【技术实现步骤摘要】
本揭示内容涉及一种检测目标序列的检测套组以及检测方法。
技术介绍
1、核酸环形恒温放大(loop-mediated amplification；lamp)法是2000年由日本notomi等人研发的核酸放大技术，在恒温环境、不需要精密器材即可放大核酸，具有操作简单以及反应时间短等优点，适合用来作为病原菌检测的工具，并且容易开发成快速定点照护(point-of-care testing；poct)的检测试剂。然而lamp法存在着非特异性放大的背景噪声过高的问题，对于灵敏度造成了限制。
2、因此，如何能提供降低背景噪声以提升灵敏度的lamp法检测套组，是待解决的问题。
技术实现思路
1、本揭示内容中的一些实施方式中还提供一种使用核酸环形恒温放大法检测目标序列的检测方法，包含：提供检体以及检测套组，其中检测套组包含引子组合物以及三股核酸探针，其中引子组合物包含内部引子对、环状引子对以及外部引子对，内部引子对、环状引子对或其组合中包含至少一探针识别引子，至少一探针识别引子包含探针结合区域；混合检体、引子组合物以及三股核酸探针以获得反应液；反应液进行核酸环形恒温放大反应，其中当检体包含该目标序列，引子组合物识别目标序列后生成包含探针结合区域的双股核酸增幅产物，并且三股核酸探针经由氢键结合上探针结合区域，释放光学信号；以及根据光学信号，分析双股核酸增幅产物的有无，以判断检体中是否存在目标序列，其中当产生双股核酸增幅产物，判断检体中存在目标序列。
2、在一些实施方式中，目标
3、在一些实施方式中，检体包含伤口检体、组织检体、唾液检体、血液检体或其组合。
4、在一些实施方式中，混合检体、引子组合物以及三股核酸探针成反应液的步骤，包含混合检体、引子组合物、三股核酸探针、核酸放大反应液以及链置换去氧核糖核酸聚合酶。
5、在一些实施方式中，在混合检体、引子组合物以及三股核酸探针以获得反应液的步骤之前，包含在80℃至100℃之间的温度加热检体。
6、本揭示内容中的一些实施方式中提供一种用于检测目标序列的检测套组，包含引子组合物以及三股核酸探针，其中引子组合物包含内部引子对、环状引子对以及外部引子对，内部引子对、环状引子对或其组合中包含至少一探针识别引子，至少一探针识别引子包含探针结合区域。
7、在一些实施方式中，内部引子对包含正向内部引子以及反向内部引子，当至少一探针识别引子为正向内部引子时，至少一探针识别引子的核苷酸序列由5’端至3’端依序包含f1c序列、探针结合区域、以及f2序列，当至少一探针识别引子为反向内部引子时，至少一探针识别引子的核苷酸序列由5’端至3’端依序包含b1c序列、探针结合区域、以及b2序列。
8、在一些实施方式中，当至少一探针识别引子为正向内部引子时，至少一探针识别引子的核苷酸序列为seq id no:7。
9、在一些实施方式中，当至少一探针识别引子为反向内部引子时，至少一探针识别引子的核苷酸序列为seq id no:8。
10、在一些实施方式中，环状引子对包含正向环状引子以及反向环状引子，当至少一探针识别引子为正向环状引子时，至少一探针识别引子的核苷酸序列由5’端至3’端依序包含探针结合区域以及正向环状序列，当至少一探针识别引子为反向环状引子时，至少一探针识别引子的核苷酸序列由5’端至3’端依序包含探针结合区域以及反向环状序列。
11、在一些实施方式中，当至少一探针识别引子为正向环状引子时，至少一探针识别引子的核苷酸序列选自于由seq id no:9以及seq id no:10所组成的群组。
12、在一些实施方式中，至少一探针识别引子的核苷酸序列选自于由seq id no:7至seq id no:10所组成的群组。
13、在一些实施方式中，三股核酸探针包含探针序列，其中探针序列选自于由seq idno:11至seq id no:12所组成的群组。
14、在一些实施方式中，当至少一探针识别引子的核苷酸序列为seq id no:7、seq idno:8、或seq id no:9时，探针序列为seq id no:11。
15、在一些实施方式中，当至少一探针识别引子的核苷酸序列为seq id no:10时，探针序列为seq id no:12。
16、在一些实施方式中，三股核酸探针由5’端至3’端或3’端至5’端依序包含荧光基团、探针序列、以及淬灭基团。
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1.一种使用核酸环形恒温放大法检测目标序列的检测方法，包含：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其中所述目标序列为B型链球菌的核酸序列。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其中所述检体包含伤口检体、组织检体、唾液检体、血液检体或其组合。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其中混合所述检体、所述引子组合物以及所述三股核酸探针成所述反应液的步骤，包含混合所述检体、所述引子组合物、所述三股核酸探针、核酸放大反应液以及链置换去氧核糖核酸聚合酶。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其中在混合所述检体、所述引子组合物以及所述三股核酸探针以获得所述反应液的步骤之前，包含在80℃至100℃之间的温度加热所述检体。
6.一种用于检测目标序列的检测套组，包含：
7.根据权利要求6所述的检测套组，其中所述内部引子对包含正向内部引子以及反向内部引子，
8.根据权利要求7所述的检测套组，其中当所述至少一探针识别引子为所述正向内部引子时，所述至少一探针识别引子的核苷酸序列为SEQ ID NO:7。
9.根据权利要
10.根据权利要求6所述的检测套组，其中所述环状引子对包含正向环状引子以及反向环状引子，
11.根据权利要求10所述的检测套组，其中当所述至少一探针识别引子为所述正向环状引子时，所述至少一探针识别引子的核苷酸序列选自于由SEQ ID NO:9以及SEQ ID NO:10所组成的群组。
12.根据权利要求6所述的检测套组，其中所述至少一探针识别引子的核苷酸序列选自于由SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10所组成的群组。
13.根据权利要求6所述的检测套组，其中所述三股核酸探针包含探针序列，其中所述探针序列选自于由SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:12所组成的群组。
14.根据权利要求13所述的检测套组，其中当所述至少一探针识别引子的核苷酸序列为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、或SEQ ID NO:9时，所述探针序列为SEQ ID NO:11。
15.根据权利要求13所述的检测套组，其中当所述至少一探针识别引子的核苷酸序列为SEQ ID NO:10时，所述探针序列为SEQ ID NO:12。
16.根据权利要求13所述的检测套组，其中所述三股核酸探针由5’端至3’端或3’端至5’端依序包含荧光基团、所述探针序列、以及淬灭基团。
...【技术特征摘要】
1.一种使用核酸环形恒温放大法检测目标序列的检测方法，包含：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其中所述目标序列为b型链球菌的核酸序列。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其中所述检体包含伤口检体、组织检体、唾液检体、血液检体或其组合。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其中混合所述检体、所述引子组合物以及所述三股核酸探针成所述反应液的步骤，包含混合所述检体、所述引子组合物、所述三股核酸探针、核酸放大反应液以及链置换去氧核糖核酸聚合酶。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其中在混合所述检体、所述引子组合物以及所述三股核酸探针以获得所述反应液的步骤之前，包含在80℃至100℃之间的温度加热所述检体。
6.一种用于检测目标序列的检测套组，包含：
7.根据权利要求6所述的检测套组，其中所述内部引子对包含正向内部引子以及反向内部引子，
8.根据权利要求7所述的检测套组，其中当所述至少一探针识别引子为所述正向内部引子时，所述至少一探针识别引子的核苷酸序列为seq id no:7。
9.根据权利要求7所述的检测套组，其中当所述至少一探针识别引子为所述反向内部引子时，所述至少一探针识别引子的核苷酸序列为seq id no:8。
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【专利技术属性】
技术研发人员：邱全芊，蔡昆男，张崴，周柏豪，宋政达，洪鼎钧，
申请(专利权)人：台达电子工业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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