【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酒精代谢物检测，具体涉及一种乙基葡萄糖醛酸苷半抗原、抗原制备方法及其应用。
技术介绍
1、酒后驾车是一个世界性的交通安全问题。我国每年因交通事故死亡中约25％-30％与酒后驾车有关。
2、由于乙醇在体内代谢较快，一般饮酒后6-8h体内已检测不到乙醇。乙醇进入人体后，有一部分乙醇与尿嘧啶核苷-5‵-二磷-葡萄糖醛酸结合成乙基葡萄糖醛酸苷(ethylglucuronide，etg)。由于其比原体乙醇的半衰期长，当血液中乙醇浓度低于检测限时，体内仍可在一定时间内检出etg。因此血液中etg的检测及评价越来越为人们所重视。
3、国内外现已开发出检测乙基葡萄糖醛酸苷的酶联免疫试剂盒，但是现在国内生产的试剂盒在准确性、灵敏度、特异性等方面还不能完全达到检测的要求。本专利技术公开的乙基葡萄糖醛酸苷半抗原、完全抗原为进一步研制乙基葡萄糖醛酸苷抗体及乙基葡萄糖醛酸苷酶联免疫试剂盒提供了原料。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种乙基葡萄糖醛酸苷半抗原、完全抗原制备方法及其应用。
2、本专利技术提供的乙基葡萄糖醛酸苷半抗原，是式i所示化合物：
3、本专利技术还公开了式i所示产物的制备方法，包括如下步骤：
4、
5、称取化合物1和甲醇钠，用甲醇溶解，室温搅拌反应16h；反应完成后旋干溶剂，用阳离子交换树脂纯化得白色固体化合物2。
6、
7、称取化合物2，edci和hobt和化合物3，用d
8、
9、称取化合物4，用甲醇和去离子水溶解，冰水浴下相反应液中滴入氢氧化锂，滴加完成后常温反应两小时。反应完成后蒸干溶剂，碱性制备后冻干后得类白色固体即i。
10、反应路线如下：
11、
12、本专利技术提供的乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原，如式ⅱ所示产物，是将式i所示产物和载体蛋白偶联得到的偶联物。
13、
14、本专利技术还保护所述乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原的制备方法，包括如下步骤：
15、1、将乙基葡萄糖醛酸苷半抗原用dmf溶解，加入edc溶解后再加入nhs，室温搅拌(600rpm)活化2-5h。
16、2、称取载体蛋白溶于0.1m碳酸氢钠溶液中，使其充分溶解，将步骤1反应液在2-8℃冰浴搅拌条件下，逐滴加入载体蛋白溶液，室温搅拌反应24h。
17、3、将反应产物装入蒸馏水冲洗干净透析袋(10cm)，0.01mpbs(ph＝7.4)，2-8℃搅拌透析3d，每天换液3次，将透析产物5000rpm离心5min，1.5ml/管分装，将完全抗原编号，-20℃保存备用。
18、作为优选，常用载体蛋白均可采用，如牛血清白蛋白(bsa)、卵清白蛋白(ova)、人血清白蛋白(hsa)、血蓝蛋白(klh)或多聚赖氨酸(pdl)。
19、作为优选，所述乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原可以作为免疫原免疫动物制备乙基葡萄糖醛酸苷特异性抗体，也可以作为包被原制备酶标板。
20、作为优选，所述抗体具体可为单克隆抗体。
21、作为优选，式i所示产物、所述乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原、所述抗体均可应用于检测乙基葡萄糖醛酸苷。
22、本专利技术还公布了应用乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原和乙基葡萄糖醛酸苷单克隆抗体制备得到的酶联免疫试剂盒。
23、作为优选，所述酶联免疫检测试剂盒，是由包被有乙基葡萄糖醛酸苷抗原的酶标板、酶标抗体工作液、乙基葡萄糖醛酸苷系列标准品、底物显色液、终止液、复溶液、洗涤液。
24、本专利技术依靠免疫学、免疫化学基本原理和残留分析技术手段，设计、合成小分子目标分析物半抗原，并与载体蛋白偶联，制备有效完全抗原。本专利技术制备方法简便可行、绿色环保。本专利技术的乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原，通过免疫动物可产生了针对乙基葡萄糖醛酸苷的特异性抗体，用于快速检测人体尿液中的乙基葡萄糖醛酸苷残留。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种乙基葡萄糖醛酸苷半抗原，其特征在于，其结构如式I所示：
2.一种乙基葡萄糖醛酸苷半抗原，其特征在于，包括如下步骤：
3.一种乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原，是将式I所示产物和载体蛋白偶联得到的偶联物。
4.根据权利要求3所述的乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原，其特征在于，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、人血清白蛋白(HSA)、血蓝蛋白(KLH)或多聚赖氨酸(PDL)。
5.权利要求3所述乙基葡萄糖醛酸苷抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.权利要求3所述乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原在制备乙基葡萄糖醛酸苷特异性单克隆抗体中的应用。
7.应用权利要求3所述乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原制备得到的特异性单克隆抗体。
8.权利要求1所述产物、权利要求3所述乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原、权利要求7所述特异性单克隆抗体在检测乙基葡萄糖醛酸苷中的应用。
9.应用权利要求1所述产物、权利要求3所述乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原、权利要求7所述特异性抗体制备得到的酶联免疫检测试剂盒。>
10.权利要求9所述酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，它包括：包被有乙基葡萄糖醛酸苷抗原的酶标板、酶标抗体工作液、乙基葡萄糖醛酸苷系列标准品、底物显色液、终止液、复溶液、洗涤液。
...【技术特征摘要】
1.一种乙基葡萄糖醛酸苷半抗原，其特征在于，其结构如式i所示：
2.一种乙基葡萄糖醛酸苷半抗原，其特征在于，包括如下步骤：
3.一种乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原，是将式i所示产物和载体蛋白偶联得到的偶联物。
4.根据权利要求3所述的乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原，其特征在于，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白(bsa)、卵清白蛋白(ova)、人血清白蛋白(hsa)、血蓝蛋白(klh)或多聚赖氨酸(pdl)。
5.权利要求3所述乙基葡萄糖醛酸苷抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.权利要求3所述乙基葡萄糖醛酸苷完全抗原在制备乙基葡萄...
【专利技术属性】
技术研发人员：李忠鹏，何扬锦，黄义凯，俞锦航，施倩，
申请(专利权)人：浙江准策生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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