年轻且无损伤的人血清白蛋白延长人类寿命制造技术

本发明专利技术提供了一种延长受试者寿命和/或抗衰老的方法，包括向所述受试者施用有效量的年轻且无损伤的人血清白蛋白(HSA)的制剂的步骤，其中所述制剂表现出以下至少一种、优选全部性质：与从所述受试者获得的内源性HSA制剂相比，(1)Cys

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】年轻且无损伤的人血清白蛋白延长人类寿命


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，特别地涉及年轻且无损伤的人血清白蛋白(HSA)在延长人类寿命中的用途。

技术介绍

[0002]长寿是人类永恒的追求。狂热追求永生的故事贯穿整个人类历史。具有讽刺意味的是，长生不老药从未被发现，而衰老却在继续。了解衰老的机制对于实现长寿梦想至关重要，但衰老的复杂性和系统性使得人们这一过程知之甚少。

技术实现思路

[0003]本专利技术部分地基于如下令人惊讶的发现，即与盐水治疗组相比，在自然衰老小鼠模型中施用年轻且无损伤的重组小鼠血清白蛋白(rMSA)显著延长了寿命，增加了骨骼肌强度和认知能力。
[0004]本专利技术一方面提供了一种年轻且无损伤的人血清白蛋白(HSA)的制剂，其中它表现出以下至少一种、优选全部性质：与从年轻人类个体获得的内源性HSA制剂相比，(1)Cys
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34残基上的游离巯基比率更高，(2)晚期糖化终末产物(AGE)水平更低，(3)羰基化水平更低，和(4)同型半胱氨酸化水平更低。
[0005]本专利技术另一方面提供了一种延长受试者寿命和/或抗衰老的方法，包括向受试者施用有效量的年轻且无损伤的人血清白蛋白(HSA)的制剂的步骤，其中该制剂表现出以下至少一种、优选全部性质：与从所述受试者获得的内源性HSA制剂相比，(1)Cys
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34残基上的游离巯基比率更高，(2)晚期糖化终末产物(AGE)水平更低，(3)羰基化水平更低，和(4)同型半胱氨酸化水平更低。/>附图说明
[0006]图1.rMSA治疗延长小鼠寿命
[0007](A和B)用rMSA或盐水治疗的6M组中雌性(A)和雄性(B)小鼠的存活曲线。(C)用rMSA或盐水治疗的小鼠的代表性图像。
[0008](D和E)用rMSA或盐水治疗的3M组中雌性(D)和雄性(E)小鼠的存活曲线。(F和G)用rMSA或盐水治疗的18M组中雌性(F)和雄性(G)小鼠的存活曲线。6M、3M和18M组(A
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G)中的小鼠每3周用20mg/小鼠的rMSA或等容盐水治疗。(H和I)每3周用1.5mg的rMSA/g体重或等容盐水治疗的12M组中雌性(H)和雄性(I)小鼠的存活曲线。显示了中位生存期(以月计，M)和百分比增加。通过对数秩(Mantel
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Cox)检验计算p值。n是用于每次分析的小鼠数量。
[0009]图2.rMSA对小鼠骨骼肌功能的影响
[0010](A和B)12M组中用体重调整剂量的rMSA或盐水治疗的雌性(A)和雄性(B)小鼠的握力。(C)腓肠肌甲苯胺蓝染色。比例尺，50μm。(D
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G)(C)中数据的统计结果。盐水治疗的小鼠；rSMA治疗的小鼠，雌性，n＝4；雄性，n＝6。肌纤维的平均尺寸＝横截面积/纤维数量。(H)小
鼠MHC1(绿色)和4
′
,6
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二脒基
‑2‑
苯基吲哚(DAPI)(蓝色)的免疫荧光染色。比例尺，50μm。(I和J)通过使用Image J测定(H)中MHC1上的荧光强度。每3周用1.5mg rMSA/g体重或等容盐水治疗小鼠8个月。所有图表均表示平均值与SEM，p值通过双尾t检验计算。n是用于每次分析的小鼠数量。
[0011]图3.rMSA对小鼠认知能力的影响
[0012](A和C)12M组中雄性小鼠的主要逃逸率(A)和主要逃逸时间(C)的测量。(B)(A)的平均值。(D)(C)的平均值。(E)12M小鼠皮层中p
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tau的代表性图像。比例尺，50μm。(F
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H)基于(E)中数据的雄性和雌性小鼠皮层中p
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au水平的统计结果。每3周用1.5mg/g体重的rMSA或等容盐水治疗小鼠8个月。所有图表均表示平均值与SEM，p值通过双尾t检验计算。n是用于每次分析的小鼠数量。
[0013]图4.rMSA治疗改善了与衰老相关的四个参数
[0014](A
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D)1.5月龄、12月龄和28月龄小鼠血清样品中rMSA和内源性白蛋白的游离巯基(A)、羰基(B)、AGE(C)和Hcy(D)水平。(E
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H)12M组中用体重调整剂量的rMSA或等容盐水治疗的小鼠内源性白蛋白的游离巯基(E)、羰基(F)、AGE(G)和Hcy(H)水平。(I
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L)1.5月龄、12月龄和20月龄小鼠血清样品中rMSA和内源性白蛋白的游离巯基(I)、羰基(J)、AGE(K)和Hcy(L)水平。所有图表均表示平均值与SEM，p值通过双尾t检验计算。n是用于每次分析的小鼠数量。
[0015]图5.rMSA注射后21天，白蛋白的表达和蛋白水平可恢复正常。
[0016](A)每只小鼠(n＝3)注射20mg的rMSA后，通过qRT
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PCR测定肝脏中白蛋白基因的动态表达水平。(B)每只小鼠(n＝3)注射50mg的rMSA后，通过qRT
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PCR测定肝脏中白蛋白基因的动态表达水平。(C)每只小鼠(n＝3)注射20或50mg的rMSA后1天(左上)和2
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21天(右上)内血清白蛋白的动态蛋白水平。表(底部)显示了平均定量值。所有图表均表示平均值与SEM。
[0017]图6.rMSA注射对总蛋白水平和白蛋白/球蛋白比率的影响
[0018]每只小鼠(n＝3)注射20或50mg的rMSA后1天(左上)和2
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21天(右上)内的动态总蛋白水平(A)、总球蛋白水平(B)和白蛋白/球蛋白比率(C)。表(底部)显示了平均定量值。所有图表均表示平均值与SEM。
[0019]图7.rMSA注射对主要血液生化参数的影响
[0020]主要血液生化参数的动态变化(以折线图显示.GLU，谷氨酰胺；BUN，血尿素氮；CHO，胆固醇；TG，甘油三酯；LDH，乳酸脱氢酶；ALT，丙氨酸转氨酶；AST，天冬氨酸转氨酶；ALP，碱性磷酸酶；GGT，γ
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谷氨酰转肽酶)。表(底部)显示了平均定量值。所有图表均表示平均值与SEM。
[0021]图8.年轻且无损伤的rMSA治疗小鼠表现出更健康的外观
[0022]注射rMSA或盐水的老年雌性小鼠的代表性图像。后凸(kyphosis)如箭头所示。
[0023]图9.rMSA注射对体重的影响
[0024]每3周用20mg rMSA/小鼠或等容盐水治疗的(A)6M、(B)3M和(C)18M组中的雌性和雄性小鼠的体重。(D)每3周用1.5mg rMSA/g体重或等容盐水治疗的12M组中雌性和雄性小鼠的体重。所有图表均表示平均值与SEM。
[0025]图10.巴恩斯迷宫测试中的代表性运动轨迹
[0026](A)12M组中用盐水治疗的雄性小鼠的代表性运动轨迹。
[0027](B)12M组中用1.5mg rMSA/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种年轻且无损伤的人血清白蛋白(HSA)的制剂，其中它表现出以下至少一种、优选全部性质：与从年轻人类个体获得的内源性HSA制剂相比，(1)Cys
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34残基上的游离巯基比率更高，(2)晚期糖化终末产物(AGE)水平更低，(3)羰基化水平更低，和(4)同型半胱氨酸化水平更低。2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述年轻个体低于30岁，优选低于18岁。3.一种年轻且无损伤的人血清白蛋白(HSA)的制剂，其中它表现出以下至少一种、优选全部性质：(1)Cys
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34残基上游离巯基的比率大于50％，例如70％，特别是80％，优选90％，更优选大于95％，其通过Ellman方法测定；(2)晚期糖化终末产物(AGE)的水平低于60μg/g蛋白质，优选40μg/g蛋白质，更优选低于30μg/g蛋白质，其通过ELISA(CLOUD
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CLONE Co.,CEB353Ge)测定；(3)羰基的水平低于1.7nmol/mg蛋白质，优选低于1.5nmol/mg蛋白质，其通过Protein Carbonyl Content Assay Kit(Abcam)测定；和(4)同型半胱氨酸水平低于5nmol/g蛋白质，优选3.5nmol/g蛋白质，更优选低于2nmol/g蛋白质，其通过ELISA(Jianglai,JL10022)测定。4.根据前述权利要求中任一项所述的制剂，其中Cys
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34残基上所述游离巯基的比率大于80％。5.根据前述权利要求中任一项所述的制剂，其中所述AGE水平低于30μg/g蛋白质。6.根据前述权利要求中任一项所述的制剂，其中所述羰基的水平低于1.5nmol/mg蛋白质。7.根据前述权利要求中任一项所述的制剂，其中所述同型半胱氨酸水平低于2nmol/g蛋白质。8.根据前述权利要求中任一项所述的制剂，其中所述Cys
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34残基上游离巯基的比率大于80％，所述AGE水平低于30μg/g蛋白质，所述羰基水平低于1.5nmol/mg蛋白质，所述同型半胱氨酸水平低于2nmol/g蛋白质。9.根据前述权利要求中任一项所述的制剂，其中所述制剂是重组产生的或是从血浆中纯化的。10.年轻且无损伤的人血清白蛋白(HSA)的制剂在延长受试者的寿命和/或抗衰老中的用途，其中它表现出以下至少一种、优选全部性质：与从所述受试者获得的内源性HSA制剂相比，(1)Cys
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34残基上的游离巯基比率更高，(2)晚期糖化终末产物(AGE)水平更低，(3)羰基化水平更低，和(4)同型半胱氨酸化水平更低。11.根据权利要求10所述的用途，其中所述制剂表现出以下至少一种、优选全部性质：(1)Cys
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34残基上游离巯基的比率大于50％，例如70％，特别是80％，优选90％，更优选大于95％，其通过Ellman方法测定；(2)晚期糖化终末产物(AGE)的水平低于60μg/g蛋白质，优选40μg/g蛋白质，更优选低于30μg/g蛋白质，其通过ELISA(CLOUD
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CLONE Co.,CEB353Ge)测定；(3)羰基的水平低于1.7nmol/mg蛋白质，优选低于1.5nmol/mg蛋白质，其通过Protein Carbonyl Content Assay Kit(Abcam)测定；和(4)同型半胱氨酸水平低于5nmol/g蛋白质，优选3.5nmol/g蛋白质，更优选低于2nmol/g蛋白质，其通过ELISA(Jianglai,JL10022)测定。12.根据前述权利要求10
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11中任一项所述的用途，其中Cys
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34残基上所述游离巯基的比率大于80％。
13.根据前述权利要求10
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12中任一项所述的用途，其中所述AGE水平低于30μg/g蛋白质。14.根据前述权利要求10
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13中任一项所述的用途，其中所述羰基的水平低于1.5nmol/mg蛋白质。15.根据前述权利要求10

【专利技术属性】
技术研发人员：罗永章，付彦，唐嘉泽，巨安基，黎博雅，龚元超，张少森，常国栋，李辉，
申请(专利权)人：深圳普罗吉医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：