一种重组人血清白蛋白的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种重组人血清白蛋白的纯化方法，具体包括以下步骤：将含有重组人血清白蛋白的毕赤酵母发酵液经过澄清、亲和层析、凝胶过滤层析、热处理、疏水层析和阴离子层析得到重组人血清白蛋白纯品。本发明专利技术方法仅使用了四步层析，简化了工艺步骤，且四步层析所选用的填料均为国产厂家博格隆的填料，大大降低了工艺生产成本，同时保证了重组人血白蛋白的纯化效果，得到的重组人血白蛋白SEC纯度在90％以上，色素杂质的最终含量≤0.04，除杂效果显著。果显著。果显著。

【技术实现步骤摘要】
一种重组人血清白蛋白的纯化方法


[0001]本专利技术涉及蛋白纯化领域，具体涉及一种重组人血清白蛋白的纯化方法。

技术介绍

[0002]人血清白蛋白，又称人血白蛋白，人血白蛋白是血液或血浆中一种主要蛋白成分，占血液的45％～55％，占血浆的70％～80％。人血清白蛋白由585个氨基酸构成，为分子量约66kD的非糖基化蛋白，由肝脏合成，在人体内半衰期约为18
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21天，体内的合成速率约为828mg/kg/day，成年人血液内的人血白蛋白浓度为45g/L左右。人血白蛋白在人体主要作用机制为增加血容量和维持血浆胶体渗透压。正常人体内的血清白蛋白浓度维持在一定范围内，当低于正常水平临界值(30g/L)时，会导致低白蛋白血症，将引起各种疾病，包括肝硬化腹水、严重脓毒症、恶性腹水、透析内低血压等疾病关联的低白蛋白血症等，在临床上，人血清白蛋白被广泛应用于失血创伤、烧伤引起的休克、脑水肿及损伤引起的颅压升高、肝硬化及肾病引起的水肿或腹水、低蛋白血症的防治、新生儿高胆红血症、用于心肺分流术、烧伤的辅助治疗、血液透析的辅助治疗和成人呼吸窘迫综合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人血清白蛋白的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)澄清：将含有重组人血清白蛋白的毕赤酵母发酵液放入离心机进行离心，离心结束后留上清液，对离心结束后的上清液进行除菌过滤得到澄清液；步骤(2)亲和层析：将步骤(1)所得澄清液进行亲和层析，所述澄清液经过稀释后上样，亲和层析填料采用博格隆的Blue Bestarose FF，亲和层析填料的配基为活性蓝3GA；步骤(3)凝胶过滤层析和热处理：将步骤(2)亲和层析结束后所得样品进行凝胶过滤层析，凝胶过滤层析的基架为交联的葡萄糖，凝胶过滤层析选用的填料为Bestdex G
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25M；凝胶过滤层析结束后，对凝胶过滤层析后的样品进行热处理；步骤(4)疏水层析：将步骤(3)热处理结束后所得样品进行疏水层析，疏水层析介质为Pheny Bestarose FF(HS)，疏水层析介质的配基为苯基、丁基或辛基；步骤(5)阴离子层析：将步骤(4)疏水层析结束后的样品进行阴离子层析，阴离子层析填料为DEAE Bestarose FF，阴离子层析填料的配基为二乙基氨基乙基、仲胺或叔胺。2.根据权利要求1所述的一种重组人血清白蛋白的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中离心条件为：离心力为10000
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12000g，离心时间为15
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25min。3.根据权利要求1或2所述的一种重组人血清白蛋白的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中的除菌过滤条件：膜材质为PES，截留分子量为0.22
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0.45μm，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王德朋，王海洋，曹文金，杨学辉，赵晓剑，
申请(专利权)人：苏州百因诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：