述的试剂盒，所述方法包括：
4.根据权利要求3所述的一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，其特征在于，所述酶解反应底物与交联剂的用量比为(1.25-10)mM：(5-25)μL。
5.根据权利要求3所述的一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，其特征在于，所述以温度为纵坐标建立的β-半乳糖苷酶活性的响应标准曲线为y＝0.3519x+0.2809。
6.一种卵巢癌细胞中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，其特征在于，所述方法采用权利要求1-2任一所述的试剂盒，所述方法包括：
7.一种β-半乳糖苷酶的活性检测试剂盒，其特征在于，所
8.一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，其特征在于，所述方法采用权利要求7所述的试剂盒，所述方法包括：
9.根据权利要求7所述的一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，其特征在于，所述酶解反应底物、交联剂、CdTe@SiO2量子点的用量比为(1.25-10)mM：(5-25)μL：(1-5)μL。
10.根据权利要求7所述的一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，其特征在于，所述检测混合液的荧光信号，根据特征绿色荧光和特征红色荧光的变化分析，得到待测血清中可视化的β-半乳糖苷酶含量，包括以下方式之一进行检测：
...【技术特征摘要】
1.一种β-半乳糖苷酶的活性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
2.根据权利要求1所述的一种β-半乳糖苷酶的活性检测试剂盒，其特征在于，所述交联剂包括二乙烯三胺、三乙烯四胺和四乙烯五胺中的至少一种；所述缓冲液包括pipes缓冲液、pbs缓冲液、hepes缓冲液中的至少一种。
3.一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，其特征在于，所述方法采用权利要求1-2任一所述的试剂盒，所述方法包括：
4.根据权利要求3所述的一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，其特征在于，所述酶解反应底物与交联剂的用量比为(1.25-10)mm：(5-25)μl。
5.根据权利要求3所述的一种待测血清样本中β-半乳糖苷酶的活性检测方法，其特征在于，所述以温度为纵坐标建立的β-半乳糖苷酶活性的响应标准曲线为y＝0.3519x+0.2809。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯晋轩，肖玉秀，魏中煜，李朔，
申请(专利权)人：武汉大学中南医院，
类型：发明
国别省市：
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