本发明专利技术公开了奥氮平完全抗原及其在奥氮平抗体制备和免疫法检测中的应用。所述奥氮平完全抗原的结构如式1所示：式1；本发明专利技术还公开了用该完全抗原制备的抗奥氮平单克隆抗体，产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞以及用于检测奥氮平类似物的检测卡和检测试剂盒。本发明专利技术公开了检测奥氮平类似物的ELISA法和荧光免疫层析法，其中荧光免疫层析法操作简单、检测时间短、成本低、特异性高、重复性好。复性好。复性好。
【技术实现步骤摘要】
奥氮平完全抗原和抗体及其制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及精神类药物的检测。具体地说，本专利技术涉及奥氮平完全抗原、利用该完全抗原获得奥氮平单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测奥氮平类似物中的应用。
技术介绍
[0002]非典型抗精神病药奥氮平( Olanzapine，奥兰扎平，商品名再普乐)化学结构属噻吩苯二氮类，其药理作用与氯氮平类似，1996年10月由美国礼来公司投放市场以来，因其能有效改善精神分裂症的阳性和阴性症状，没有氯氮平所致的粒细胞减少症的严重副反应，锥外系副反应不明显，受到关注。奥氮平口服吸收快而完全，食物对其吸收速率和程度无影响，吸收后迅速广泛分布到各组织，生物利用度个体差异较大，在同等剂量与体重一定的情况下，女性病人的血清药物浓度明显高于男性病人，吸烟可加速本品的代谢，肾清除率及代谢在老年人中明显减低。患者服用相同剂量的奥氮平后个体间差异较大，不同个体对药物的清除速度达4
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10倍的变异。根据文献资料报道，奥氮平的最佳治疗的范围是12小时内血药浓度在20
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40ng/mL，超过80ng/mL时不良反应明显上升。过量的重要表现包括谵亡、痉挛、昏迷、可疑的MMS，呼吸抑制、呼吸忽促、高血压或低血压，心律不齐（过量时发生率小于2%）和心肺功能抑制等。临床医师可根据患者性别及其年龄段综合考虑给药剂量，实现个体化用药。
[0003]目前奥氮平的检测主要为液相色谱与质谱联用法(HPLC
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MS)，仪器昂贵，操作复杂且耗时。荧光定量免疫层析技术，是结合免疫荧光技术和传统免疫层析技术相优点的新型定量检测技术。该技术操作灵活简便、成本较低、反应时间短，能做到及时定量检测。能及时为医师对病人调整用药提高数据支撑，达到个体化给药的目的，确保疗效的同时保证了用药安全性。
技术实现思路
[0004]一种奥氮平完全抗原，所述完全抗原具有式1所示的结构：；式1；
[0005]其中，Protein为蛋白质载体；
[0006]所述蛋白质载体为选自下组中的任何一种蛋白质：牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)。
[0007]在一优选例中，所述蛋白质载体是牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)。
[0008]一种制备权利要求1所述奥氮平完全抗原的方法，所述方法包括步骤：
[0009](1)将奥氮平半抗原与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白（OVA）连接，以制得权利要求1所述的完全抗原；
[0010](a)使奥氮平衍生物与N
‑
（3
‑
二甲基氨基丙基）
‑
N'
‑
乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）、N
‑
Hydroxysuccinimide（NHS)活化反应，得反应物A液，活化反应温度为室温，反应时间为2h；
[0011](b)将步骤(a)得到的A液加入至BSA/OVA溶液中，室温反应过夜，制得奥氮平
‑
BSA/OVA偶联物，即奥氮平完全抗原。
[0012]一种所述奥氮平完全抗原的用途，其用于制备奥氮平的特异性单克隆抗体。
[0013]一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合奥氮平。
[0014]优选地，所述的单克隆抗体，由小鼠杂交瘤细胞系产生；所述杂交瘤细胞系由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCCNO:C2022383。分类命名为：Hybridoma cell line ZCSW02。
[0015]在另一优选例中，所述的单克隆抗体检测奥氮平类似物的灵敏度为5.17ng/mL。
[0016]在另一优选例中，所述的单克隆抗体不结合其它精神类治疗药物。
[0017]在另一优选例中，所述的其它精神类治疗药物是碳酸锂、卡马西平、丙戊酸钠、氯氮平。
[0018]一种产生权利要求4或5所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述杂交瘤细胞系是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO: C2022383的小鼠杂交瘤细胞系。
[0019]一种所述的单克隆抗体的用途，其用于制备检测样品中奥氮平的试剂、检测卡或试剂盒。
[0020]在一优选例中，所述样品是生物样品，优选血浆样品。
[0021]一种检测生物样品中是否存在奥氮平的方法，所述方法包括步骤：
[0022](a) 将所述生物样品与权利要求4或5所述的单克隆抗体接触；
[0023](b) 检测是否形成抗原
‑
抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在奥氮平。
[0024]在一优选例中，所述单克隆抗体带有可检测标记物；优选地，所述的标记物选自下组：胶体金标记物、有色标记物或荧光标记物。
[0025]在本专利技术的一个优选例中，所述检测方法为荧光检测法。
[0026]一种检测奥氮平类似物的荧光免疫层析检测卡，所述检测卡包括基片；吸液部件；检测部件；加样部件，其特征在于，检测部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定吸液部件和加样部件，其中，检测带上包被有权利要求1所述的完全抗原，质控带上包被有兔抗原IgG。
[0027]在一优选例中，所述奥氮平荧光免疫层析检测卡还包括卡盒，所述卡盒由下盖和上盖组成，上盖设有加样窗口和检测窗口，所述奥氮平荧光免疫层析检测卡完全设置于下盖中，所述检测窗口和加样窗口分别对应与所述奥氮平荧光免疫层析检测卡上的加样部件和质控带及检测带。
[0028]在一优选例中，所述上盖上还设有产品编号区；条形码识别区。
[0029]在一优选例中，所述基片是深色硬质基片；优选黑色PVC基片。
[0030]在一优选例中，所述检测部件是硝酸纤维素膜。
[0031]在一优选例中，所述加样部件是玻璃纤维。
[0032]在一优选例中，所述吸液部件是吸水纸。
[0033]一种检测奥氮平类似物的检测试剂盒，所述试剂盒装有：
[0034](a) 权利要求9所述的奥氮平荧光免疫层析检测卡；
[0035](b) 与权利要求9所述的奥氮平荧光免疫层析检测卡配套的奥氮平检测分析液；
[0036](c) 所述奥氮平检测试剂盒检测奥氮平类似物的使用说明书；
[0037]其中，所述检测分析液为包含有荧光标记的权利要求4或5所述的单克隆抗体和抗兔IgG抗体的检测分析液。
[0038]在另一优选例中，所述检测分析液中的标记用荧光染料包括但不限于，FITC (Fluorescein)、Alexa Fluor 647、CF
TM
647、TRITC (Rhodamine)等。
[0039]在一优选例中，所述检测分析液的溶剂部分是含有BSA的磷酸缓冲液。
[0040本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种奥氮平完全抗原，其特征在于：所述完全抗原具有式1所示的结构：；其中，Protein为蛋白质载体；在所述蛋白质载体为选自下组中的任何一种蛋白质：牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)。2.一种制备权利要求1所述奥氮平完全抗原的方法，其特征在于：所述方法包括步骤：(1)将奥氮平半抗原与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白（OVA）连接，以制得权利要求1所述的完全抗原；使奥氮平衍生物与N
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（3
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二甲基氨基丙基）
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N'
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乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）、N
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Hydroxysuccinimide（NHS)活化反应，得反应物A液，活化反应温度为室温，反应时间为2h；将步骤(a)得到的A液加入至BSA/OVA溶液中，室温反应过夜，制得奥氮平
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BSA/OVA偶联物，即奥氮平完全抗原。3.一种如权利要求1所述奥氮平完全抗原的用途，其特征在于：其用于制备奥氮平的特异性单克隆抗体。4.一种单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体特异性结合奥氮平。5.如权利要求4所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生；所述杂交瘤细胞系由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO: C2022383。6.一种产生权利要求4或5所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其特征在于：所述杂交瘤细胞系是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO: C2022383的小鼠杂交瘤细胞系。7.一种根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：李忠鹏，何扬锦，陈颖，费晓旭，
申请(专利权)人：浙江准策生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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