一种围产期心肌病动物模型构建方法及系统技术方案

本发明专利技术属于生物医学技术领域，尤其涉及一种围产期心肌病动物模型构建方法及系统，选择C57BL/6JGpt小鼠作为动物模型的背景鼠，构建Rosa26‑Myh6‑mStx17‑Wpre‑PolyA基因敲入小鼠模型；根据设计方案，设计、构建和体外转录gRNA，同时构建同源重组载体，通过测序验证载体序列的正确性；将CRISPR/Cas9系统和Donorvector样品显微注射到C57BL/6JGpt背景的小鼠受精卵中；取注射后存活的受精卵移植到假孕雌鼠体内，待其怀孕产仔；受体鼠生出的F0代小仔在5‑7天剪尾及剪脚趾编号，提取基因组DNA进行PCR和测序鉴定，确认基因型；阳性F0代小鼠的繁育：阳性F0代小鼠性成熟后，与野生型背景小鼠进行交配；出生的F1代小鼠在5‑7天剪尾及剪脚趾编号，提取基因组DNA进行PCR和测序鉴定，确认基因型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学，尤其涉及一种围产期心肌病动物模型构建方法。

技术介绍

1、围产期心肌病(peripartum cardiomyopathy，ppcm)是一种罕见的心肌病，2010年欧洲心脏病学会(esc)心力衰竭协会(hfa)围产期心肌病研究小组将ppcm定义为发生在妊娠末期或分娩、流产或流产后数月内，无其他心力衰竭原因，且左心室射血分数(lvef)＜45％的一种特发性心肌病。ppcm的全球发病率逐年升高，且因地区而异。中东地区的发病率高达1/100-1/300，日本的发病率低至1/20000，美国的发病率达1/1000-1/4000，同时孕产妇年龄的增加、先兆子痫、多胎妊娠的发生都伴随着该病的发生，给患者及家庭带来了极大的负担，人们对该疾病的认识正逐渐提高，但是许多病例仍未能被及时发现，围产期心肌病的病理机制尚未完全明确，ppcm动物模型的建立是研究该疾病病理生理特征的有效手段。对于模拟ppcm的发生发展过程，了解ppcm的病理生理机制，探究ppcm的有效治疗手段提供了良好的研究模式。

2、目前动物实验研究中已经报道的围产期心肌病动物本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种围产期心肌病动物模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.权利要求1所述的围产期心肌病动物模型构建方法，其中S2步骤中的同源重组载体是通过分子克隆技术构建的。

3.权利要求1或2所述的围产期心肌病动物模型构建方法，其中S4步骤进一步包括使用PCR和测序技术对F0代小鼠进行基因型鉴定，以确认目标基因的成功敲入。

4.权利要求1所述的围产期心肌病动物模型构建方法，其中S8步骤进一步包括评估心脏功能、心脏组织学形态、心脏大小及重量、肺湿重-干重比和心肌线粒体损伤等指标，以客观反映围产期心肌病的病理特征。

5.一种用于构建围产期心肌病动...

【技术特征摘要】

1.一种围产期心肌病动物模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.权利要求1所述的围产期心肌病动物模型构建方法，其中s2步骤中的同源重组载体是通过分子克隆技术构建的。

3.权利要求1或2所述的围产期心肌病动物模型构建方法，其中s4步骤进一步包括使用pcr和测序技术对f0代小鼠进行基因型鉴定，以确认目标基因的成功敲入。

4.权利要求1所述的围产期心肌病动物模型构建方法，其中s8步骤进一步包括评估心脏功能、心脏组织学形态、心脏大小及重量、肺湿重-干重比和心肌线粒体损伤等指标，以客观反映围产期心肌病的病理特征。

5.一种用于构...

【专利技术属性】
技术研发人员：余文军，刘金平，王清鹏，
申请(专利权)人：武汉大学中南医院，
类型：发明
国别省市：