DEAE层析替代膜包浓缩工艺制造技术

本发明专利技术提供DEAE层析替代膜包浓缩工艺，将裂解液沉淀后制备上样样品进行DEAE层析，所述DEAE层析过程包括以下步骤：步骤一、清洗；步骤二、平衡层析；步骤三、上样；步骤四、冲洗；步骤五、洗杂；步骤六、洗脱；步骤七、再生，该DEAE层析工艺在增加超螺旋比例和产率、操作和生产工艺上有很大提高，直接运用整体柱DEAE层析后，样品较纯，体积明显缩小。仅需小体积倍数浓缩换液以保证较高回收率，同时简化了浓缩工艺，相比于传统多步浓缩纯化工艺，超螺旋质粒产品效果相当，但能够有效增加了产品研发的灵活性，降低了研发负担和研发成本，又利用该工艺普及和应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及超螺旋质粒浓缩纯化，具体为deae层析替代膜包浓缩工艺。

技术介绍

1、超螺旋质粒浓缩纯化一直是mrna疫苗的上游关键工艺，膜包使用具有一定成本和风险。在大肠杆菌收获后，经过碱裂解和深层过滤得到较大体积澄清裂解液。此过程通常需要浓缩10-20倍并换液5-10倍。为实现大体积快速浓缩和换液目的，膜包有高透过端通量。在孔径的选择上，大于6k bp质粒通常选择300kd孔径膜包，而3-6k bp质粒可选择100kd膜包，3k bp以下可选择50/30kd以保证良好的截留效果，当然更大的孔径有利去除更多的rna、hcd、hcp，从而减轻下游纯化压力。

2、但是在现有的技术中需要注意的是，超螺旋质粒较为脆弱，过高的流速、tmp和过长的处理时间可能会导致开环比例的上升，实际操作中往往造成超螺旋质粒的得率非常低。因此本专利技术提供deae层析替代膜包浓缩工艺。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的不足，本专利技术目的是提供deae层析替代膜包浓缩工艺，以解决上述
技术介绍
中提出的问题，本专利技术简化本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.DEAE层析替代膜包浓缩工艺，其特征在于：将裂解液沉淀后制备上样样品进行DEAE层析，所述DEAE层析过程包括以下步骤：步骤一、清洗；步骤二、平衡层析；步骤三、上样；步骤四、冲洗；步骤五、洗杂；步骤六、洗脱；步骤七、再生。

2.根据权利要求1所述的DEAE层析替代膜包浓缩工艺，其特征在于：所述步骤一中，使用氢氧化钠进行冲洗。

3.根据权利要求2所述的DEAE层析替代膜包浓缩工艺，其特征在于：冲洗过程中，冲洗层析柱≥1.2CV，浸泡≥0.5h。

4.根据权利要求1所述的DEAE层析替代膜包浓缩工艺，其特征在于：平衡层析中用注射用水冲洗至电导和紫外平衡...

【技术特征摘要】

1.deae层析替代膜包浓缩工艺，其特征在于：将裂解液沉淀后制备上样样品进行deae层析，所述deae层析过程包括以下步骤：步骤一、清洗；步骤二、平衡层析；步骤三、上样；步骤四、冲洗；步骤五、洗杂；步骤六、洗脱；步骤七、再生。

2.根据权利要求1所述的deae层析替代膜包浓缩工艺，其特征在于：所述步骤一中，使用氢氧化钠进行冲洗。

3.根据权利要求2所述的deae层析替代膜包浓缩工艺，其特征在于：冲洗过程中，冲洗层析柱≥1.2cv，浸泡≥0.5h。

4.根据权利要求1所述的deae层析替代膜包浓缩工艺，其特征在于：平衡层析中用注射用...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊长云，杨勇军，
申请(专利权)人：宁波君健生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：