一种结合人REST协阻抑因子3蛋白的核酸适配体及其应用制造技术

技术编号：40594186 阅读：5 留言：0更新日期：2024-03-12 21:56

本发明专利技术提供一种结合人REST协阻抑因子3(RCOR3)蛋白的核酸适配体及其应用，通过改进筛选条件，筛选获得四种分子量小、化学性质稳定、易于保存和标记的能够以高亲和力结合RCOR3蛋白的核酸适配体，该核酸适配体与RCOR3蛋白结合，分别经截短至52，60，60，43个核苷酸长度后，依然能保持与RCOR3蛋白的高亲和力和高特异性结合，可用于检测、诊断、成像以及治疗等方面，应用前景广阔。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体而言，涉及一种结合人rest协阻抑因子3蛋白的核酸适配体及其应用。

技术介绍

1、人rest协阻抑因子3(rcor3)是抑制元素-1沉默转录因子协阻抑因子(repressorelement silencing transcription factor corepressor,corest)家族成员之一，其功能就是作为rest的协阻抑因子协助rest发挥转录抑制作用，rest抑制功能的发挥依赖于rcor3。

2、同时rcor3基因在多形性胶质母细胞瘤中呈低表达。rcor3基因与肿瘤免疫检查点基因mlh1、pvr、lag3呈正相关，与cd40呈负相关。rcor3基因启动子甲基化水平明显低于正常组，差异具有统计学意义(p<0.05)，并与多形性胶质母细胞瘤分期、idh突变、1p/19q缺失、平均年龄和预后相关。

3、核酸适配体(aptamer)是指通过指数富集的配基系统进化技术(selex)筛选分离得到的dna或者rna分子，它可以与其他靶标如蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至整个细胞进行高亲和力和特异性的结合，因此在生化分析，环境监测，基础医学，新药合成等方面展示广阔的前景。核酸适配体与抗体相比分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程。因此如果能找到与rcor3蛋白具有更高的亲和力，并且具有高特异性的核酸适配体，将有助于实现rcor3蛋白的高灵敏度和高特异性检测，有助于靶向rcor3蛋白的药物开发。

4、因此，急需找到一种针对rcor3蛋白的结合亲和力高，特异性好，精确截短后依然保持高结合亲和力，易于修饰和人工合成，稳定性好，使用便利的核酸适配体。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本专利技术提供了一种结合人rest协阻抑因子3蛋白的核酸适配体及其应用，通过改进筛选条件，筛选获得一种分子量小、化学性质稳定、易于保存和标记的能够以高亲和力结合rcor3蛋白的核酸适配体。rcor3蛋白与筛选得到的核酸适配体结合并且经截短至43个核苷酸长度后，依然能保持与rcor3蛋白的高亲和力和高特异性结合，可用于检测、诊断、成像以及治疗等方面，应用前景广阔。

2、一方面，本专利技术提供了一种结合rcor3蛋白的核酸适配体，所述核酸适配体具有如seq id no.1、seq id no.1-1、seq id no.1-2、seq id no.1-3、seq id no.2、seq idno.2-1、seq id no.2-2、seq id no.2-3、seq id no.3、seq id no.3-1、seq id no.3-2、seq id no.3-3、seq id no.4、seq id no.4-1、seq id no.4-2、seq id no.4-3所示的核苷酸序列中的一种或多种；和/或由如seq id no.1、seq id no.1-2、seq id no.1-3、seq idno.2、seq id no.2-1、seq idno.2-2、seq id no.2-3、seq id no.3、seq id no.3-1、seqid no.3-2、seq id no.3-3、seq id no.4、seq id no.4-1、seq id no.4-2、seq id no.4-3所示的核苷酸序列转录的rna序列中的一种或多种。

3、本专利技术人基于selex技术，设计并合成了一个随机单链dna文库和相应的引物，用来筛选具有分子量小、化学性质稳定、易于保存和标记的能够以高亲和力结合rcor3蛋白的核酸适配体，由此筛选得到一些高亲和力结合rcor3蛋白的核酸适配体，分别为seq idno.1、seq id no.2、seq id no.3和seq id no.4，该核酸适配体与rcor3蛋白具有高亲和力，并且具有高特异性。

4、本专利技术对seq id no.1进行截短，得到了seq id no.1-1、seq id no.1-2、seq idno.1-3三种截短的核酸适配体序列，相似地对seq id no.2、seq id no.3和seq id no.4进行截短，分别得到了seq id no.2-1、seq id no.2-2、seq id no.2-3；seq id no.3-1、seqid no.3-2、seq id no.3-3；seq id no.4-1、seq id no.4-2、seq id no.4-3截短的核酸适配体序列，上述12条截短的核酸适配体序列与rcor3蛋白均具有高亲和力。

5、可以理解的是，与本专利技术提供的核酸适配体具有至少30％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少94％、至少96％、至少98％或至少99％的同源性且结合rcor3蛋白的核苷酸序列，例如可将上述核酸适配体的任一个所示的核苷酸序列删除部分序列或增加部分序列，依然具有与rcor3蛋白的高亲和力，依然在本专利技术的保护范围内。

6、在一些方式中，作为对上述技术方案的改进，可对上述核酸适配体的核苷酸序列上的某一位置进行修饰，例如，磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合rcor3蛋白的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。

7、所以，在一些实施方案中，所述核酸适配体的核苷酸序列被修饰且修饰后的核酸适配体特异性结合rcor3蛋白，所述修饰选自磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧和同位素化中的至少一种，依然在本专利技术的保护范围内。

8、本专利技术所述的rcor3蛋白的氨基酸序列如seq id no.5所示。

9、进一步地，所述结合rcor3蛋白的核酸适配体，具有如seq id no.1、seq id no.1-2、seq id no.2、seq id no.2-1、seq id no.3、seq id no.3-1、seq id no.4、seq idno.4-1所示的核苷酸序列中的一种或多种；和/或由如seq id no.1、seq id no.1-2、seqid no.2、seq id no.2-1、seq id no.3、seq id no.3-1、seq id no.4、seq id no.4-1所示的核苷酸序列转录的rna序列中的一种或多种。

10、上述结合rcor3蛋白的核酸适配体的组合是经过本专利技术的测试，被证明与rcor3蛋白具有非常高的亲和力，且具有非常高的特异性的核酸适配体组合；其中seq id no.1-2、seq id no.2-1、seq id no.3-1、seq id no.4-1所示的核苷酸序列是经过截短而来的，经过本专利技术的测试，被证明其亲和力在截短前后没有变化，但其本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种结合RCOR3蛋白的核酸适配体，其特征在于，具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.1-1、SEQID NO.1-2、SEQ ID NO.1-3、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.2-1、SEQ ID NO.2-2、SEQ IDNO.2-3、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.3-1、SEQ ID NO.3-2、SEQ ID NO.3-3、SEQ ID NO.4、SEQID NO.4-1、SEQ ID NO.4-2、SEQ ID NO.4-3所示的核苷酸序列中的一种或多种；和/或由如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.1-1、SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.1-3、SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.2-1、SEQ ID NO.2-2、SEQ ID NO.2-3、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.3-1、SEQ ID NO.3-2、SEQ ID NO.3-3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.4-1、SEQ ID NO.4-2、SEQ ID NO.4-3所示的核苷酸序列转录的RNA序列中的一种或多种。

2.如权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.2-1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.3-1、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.4-1所示的核苷酸序列中的一种或多种；和/或由如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.1-2、SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.2-1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.3-1、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.4-1所示的核苷酸序列转录的RNA序列中的一种或多种。

3.如权利要求2所述的核酸适配体，其特征在于，具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列中的一种或多种；和/或由如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQID NO.3、SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列转录的RNA序列中的一种或多种。

4.如权利要求2所述的核酸适配体，其特征在于，具有如SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.2-1、SEQID NO.3-1、SEQ ID NO.4-3所示的核苷酸序列中的一种或多种；和/或由如SEQ IDNO.1-2、SEQID NO.2-1、SEQ ID NO.3-1、SEQ ID NO.4-3所示的核苷酸序列转录的RNA序列中的一种或多种。

5.一种核酸适配体的缀合物或衍生物，其特征在于，所述核酸适配体如权利要求1-4任一项所述；所述核酸适配体的缀合物包括荧光标记物；所述核酸适配体的衍生物包括由核酸适配体或核酸适配体的缀合物的核苷酸序列骨架改造成的结合RCOR3蛋白的硫代磷酸酯骨架或肽核酸。

6.一种纯化或检测RCOR3蛋白的产品，其特征在于，包括如权利要求1-4任一项所述的核酸适配体或权利要求5所述的核酸适配体的缀合物或衍生物；所述产品包括试剂盒、检测芯片、层析检测装置中的任意一种或多种。

7.一种结合RCOR3蛋白的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的在第6轮以后添加血清，具体过程为：第6轮添加10％血清，第7轮添加25％血清，第8轮添加50％血清；所述血清为人血清。

9.如权利要求1-4任一项所述的核酸适配体，或权利要求5所述的核酸适配体的缀合物或衍生物用于制备检测或纯化RCOR3蛋白的试剂的用途。

10.如权利要求1-4任一项所述的核酸适配体，或权利要求5所述的核酸适配体的缀合物或衍生物用于制备靶向到RCOR3蛋白的药物的用途。

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【技术特征摘要】

1.一种结合rcor3蛋白的核酸适配体，其特征在于，具有如seq id no.1、seq id no.1-1、seqid no.1-2、seq id no.1-3、seq id no.2、seq id no.2-1、seq id no.2-2、seq idno.2-3、seq id no.3、seq id no.3-1、seq id no.3-2、seq id no.3-3、seq id no.4、seqid no.4-1、seq id no.4-2、seq id no.4-3所示的核苷酸序列中的一种或多种；和/或由如seq id no.1、seq id no.1-1、seq id no.1-2、seq id no.1-3、seq id no.2、seq idno.2-1、seq id no.2-2、seq id no.2-3、seq id no.3、seq id no.3-1、seq id no.3-2、seq id no.3-3、seq id no.4、seq id no.4-1、seq id no.4-2、seq id no.4-3所示的核苷酸序列转录的rna序列中的一种或多种。

2.如权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，具有如seq id no.1、seq id no.1-2、seq id no.2、seq id no.2-1、seq id no.3、seq id no.3-1、seq id no.4、seq id no.4-1所示的核苷酸序列中的一种或多种；和/或由如seq id no.1、seq id no.1-2、seq idno.2、seq id no.2-1、seq id no.3、seq id no.3-1、seq id no.4、seq id no.4-1所示的核苷酸序列转录的rna序列中的一种或多种。

3.如权利要求2所述的核酸适配体，其特征在于，具有如seq id no.1、seq id...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭蔚泓，郭健，何嘉轩，刘安琪，张峥，程雪莲，罗昭锋，符婷，
申请(专利权)人：中国科学院基础医学与肿瘤研究所筹，
类型：发明
国别省市：

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