【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫抑制剂的检测。具体地说，本专利技术涉及庆大霉素完全抗原、利用该完全抗原获得庆大霉素单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测庆大霉素类似物中的应用。
技术介绍
1、庆大霉素(gentamicin，gm)属于氨基糖甙类抗生素，主要作用于革兰氏阴性细菌，由于其具有广谱抑菌和杀菌作用，被广泛应用于兽医临床和动物饲料添加剂。但gm的血清有效浓度与毒性浓度很相近，安全范围较小，在其应用过程中易产生毒副作用，尤其大剂量不规范使用，易导致动物性食品中gm残留超标，对人体健康构成危害，造成肾毒性和耳毒性。许多国家在动物生产中严禁使用gm或规定有严格的最高残留限量(mrl)，我国规定，动物性食品中gm的mrl为100ng/g。
2、庆大霉素在动物性食品中的残留问题也日益引起国内外人们的关注。欧洲联盟国家及日本等国家对动物源性食品中庆大霉素的最大残留限量(mrls)进行了规定，其mrls规定如下：肌肉为100μg/kg、肾脏为2500μg/kg、肝脏为600μg/kg。2002年我国国家质量监督检验检疫局出台的文件中明确限定了庆大霉素在动物源性食品中的最大残留限量，其规定如下：鸡肉100μg/kg，肝300μg/kg。
3、目前庆大霉素的检测主要包括高效液相色谱(hplc)、气相色谱质谱联用法(gc-ms)、液相色谱质谱联用法(hplc/ms)等方法，仪器昂贵，操作复杂且耗时。荧光定量免疫层析技术，是结合免疫荧光技术和传统免疫层析技术相优点的新型定量检测技术。该技术操作灵活简便、成本较低、反应时间短，能做到及时定量
技术实现思路
1、一种庆大霉素完全抗原，所述完全抗原具有式1所示的结构：
2、
3、其中，protein为蛋白质载体；
4、在一优选例中，所述蛋白质载体为选自下组中的任何一种蛋白质：牛血清白蛋白(bsa)、卵清蛋白(ova)、钥孔血蓝蛋白(klh)、人血清白蛋白(hsa)及人工合成的多聚赖氨酸(pll)等。
5、在一优选例中，所述蛋白质载体是牛血清白蛋白(bsa)、或卵清蛋白(ova)。
6、一种制备所述庆大霉素完全抗原的方法，所述方法包括步骤：
7、(1)将庆大霉素半抗原与牛血清白蛋白(bsa)或卵清蛋白(ova)连接，以制得权利要求1所述的完全抗原。
8、(a)使庆大霉素半抗原、bsa/ova用0.01m pbs(ph7.4)溶解为a液。
9、(b)将a液与10％戊二醛溶液室温反应6h，制得庆大霉素-bsa/ova偶联物，即庆大霉素完全抗原。
10、一种庆大霉素完全抗原的用途，其用于制备庆大霉素的特异性单克隆抗体。
11、一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合庆大霉素。
12、一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生。
13、在另一优选例中，所述的单克隆抗体检测庆大霉素类似物的灵敏度为2ng/ml。
14、在另一优选例中，所述的单克隆抗体不结合其它抗生素类治疗药物。
15、在另一优选例中，所述的其它抗生素类药物是四环素、新霉胺、氨苄青霉素、妥布霉素、卡那霉素。
16、一种单克隆抗体的用途，其用于制备检测样品中庆大霉素的试剂、检测卡或试剂盒。
17、在一优选例中，所述样品是标准品。
18、一种检测生物样品中是否存在庆大霉素的方法，所述方法包括步骤：
19、(a)将所述生物样品与权利要求4或5所述的单克隆抗体接触；
20、(b)检测是否形成抗原-抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在庆大霉素。
21、在一优选例中，所述单克隆抗体带有可检测标记物；优选地，所述的标记物选自下组：胶体金标记物、有色标记物或荧光标记物。
22、在本专利技术的一个优选例中，所述检测方法为荧光检测法。
23、一种检测庆大霉素类似物的荧光免疫层析检测卡，所述检测卡包括基片；吸液部件；检测部件；加样部件，其特征在于，检测部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定吸液部件和加样部件，其中，检测带上包被有权利要求1所述的完全抗原，质控带上包被有兔抗原igg。
24、在一优选例中，所述庆大霉素荧光免疫层析检测卡还包括卡盒，所述卡盒由下盖和上盖组成，上盖设有加样窗口和检测窗口，所述庆大霉素荧光免疫层析检测卡完全设置于下盖中，所述检测窗口和加样窗口分别对应与所述庆大霉素荧光免疫层析检测卡上的加样部件和质控带及检测带。
25、在一优选例中，所述上盖上还设有产品编号区；条形码识别区。
26、在一优选例中，所述基片是深色硬质基片；优选黑色pvc基片。
27、在一优选例中，所述检测部件是硝酸纤维素膜。
28、在一优选例中，所述加样部件是玻璃纤维。
29、在一优选例中，所述吸液部件是吸水纸。
30、一种检测庆大霉素类似物的检测试剂盒，所述试剂盒装有：
31、(a)权利要求9所述的庆大霉素荧光免疫层析检测卡；
32、(b)与权利要求9所述的庆大霉素荧光免疫层析检测卡配套的庆大霉素检测分析液；
33、(c)所述庆大霉素检测试剂盒检测庆大霉素类似物的使用说明书；
34、其中，所述检测分析液为包含有荧光标记的权利要求4或5所述的单克隆抗体和抗兔igg抗体的检测分析液。
35、在另一优选例中，所述检测分析液中的标记用荧光染料包括但不限于，fitc(fluorescein)、alexa fluor 647、cftm647、tritc(rhodamine)等。
36、在一优选例中，所述检测分析液的溶剂部分是含有bsa的磷酸缓冲液。
37、本专利技术的优点：
38、1.本专利技术首次公开了一种庆大霉素完全(人工)抗原的结构以及其制备方法；
39、2.本专利技术首次公开了庆大霉素完全抗原在庆大霉素抗体制备和免疫学检测领域的应用，为推进临床上庆大霉素血药浓度检测提供了可靠的方法；
40、3.本专利技术的单克隆抗体可高灵敏度地检测庆大霉素类似物，且不与其它抗生素类治疗药物发生结合；
41、4.本专利技术的庆大霉素类似物检测试剂盒可简单、快捷地现场检测庆大霉素类似物。
42、应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
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1.一种庆大霉素完全抗原，其特征在于：所述完全抗原具有式1所示的结构：
2.一种制备权利要求1所述完全抗原的方法，其特征在于：所述方法包括步骤：
3.一种权利要求1所述完全抗原的用途，其特征在于：用于制备庆大霉素的特异性单克隆抗体。
4.一种单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体特异性结合庆大霉素。
5.如权利要求4所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生。
6.权利要求4或5所述的单克隆抗体的用途，其特征在于：用于制备检测样品中庆大霉素的试剂、检测卡或试剂盒。
7.一种检测生物样品中是否存在庆大霉素的方法，其特征在于：所述方法包括步骤：
8.一种检测庆大霉素类似物的荧光免疫层析检测卡，其特征在于：所述检测卡包括基片；吸液部件；检测部件；加样部件，其特征在于，检测部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定吸液部件和加样部件，其中，检测带上包被有权利要求1所述的完全抗原，质控带上包被有兔抗原IgG。
9.根据权利要求
10.一种检测庆大霉素类似物的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒装有：
...【技术特征摘要】
1.一种庆大霉素完全抗原，其特征在于：所述完全抗原具有式1所示的结构：
2.一种制备权利要求1所述完全抗原的方法，其特征在于：所述方法包括步骤：
3.一种权利要求1所述完全抗原的用途，其特征在于：用于制备庆大霉素的特异性单克隆抗体。
4.一种单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体特异性结合庆大霉素。
5.如权利要求4所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生。
6.权利要求4或5所述的单克隆抗体的用途，其特征在于：用于制备检测样品中庆大霉素的试剂、检测卡或试剂盒。
7.一种检测生物样品中是否存在庆大霉素的方法，其特征在于：所述方法包括步骤：
8.一种检测庆大霉素类似物的荧光免...
【专利技术属性】
技术研发人员：李忠鹏，何扬锦，黄义凯，费晓旭，俞锦航，
申请(专利权)人：浙江准策生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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