一种人血白蛋白制备工艺制造技术

本发明专利技术提供一种人血白蛋白制备工艺，属于生物技术领域，所述的制备工艺包括去除人免疫球蛋白的步骤，该步骤中包括向压滤用硅藻土中加入大豆异黄酮使硅藻土与大豆异黄酮的用量比为10

【技术实现步骤摘要】
一种人血白蛋白制备工艺


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种人血白蛋白制备工艺。

技术介绍

[0002]人白蛋白临床上可以用于多种疾病的治疗，如：失血创伤、烧伤引起的休克；脑水肿及损伤引起的颅压升高；肝硬化及肾病引起的水肿或腹水；低蛋白血症的防治；新生儿高胆红素血症；用于心肺分流术、烧伤的辅助治疗、血液透析的辅助治疗和成人呼吸窘迫综合征，等等。人白蛋白主要来源于人血，从健康人身上提取血浆，去除和灭活血浆中病毒的成分。由于人血白蛋白制备方法的限制，导致产能不足，临床应用需要严格控制适应症，避免浪费血液资源。对人血白蛋白的制备工艺进行改进对其应用于临床能够提供巨大的支持。
[0003]中国专利201310355272.9中公开了一种人血白蛋白的制备工艺，采用低温乙醇分离法，以人血浆为原料，分别进行血浆溶解；组分I制作；组分II+III制作；组分IV制作；组分V制作；组分V精制；超滤；稀配；巴氏灭活；蛋白除菌分装；制品孵育；成品包装；该专利技术采用压滤技术进行固液分离，显著提高白蛋白收率>29g/L血浆，纯度>98％和制品的稳定性。通过采用Zetaplus深层滤芯过滤结合延长巴氏灭活时间，有效地控制了制品的PKA水平至<20IU/ml，降低了制品中热源超标和病毒感染的风险。工艺过程中使用2种梯度浓度的氯化钠溶液超滤，不仅可以控制制品中的乙醇残留量至<0.025％，而且能够有效将铝残留量降到最低至<50μg/L。但其制备过程中条件限制较多，特别是在温度控制上，很多条件都在零度以下，不利于生产，此外，考虑到原料血浆中的白蛋白含量不同，其所体现的收率并不稳定。
[0004]中国专利申请201711400110.7中公开了了一种人血白蛋白的制备工艺，采用低温乙醇法结合离子交换层析法分离纯化人血白蛋白，以人血浆为原料，分别进行血浆溶解；吸附；组分I制作；组分II+III制作；超滤；层析；超滤；稀配；巴氏灭活病毒；蛋白除菌分装；制品孵育；成品包装，其特征在于，从白蛋白收率、纯度和制品的稳定性入手采用采用A50凝胶吸附和Fractogel EMD DEAE作层析填料，在常温下进行层析过程。本专利技术分离纯化人血白蛋白，白蛋白收率>30g/L血浆、纯度>98％，制品的收率、纯度和稳定性得到显著提高，临床使用安全性更好，也缩短了制备周期，该工艺不需要全过程低温环境，方便了制作，将有效地节约能源，降低成本。但实际操作时，仍然存在收率低的情况。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种人血白蛋白制备工艺，通过优化各步骤条件，提高人血白蛋白终产品质量和收率。
[0006]一方面，本专利技术提供了一种人血白蛋白制备工艺，包括去除免疫球蛋白的步骤。
[0007]具体地，所述的制备工艺中去除免疫球蛋白的步骤包括：
[0008]向压滤用硅藻土中加入大豆异黄酮使硅藻土与大豆异黄酮的用量比为10
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20：1w/w，可以是10
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15：1w/w。
[0009]优选地，硅藻土与大豆异黄酮的用量比为15：1w/w。
[0010]具体地，用于所述的压滤处理的反应液为人血浆依次去除人凝血因子VIII、人凝血酶原复合物、人纤维蛋白原的反应液，pH为5.50
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6.50。
[0011]具体地，所述的反应液与硅藻土的用量比为1000：15
‑
25w/V。
[0012]优选地，所述的反应液与硅藻土的用量比为1000：20w/V。
[0013]具体地，所述的人凝血酶原复合物通过A50凝胶吸附去除，所述的A50凝胶的平衡液为平衡液A，平衡液A的组分为10
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20mmol/L枸橼酸钠、10
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30mmol/L磷酸氢二钠、30
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80mmol/L氯化钠、pH为5.0
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6.0。
[0014]所述的平衡液A的加入量为血浆重量的2％
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4％。
[0015]具体地，所述的人纤维蛋白原的去除方法为：
[0016]去除人凝血酶原复合物的过滤液pH值调节为6.80
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7.20，添加0℃预冷的92％乙醇至过滤液原体积的2％，充分混合后进行离心，离心去除沉淀后再次加入预冷的92％乙醇至乙醇终浓度为过滤液原体积的5％，充分混合后离心，去除沉淀。
[0017]优选地，所述的制备工艺中去除免疫球蛋白后依次还包括超滤和Fractogel EMD DEAE层析。
[0018]优选地，所述的Fractogel EMD DEAE层析中的平衡液为平衡液B，平衡液B的组分为：40
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50mmol/L磷酸氢二钠，140
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150mmol/L枸橼酸钠，pH值5.0
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6.0。
[0019]优选地，所述的所述的Fractogel EMD DEAE层析中的洗脱液为洗脱液C，洗脱液C的组分为：50
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70mmol/L磷酸氢二钠，100
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120mmol/L枸橼酸钠，pH值5.0
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6.0。
[0020]具体地，所述的制备工艺包括以下步骤：
[0021](1)原料血浆融浆并去除人凝血因子VIII；(2)A50凝胶吸附去除人凝血酶原复合物；(3)去除人纤维蛋白原；(4)去除免疫球蛋白；(5)超滤；(6)Fractogel EMD DEAE层析(7)透析；(8)稀配；(9)巴氏灭活病毒；(10)蛋白除菌分装；(11)制品孵育。
[0022]所述的步骤(11)制品孵育的条件为30
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32℃孵放间孵育14天。
[0023]所述的步骤(7)透析为2
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8℃的0.5％氯化钠溶液进行等体积透析。
[0024]优选地，透析后使用1mol/L NaHCO3调节蛋白液的pH值至6.60
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7.00。
[0025]所述的步骤(8)中稀配后加入保护剂辛酸钠和氯化钠。
[0026]本专利技术的有益效果：
[0027]本专利技术通过对人血白蛋白制备流程中的步骤进行优化，调整了各步骤中去除杂质的条件，使得最终的人血白蛋白成品纯度高、残留少，且制备方法简便，收率高，有利于进一步实现高效生产。
具体实施方式
[0028]下面结合具体实施例，对本专利技术作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本专利技术，仅用于说明本专利技术。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0029]实施例1人血白蛋白的制备工艺：
[0030]一、血浆的采集和质量参照2020版《中国药典》三部
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人血白蛋白制备工艺，包括去除人免疫球蛋白的步骤，其特征在于，向压滤用硅藻土中加入大豆异黄酮使硅藻土与大豆异黄酮的用量比为10
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20：1w/w。2.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，硅藻土与大豆异黄酮的用量比为15：1w/w。3.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，用于所述的压滤处理的反应液为人血浆依次去除人凝血因子VIII、人凝血酶原复合物、人纤维蛋白原的反应液。4.根据权利要求3所述的制备工艺，其特征在于，所述的反应液与硅藻土的用量比为1000：15
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25V/w。5.根据权利要求4所述的制备工艺，其特征在于，所述的反应液与硅藻土的用量比为1000：20V/w。6.根据权利要求3所述的制备工艺，其特征在于，所述的人凝血酶原复合物通过A50凝胶吸附去除，所述的A50凝胶的平衡液为平衡液A，平衡液A的组分为10
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20mmol/L枸橼酸钠、10
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30mmol/L磷酸氢二钠、30
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80mmol/L氯化钠、pH为5.0
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6.0。7.根据权利要求3所述的制备工艺，其特征在于，所述的人纤维蛋白原的去除方法为：去除人凝血酶原复合物的过滤液pH值调节为6.80
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7.20，添加0℃预冷的92％乙醇至过滤液原体积的2％，充分混合后进行离心，离心去除沉淀后再次加入预冷的92％乙醇至乙醇终浓度为过滤液原体积的5％，充分混合后离心，去除沉淀。8.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，还包括去除人免疫球蛋白后依次还包括超滤和Fractogel EMD DEAE层析。9.根据权利要求8所述的制备工艺，...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓志华，张丽铃，黄璠，黄燚，陆河其，钟世平，赵睿，刘宇良，谭珊珊，
申请(专利权)人：广东丹霞生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：