氯氮平完全抗原和抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了氯氮平完全抗原及其在氯氮平抗体制备和免疫法检测中的应用。所述氯氮平完全抗原的结构如式1所示。本发明专利技术还公开了用该完全抗原制备的抗氯氮平单克隆抗体，产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞以及用于检测氯氮平类似物的检测卡和检测试剂盒。本发明专利技术公开了检测氯氮平类似物的ELISA法和荧光免疫层析法，其中荧光免疫层析法操作简单、检测时间短、成本低、特异性高、重复性好。重复性好。重复性好。

【技术实现步骤摘要】
氯氮平完全抗原和抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及精神病类药物的检测。具体地说，本专利技术涉及氯氮平完全抗原、利用该完全抗原获得氯氮平单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测氯氮平类似物中的应用。

技术介绍

[0002]氯氮平(Clozapine，CLZ)是最有效的抗精神病药物之一，和临床上常用的所有抗精神病药物相比，很少出现锥体外系副反应。它的问世大约有30年的历史，早期曾风靡一时，但在1970年由于它引起粒细胞缺乏症后便落入低谷。90年代初，由于它对急慢性精神病有较好疗效，再次广泛使用于临床。氯氮平抗精神病作用强大，但锥体外系反应较轻，这表明抗精神病作用和锥体外系反应是可以分开的。
[0003]服用相同剂量的氯氮平血药浓度存在较大的个体差异，血药浓度差异最大为94倍。其影响因素较多，包括食物、吸烟、性别、咖啡、药物相互作用、给药途径等，对指导合理应用氯氮平，提高疗效防止不良反应和中毒反应的发生有一定的帮助。氯氮平造成的不良反应较多，主要表现如下：1)镇静作用强和抗胆碱能不良反应较多，常见有头晕、无力、嗜睡、多汗、流涎、恶心、呕吐、口干、便秘、体位性低血压、心动过速；2)常见食欲增加和体重增加；3)可引起心电图异常改变。可引起脑电图改变或癫痫发作；4)也可引起血糖增高；5)严重不良反应为粒细胞缺乏症及继发性感染；6)可引起尿失禁或中枢系统紊乱，临床上应该慎用或不用。因而，临床用药必须依据患者情况，注意药物用量个体化原则，依据血药浓度调整氯氮平剂量。综上所述，为了进一步优化和规范氯氮平在不同人群中的使用，根据患者的病理生理情况调整给药方案，有必要对特定人群进行氯氮平血药浓度监测(therapeutic drug monitoring，TDM)。
[0004]《中国药典》中，测定氯氮平使用液相色谱法，目前氯氮平的检测还包括液相色谱与质谱联用法(HPLC
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MS)，气相色谱与质谱联用法(GC
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MS)和电化学分析检测方法等，仪器昂贵，操作复杂且耗时。荧光定量免疫层析技术，是结合免疫荧光技术和传统免疫层析技术相优点的新型定量检测技术。该技术操作灵活简便、成本较低、反应时间短，能做到及时定量检测。能及时为医师对病人调整用药提高数据支撑，达到个体化给药的目的，确保疗效的同时保证了用药安全性。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一技术目的是提供一种能解决上述技术问题的氯氮平完全抗原。
[0006]本专利技术的第二技术目的是提供一种能解决上述技术问题的氯氮平完全抗原的制备方法。
[0007]本专利技术的第三技术目的是提供一种能解决上述技术问题的利用该完全抗原获得的氯氮平单克隆抗体。
[0008]本专利技术的第四技术目的是提供一种能解决上述技术问题的利用该完全抗原获得的氯氮平单克隆抗体在荧光免疫层析法检测氯氮平类似物中的应用。
[0009]本专利技术的上述第一技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
[0010]一种完全抗原，所述完全抗原具有式1所示的结构：
[0011][0012]其中，Protein为蛋白质载体；
[0013]在一优选例中，所述蛋白质载体为选自下组中的任何一种蛋白质：牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。
[0014]在一优选例中，所述蛋白质载体是牛血清白蛋白(BSA)、或钥孔血蓝蛋白(KLH)。
[0015]本专利技术的上述第二技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
[0016]一种制备所述完全抗原的方法，所述方法包括步骤：
[0017](1)将氯氮平半抗原与牛血清白蛋白(BSA)或钥孔血蓝蛋白(KLH))连接，以制得权利要求1所述的完全抗原；
[0018](a)使氯氮平衍生物与N
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)
‑
N'
‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N
‑
Hydroxysuccinimide(NHS)活化反应，得反应物A液，活化反应温度为室温，反应时间为6h；
[0019](b)将步骤(a)得到的A液加入至BSA/KLH溶液中，室温反应过夜，制得氯氮平
‑
BSA/KLH偶联物，即氯氮平完全抗原。
[0020]一种所述完全抗原的用途，其用于制备氯氮平的特异性单克隆抗体。
[0021]本专利技术的上述第三技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
[0022]一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合氯氮平。
[0023]作为优选，所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生；所述杂交瘤细胞系由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏编号为CCTCC NO:C2020225。
[0024]在另一优选例中，所述的单克隆抗体检测氯氮平类似物的灵敏度为3.70ng/mL。
[0025]在另一优选例中，所述的单克隆抗体不结合其它精神类治疗药物。
[0026]在另一优选例中，所述的其它精神类治疗药物是氯硝西泮、利培酮、喹硫平、阿立哌唑、奥氮平、丙戊酸钠、帕罗西汀。
[0027]作为优选，单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述杂交瘤细胞系是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO:C2020225的小鼠杂交瘤细胞系。
[0028]本专利技术的上述第四技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
[0029]一种单克隆抗体的用途，其用于制备检测样品中氯氮平的试剂、检测卡或试剂盒。
[0030]在一优选例中，所述样品是生物样品，优选血浆样品。
[0031]一种检测生物样品中是否存在氯氮平的方法，所述方法包括步骤：
[0032](a)将所述生物样品与权利要求4或5所述的单克隆抗体接触；
[0033](b)检测是否形成抗原
‑
抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在氯氮平。
[0034]在一优选例中，所述单克隆抗体带有可检测标记物；优选地，所述的标记物选自下组：胶体金标记物、有色标记物或荧光标记物。
[0035]在本专利技术的一个优选例中，所述检测方法为荧光检测法。
[0036]一种检测氯氮平类似物的荧光免疫层析检测卡，所述检测卡包括基片；吸液部件；检测部件；加样部件，其特征在于，检测部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定吸液部件和加样部件，其中，检测带上包被有权利要求1所述的完全抗原，质控带上包被有兔抗原IgG。
[0037]在一优选例中，所述氯氮平荧光免疫层析检测卡还包括卡盒，所述卡盒由下盖和上盖组成，上盖设有加样窗口和检测窗口，所述氯氮平荧光免疫层析检测卡完全设置于下盖中，所述检测窗口和加样窗口分别对应与所述氯氮平荧光免疫层析检测卡上的加样部件和质控带及检测带。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种完全抗原，其特征在于：所述完全抗原具有式1所示的结构：其中，Protein为蛋白质载体；所述蛋白质载体为选自下组中的任何一种蛋白质：牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。2.一种制备权利要求1所述完全抗原的方法，所述方法包括步骤：(1)将氯氮平半抗原与牛血清白蛋白(BSA)或钥孔血蓝蛋白(KLH))连接，以制得权利要求1所述的完全抗原；(a)使氯氮平衍生物与N
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)
‑
N'
‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N
‑
Hydroxysuccinimide(NHS)活化反应，得反应物A液，活化反应温度为室温，反应时间为6h；(b)将步骤(a)得到的A液加入至BSA/KLH溶液中，室温反应过夜，制得氯氮平
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BSA/KLH偶联物，即氯氮平完全抗原。3.一种权利要求1所述完全抗原的用途，其用于制备氯氮平的特异性单克隆抗体。4.一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合氯氮平。5.如权利要求4所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生；所述杂交瘤细胞系由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO:C2020225。6.一种产生权利要求4或5所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述杂交瘤细胞系是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO:C2020225的小鼠杂交瘤细胞系。7.权利要求4或5所述的单克隆抗体的用途，其用于制备检测样品中氯氮平的试剂、检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：李忠鹏，何扬锦，陈颖，费晓旭，
申请(专利权)人：浙江准策生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：