本发明专利技术公开了替考拉宁完全抗原及其在替考拉宁抗体制备和免疫法检测中的应用。所述替考拉宁完全抗原的结构如式1所示本发明专利技术还公开了用该完全抗原制备的抗替考拉宁单克隆抗体，产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞以及用于检测替考拉宁类似物的检测卡和检测试剂盒。本发明专利技术公开了检测替考拉宁类似物的ELISA法和荧光免疫层析法，其中荧光免疫层析法操作简单、检测时间短、成本低、特异性高、重复性好。重复性好。重复性好。
【技术实现步骤摘要】
替考拉宁完全抗原和抗体及其制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及抗生素类药物的检测。具体地说，本专利技术涉及替考拉宁完全抗原、利用该完全抗原获得替考拉宁单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测替考拉宁类似物中的应用。
技术介绍
[0002]替考拉宁(teicoplanin)是一种新型的糖肽类抗菌药物，由游动放线菌产生，是由5个具有类似结构的糖肽组成的复合物，其结构与万古霉素相似，由于特有的乙酰取代基，使其亲脂性为万古霉素的30
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100倍，更易渗入组织和细胞，半衰期长，且可静脉或肌肉注射。替考拉宁的作用机制与其他糖肽类抗菌药物相似，其与N
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乙酰胞壁酸所接的五肽的最后两个氨基酸
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D丙氨酰
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D丙氨酸的尾部结合，形成一个复合物，使胞壁黏肽所必需的基本结构双糖十肽不能按要求运至合成部位，阻断新单位的添加，使细菌细胞壁和膜的完整性遭到破坏，导致细菌死亡。用药过量可能出现注射部位疼痛、血栓性静脉炎，皮疹、瘙痒、支气管痉挛、药物热、过敏反应，恶心、呕吐、腹泻，嗜睡、头痛，嗜酸粒细胞增多、白细胞减少、中性粒细胞减少、血小板减少、血小板增多等反应。《替考拉宁临床应用剂量专家共识》中指出血药谷浓度是调整替考拉宁起始负荷剂量的重要指标：糖肽类抗菌药物属于水溶性药物，主要分布于细胞外液，替考拉宁抗菌作用的强弱与细胞外液中药物浓度呈正比，而细胞外液中药物浓度又与血药浓度呈平行关系，因此血药浓度可间接反映感染部位的药物浓度。替考拉宁具有血浆蛋白结合率较高、游离浓度低的特点，能够确保治疗MRSA感染早期疗效的替考拉宁最佳剂量为谷浓度>10ng/ml，但不应高于60ng/ml。医师需根据患者肾功能调整给药间隔，根据谷浓度调整给药剂量。
[0003]目前替考拉宁的检测主要包括液相色谱与质谱联用法(HPLC
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MS)，高效液相色谱、化学发光法等，仪器昂贵，操作复杂且耗时。荧光定量免疫层析技术，是结合免疫荧光技术和传统免疫层析技术相优点的新型定量检测技术。该技术操作灵活简便、成本较低、反应时间短，能做到及时定量检测。能及时为医师对病人调整用药提高数据支撑，达到个体化给药的目的，确保疗效的同时保证了用药安全性。
技术实现思路
[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种替考拉宁完全抗原、利用该完全抗原获得替考拉宁单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测替考拉宁类似物中的应用。
[0005]替考拉宁完全抗原，所述完全抗原具有式1所示的结构：
[0006][0007]其中，Protein为蛋白质载体。
[0008]在一优选例中，所述蛋白质载体为选自下组中的任何一种蛋白质：牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。
[0009]在一优选例中，所述蛋白质载体是牛血清白蛋白(BSA)、或卵清蛋白(OVA)。
[0010]替考拉宁完全抗原的方法，所述方法包括步骤：
[0011](1)将替考拉宁半抗原与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)连接，以制得所述的完全抗原；
[0012](a)使替考拉宁半抗原、BSA/OVA用0.01M PBS溶解为A液；
[0013](b)将步骤(a)得到的A液逐滴加入20
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30％戊二醛溶液中，室温反应2.5
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3.5h，制得替考拉宁
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BSA/OVA偶联物，即替考拉宁完全抗原。
[0014]一种所述替考拉宁完全抗原的用途，其用于制备替考拉宁的特异性单克隆抗体。
[0015]一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合替考拉宁完全抗原。
[0016]作为优选，所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生；所述杂交瘤细胞系由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO:C2020226。
[0017]一种产生所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述的单克隆抗体检测替考拉宁类似物的灵敏度为7
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8ng/mL；
[0018]所述的单克隆抗体不结合其它抗生素类治疗药物；
[0019]所述的其它抗生素类治疗药物是左氧氟沙星、利福平、万古霉素、利奈唑胺、磷霉素。
[0020]一种所述的单克隆抗体的用途，其用于制备检测样品中替考拉宁的试剂、检测卡或试剂盒。
[0021]一种检测生物样品中是否存在替考拉宁的方法，所述方法包括步骤：
[0022](a)将所述生物样品与所述的单克隆抗体接触；
[0023](b)检测是否形成抗原
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抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在替考拉宁；
[0024]其中，所述单克隆抗体带有可检测标记物；所述检测方法为荧光检测法。
[0025]优选地，所述的标记物选自下组：胶体金标记物、有色标记物或荧光标记物。
[0026]一种检测替考拉宁类似物的荧光免疫层析检测卡，所述检测卡包括基片；吸液部件；检测部件；加样部件，其特征在于，检测部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定吸液部件和加样部件，其中，检测带上包被有所述的替考拉宁完全抗原，质控带上包被有兔抗原IgG。
[0027]在一优选例中，所述替考拉宁荧光免疫层析检测卡还包括卡盒，所述卡盒由下盖和上盖组成，上盖设有加样窗口和检测窗口，所述替考拉宁荧光免疫层析检测卡完全设置于下盖中，所述检测窗口和加样窗口分别对应与所述替考拉宁荧光免疫层析检测卡上的加样部件和质控带及检测带。
[0028]在一优选例中，所述上盖上还设有产品编号区；条形码识别区。
[0029]在一优选例中，所述基片是深色硬质基片；优选黑色PVC基片。
[0030]在一优选例中，所述检测部件是硝酸纤维素膜。
[0031]在一优选例中，所述加样部件是玻璃纤维。
[0032]在一优选例中，所述吸液部件是吸水纸。
[0033]一种检测替考拉宁类似物的检测试剂盒，所述试剂盒装有：
[0034](a)所述的替考拉宁荧光免疫层析检测卡；
[0035](b)与所述的替考拉宁荧光免疫层析检测卡配套的替考拉宁检测分析液；
[0036](c)所述替考拉宁检测试剂盒检测替考拉宁类似物的使用说明书；
[0037]其中，所述检测分析液为包含有荧光标记的所述的单克隆抗体和抗兔IgG抗体的检测分析液；
[0038]所述检测分析液中的标记用荧光染料包括但不限于，FITC(Fluorescein)、Alexa Fluor 647、CF
TM
647、TRITC(Rhodamine)。
[0039]应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.替考拉宁完全抗原，所述完全抗原具有式1所示的结构：其中，Protein为蛋白质载体。2.一种制备权利要求1所述替考拉宁完全抗原的方法，所述方法包括步骤：(1)将替考拉宁半抗原与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)连接，以制得权利要求1所述的完全抗原；(a)使替考拉宁半抗原、BSA/OVA用0.01M PBS溶解为A液；(b)将步骤(a)得到的A液逐滴加入20
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30％戊二醛溶液中，室温反应2.5
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3.5h，制得替考拉宁
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BSA/OVA偶联物，即替考拉宁完全抗原。3.一种权利要求1所述替考拉宁完全抗原的用途，其用于制备替考拉宁的特异性单克隆抗体。4.一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合替考拉宁完全抗原。5.如权利要求4所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生；所述杂交瘤细胞系由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO:C2020226。6.一种产生权利要求4或5所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其特征在于，所述的单克隆抗体检测替考拉宁类似物的灵敏度为7
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8ng/mL；所述的单克隆抗体不结合其它抗生素类治疗药物；所述的其它抗生素类治疗药物是左氧氟沙星、利福平、万古霉素、利奈唑胺、磷霉素。7.一种根据权利要求4或5所述的单克隆抗体的用...
【专利技术属性】
技术研发人员：李忠鹏，何扬锦，陈颖，费晓旭，
申请(专利权)人：浙江准策生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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