11-脱氢血栓烷B2-BSA偶联物、磁微粒复合物、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种11

【技术实现步骤摘要】
11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物、磁微粒复合物、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫学检测技术，尤其涉及一种11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物、磁微粒复合物、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]目前在我国中老年人群中心脑血管病负担日益加重，已成为重要公共卫生问题。阿司匹林作为循证医学证据充分、适应症广泛和最佳成本效益比的抗栓药物，已经得到了广泛的应用，是抗血栓治疗的基础用药，更是心脑血管疾病防治的基础用药。由于该药物的广泛使用和不规范使用，我国约有30％左右的患者存在耐药性。但由于对阿司匹林临床地位认识不足以及考虑到其可能存在不良反应等原因，仍有部分能从阿司匹林治疗中获益的心脑血管病患者未能服用或长期服用阿司匹林，这种现象在基层尤为普遍。针对小剂量阿司匹林的临床应用，应注重循证医学与个体化用药结合的原则，探讨阿司匹林针对中国患者的给药剂量，解决患者的用药剂量问题，使药物的治疗获益最大化。但由于患者对阿司匹林代谢存在差异，因此需要对患者体内的阿司匹林的代谢进行分析用以帮助临床确定是否需要改善给药措施。
[0003]血小板被激活后，其膜磷脂游离出花生四烯酸(AA)，在环氧化酶COX
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1的作用下生成前列腺素G2和H2，并进一步在血小板的血栓烷合成酶的作用下，催化生成血栓烷A2(TXA2)，TXA2是最强的血小板聚集与激活因子。TXA2高度不稳定，会迅速被水解为较为稳定的血栓烷B2(TXB2)，TXB2随后在肝中被转化为半衰期更长的11
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脱氢血栓烷B2(11
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DH
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TXB2)，并经尿液排出。因此，检测11
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脱氢血栓烷B2能够反映血栓烷A2的实时排泄速率，从而量化血小板活化程度。由于11
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脱氢血栓烷B2(11
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DH
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TXB2)是TXA2的稳定的最终代谢产物，可以作为体内血小板活化程度的量化指标。而阿司匹林是通过血小板环氧化酶
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1(COX
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1)上不可逆转的与乙酰基结合，这样可以抑制它的活性从而降低血小板的活性。通过对患者尿液样本中的11
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脱氢血栓烷B2浓度检测，可直接反应阿司匹林的治疗效果。因此，如何有效、准确的测量11
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脱氢血栓烷B2浓度成为了分析患者体内的阿司匹林的代谢程度分析的标准。所以，开发出一种便于市场推广且准确度、灵敏度高的11
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脱氢血栓烷B2检测试剂盒成为了亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术提供一种11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物、磁微粒复合物、试剂盒及其应用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案为：
[0006]一种11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物，所述11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物是取11
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脱氢血栓烷B2经直链烷基烃醚修饰后再与牛血清蛋白偶联制得；
[0007]所述11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物的结构式为：
[0008][0009]其中，x和y各自为大于等于1的整数；
[0010]BSA为牛血清蛋白；
[0011]所述偶联过程为：
[0012]取11
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脱氢血栓烷B2经直链烷基烃醚修饰，所得修饰化合物溶液置于有机溶剂DMSO中，所得溶液加至活化缓冲液中溶解，以450～550rpm搅拌18～22min后，加入活化剂EDC和活化剂Surfo
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NHS，继续搅拌30min以上，所得活化好的反应液加至含有BSA的偶联缓冲液中，持续搅拌12h以上，然后加入乙醇胺终止反应，所得反应液置于透析袋中，在PBS缓冲液中透析12h以上，即得所述11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物。
[0013]一种11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物包被的磁微粒复合物，所述11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物包被的磁微粒复合物是利用权利要求1中所述的11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物与磁微粒经包被制得；
[0014]所述磁微粒复合物的粒径为100～200μm；
[0015]所述磁微粒为超顺磁性微球；
[0016]所述磁微粒表面所及密度为20.0～50.0μmol/g；
[0017]所述包被的过程为：
[0018]取磁微粒加至活化缓冲液中，以450～550rpm搅拌18～22min，加入活化剂EDC和活化剂Surfo
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NHS，继续搅拌25～35min，得活化好的磁微粒反应液；
[0019]取11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物加至偶联缓冲液中，以500～600rpm搅拌10min以上，加入活化好的磁微粒反应液，继续搅拌3h以上，然后加入酪蛋白钠水溶液封闭剂，继续搅拌2h以上，所得体系经磁力分离器进行固液分离，然后经纯化水洗涤后，即得所述磁微粒复合物。
[0020]一种基于吖啶酯化学发光法检测11
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脱氢血栓烷B2的试剂盒，所述试剂盒中包括利用权利要求2所述的11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物包被的磁微粒复合物及含有抗干扰剂和稳定剂的磷酸盐缓冲液制备的试剂I、试剂II、校准品和质控品。
[0021]进一步的，所述试剂I中含有磁微粒复合物的浓度为0.5～1.0mg/mL。
[0022]进一步的，所述试剂I中的抗干扰剂为苯甲磺酰氟、胃蛋白酶抑制剂、胰蛋白酶抑制剂、亮抑蛋白酶肽及乙二胺四乙酸二钠中的至少一种；
[0023]所述试剂I中的稳定剂为PEG200、PA1080、小牛血清、酪蛋白钠及鱼皮明胶中的至少一种；
[0024]所述的磷酸盐缓冲液摩尔数为100～200mmol/L。
[0025]进一步的，所述试剂盒中还包括利用11
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脱氢血栓烷B2多克隆抗体标记的吖啶酯偶联物和含有稳定剂的磷酸盐缓冲液制备的试剂II。
[0026]进一步的，所述吖啶酯偶联物是利用11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物经过动物免疫后产生的响应于11
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脱氢血栓烷B2
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BSA的11
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脱氢血栓烷B2多克隆抗体，再与吖啶酯反应制得；
[0027]所述吖啶酯偶联物的具体制备方法为：
[0028]利用11
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物，其特征在于，所述11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物是取11
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脱氢血栓烷B2经直链烷基烃醚修饰后再与牛血清蛋白偶联制得；所述11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物的结构式为：其中，x和y各自为大于等于1的整数；BSA为牛血清蛋白。2.一种11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物包被的磁微粒复合物，其特征在于，所述11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物包被的磁微粒复合物是利用权利要求1中所述的11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物与磁微粒经包被制得。3.一种基于吖啶酯化学发光法检测11
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脱氢血栓烷B2的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括利用权利要求2所述的11
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脱氢血栓烷B2
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BSA偶联物包被的磁微粒复合物及含有抗干扰剂和稳定剂的磷酸盐缓冲液制备的试剂I、试剂II、校准品和质控品。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂I中含有磁微粒复合物的浓度为0.5～1.0mg/mL。5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂I中的抗干扰剂为苯甲磺酰氟、胃蛋白酶抑制剂、胰蛋白酶抑制剂、亮抑蛋白酶肽及乙二胺四乙酸二钠中的至少一种；所述试剂I中的稳定剂为PEG200、PA1080、小牛血清、酪蛋白钠及鱼皮明胶中的至少一种；所述的磷酸盐缓冲液摩尔数为100～200mmol/L。6.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括利用11
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脱氢血栓烷B2多克隆抗体标记的吖啶酯偶联物和含有稳定剂的磷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：李新增，高康，俞宏源，
申请(专利权)人：河北艾驰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：