【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子技术工程领域，特别涉及一种布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法。
技术介绍
1、溴代正丁烷作为卤代烷烃类的基因毒性杂质，可与dna发生烷基化反应，引起c-fox基因表达，可能成为引发癌症的诱因。溴代正丁烷的结构式为：许多研究已证明，c-fox基因在神经网络的建立、神经递质或调质的合成与相互平衡方面具有重要作用。长期使用含有此基毒的药物，会对身体造成不可逆损伤。
2、传统的方法对溴代正丁烷的检测是采用气相色谱或者液相色谱进行检测，但是，其准确度和灵敏度不够。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种提高准确度和灵敏度的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法采用的如下技术方案：
3、一种布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，包括如下步骤：
4、步骤一、溴代正丁烷溶液的化合物库的建立
5、s1、精确称取溴代正丁烷样品，分别配制成不同浓度的溴代正丁烷样品溶液；
6、s2、pcr扩增反应：利用特定性引物分别对不同浓度的溴代正丁烷样品溶液进行特异性扩增，得到pcr产物；
7、s3、标记：对pcr产物进行物理打碎、变性，再进行免疫沉淀，得到的dna片段与不同浓度的溴代正丁烷样品溶液分别进行标记；
8、s4、溴代正丁烷溶液的化合物库的建立：标记后的dna片段与不同浓度的溴代正丁烷样品溶液混匀、变性、杂交，
9、步骤二、待检样品的检测
10、(1)称取布比卡因碱样品，配置成布比卡因碱样品溶液；
11、(2)pcr扩增反应：利用特定性引物对样品溶液进行特异性扩增，得到pcr产物；
12、(3)物理打碎：对pcr产物进行物理打碎；
13、(4)测序：将打碎后的样品用测序仪进行测序识别；
14、(5)数据分析：将测序后的数据导入溴代正丁烷限度溶液的化合物库中进行匹配，确定待检样品中溴代正丁烷的浓度。
15、优选的，免疫沉淀是在变性后的dna样品中加入抗5’-甲基化胞嘧啶核苷抗体，得到dna片段。
16、优选的，s3中物理打碎采用超声打碎。
17、优选的，s3中通过加热变性。
18、优选的，s4中采用dna微阵列芯片进行杂交，结果用芯片扫描仪检测杂交信号。
19、优选的，所述溴代正丁烷样品溶液的浓度为0-450ppm。
20、优选的，所述特定性引物的浓度为0.2-1.0μm。
21、优选的，步骤一或步骤二中pcr扩增反应的具体步骤如下：取布比卡因碱样品溶液、5u/μl takara ex taq 0.5μl、20mm 10×ex taq buffer(mg2+plus)10μl、2.5mm dntpmixture 8μl，0.2-1.0μm特定性引物10μl，加灭菌水至100μl，混合后98℃变性10分钟，68℃延伸1min，30个循环，得到pcr产物。
22、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
23、1、本专利技术利用分子技术，能批量检测出各种限度溶液，与传统的气液相相比，该方法具有极高的准确度和灵敏度，且应用广泛；由于目前药典中未对溴代正丁烷的可接受限度做出明确指标，我们按照原研药品exparel的最大日剂量为266mg/天，可接受摄入量定为120μg/天，计算的限度为(120μg/天)/(266mg/天)＝451.13ppm，因此将限度定为≤450ppm，本专利技术可以检测出浓度为0-450ppm的溴代正丁烷样品溶液；
24、2、本专利技术的方法操作简单，特定性引物是针对特定区域设计的，所以无需考虑dna甲基化状态，样品不需经过特殊处理，方法选择性强，也适用于成分复杂物质中溴代正丁烷含量的检测；
25、3、本专利技术可根据生产的实际情况，构建化合物库，此法可同时测定不同浓度的样品，大大的节约了人力物力及时间成本。
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1.一种布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于：免疫沉淀是在变性后的DNA样品中加入抗5’-甲基化胞嘧啶核苷抗体，得到DNA片段。
3.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于：S3中物理打碎采用超声打碎。
4.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于：S3中通过加热变性。
5.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于：S4中采用DNA微阵列芯片进行杂交，结果用芯片扫描仪检测杂交信号。
6.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于：所述溴代正丁烷样品溶液的浓度为0-450ppm。
7.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于：所述特定性引物的浓度为0.2-1.0μM。
8.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于，步骤一或步骤二中PC
...【技术特征摘要】
1.一种布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于：免疫沉淀是在变性后的dna样品中加入抗5’-甲基化胞嘧啶核苷抗体，得到dna片段。
3.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于：s3中物理打碎采用超声打碎。
4.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于：s3中通过加热变性。
5.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴代正丁烷残留的检测方法，其特征在于：s4中采用dna微阵列芯片进行杂交，结果用芯片扫描仪检测杂交信号。
6.根据权利要求1所述的布比卡因碱中溴...
【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，魏莉，刘磊，朱小明，
申请(专利权)人：江苏天和制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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