【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，具体涉及碱性磷酸酶检测试剂盒。
技术介绍
1、碱性磷酸酶(alp)，也称碱性磷酸酯酶，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶、非组织特异性碱性磷酸酶和胎盘碱性磷酸酶。碱性磷酸酶活性过高或过低与多种疾病相关。例如，分化的结肠癌细胞中碱性磷酸酶的活性会显著升高，被当作结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标。血清中碱性磷酸酯酶的升高，被称作高碱性磷酸酶血症，被认为和恶性胆管阻塞、原发性胆管硬化、原发性硬化胆管炎、肝淋巴瘤和肝肉瘤等肝胆疾病密切相关。血清中碱性磷酸酶活性过低也和一些疾病相关。因此，生物样本中碱性磷酸酶活性的定量检测具有十分重要的医学意义。
2、在基础研究领域，常用的测定alp活性的方法有荧光测定法、化学(生物)发光分析法、电化学分析法及表面增强共振拉曼散射法等。然而，这些方法由于检测过程繁琐以及需要复杂昂贵的科学仪器和专业的操作人员，所以限制了它们的进一步应用。在临床检测中，碱性磷酸酶的测定方法主要有以下几种：β-甘油磷酸钠法、磷酸苯二钠比色法以及磷酸对硝基酚连续监测法。磷酸苯二钠比色法与更早的β-甘油磷酸钠法相比具有较大的进步。磷酸苯二钠比色法水解速度快，故保温时间较短，且该法灵敏度较高，显色稳定，不需去蛋白，操作简单、快速。但与磷酸对硝基酚连续监测法相比，准确度、精密度较低，操作比较繁琐，灵敏度低。
3、现有技术：血清中alp在碱性条件下转移对硝基苯酚磷酸酯(npp)的磷酰基至
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6、但基于目前的研究报道，上述方法无法准确检测出含高苯丙氨酸的血清样本中的碱性磷酸酶活性。苯丙氨酸常用于食品，可添加于焙烤食品中，强化苯丙氨酸的营养作用，还与糖类发生氨基-羧化反应以改善食品香味，并补充人体所需功能性食品氨基酸平衡。l-苯丙氨酸是生产新型保健型甜味剂阿斯巴甜的主要原料。l-苯丙氨酸对人胎盘组织碱性磷酸酶的别构抑制作用；动力学研究证明，苯丙氨酸可以抑制碱性磷酸酶活性的60％。l-苯丙氨酸浓度的改变对酶促反应速度的影响呈s形曲线关系。故现有的磷酸对硝基酚连续监测法，无法准确的测试含有高苯丙氨酸的血清样本。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供碱性磷酸酶检测试剂盒，本专利技术提供了利用苯丙氨酸羟化酶、喋呤和氯化铁消除苯丙氨酸对碱性磷酸酶的抑制作用，从而获得准确测试含有高苯丙氨酸的血清样本的碱性磷酸酶检测试剂盒。
2、本专利技术提供了苯丙氨酸羟化酶、喋呤和氯化铁中的至少一种在制备碱性磷酸酶检测试剂或试剂盒中的应用。
3、l-苯丙氨酸对人胎盘组织碱性磷酸酶的别构抑制作用，且动力学研究证明,l-苯丙氨酸对此酶呈反竞争性抑制作用，其浓度的改变对酶促反应速度的影响呈s形曲线关系，本专利技术通过上述三种组分的协同配合，实现了高苯丙氨酸的血清样本检测碱性磷酸酶活性的功能，从而获得更准确的技术效果。
4、本专利技术提供了试剂组合，包括r1试剂和r2试剂，其中：
5、所述r1试剂包括amp缓冲液、氯化镁、硫酸锌、hedta、氯化铁、喋呤和苯丙氨酸羟化酶，所述amp缓冲液、氯化镁、硫酸锌、hedta、氯化铁和喋呤的摩尔比为(100～1000)：(1～5)：(1～5)：(1～5)：(1～5)：(1～5)；
6、所述r2试剂包括对硝基苯酚磷酸酯。
7、与现有检测试剂相比，本专利技术提供了在原有alp检测试剂的体系下添加的苯丙氨酸羟化酶、喋呤和氯化铁，苯丙氨酸羟化酶在辅酶喋呤的作用下，将苯丙氨酸转化为酪氨酸，从而消除苯丙氨酸对碱性磷酸酶的抑制作用，从而实现了在高苯丙氨酸的血清样本检测碱性磷酸酶活性的功能，且在上述浓度范围内，本专利技术提供的alp检测试剂各组分之间相互配合紧密，从而实现更准确的检测效果。
8、在一些实施例中，所述r1试剂包括0.1～1mol/lamp缓冲液、1～5mmol/l氯化镁、1～5mmol/l硫酸锌、1～5mmol/l hedta、1～5mmol/l氯化铁、1～5mmol/l喋呤和5～10ku/l苯丙氨酸羟化酶；
9、所述r2试剂包括20～100mmol/l对硝基苯酚磷酸酯。
10、与其他试剂组合相比，在上述浓度范围内，所述试剂组合中各组分之间配合紧密，从而实现更准确的检测效果。
11、在另一些实施例中，所述氯化镁的浓度为2～3.5mmol/l。
12、在另一些实施例中，所述喋呤的浓度为3.1～5mmol/l。
13、在一些具体实施例中，所述r1试剂包括0.96mol/l amp缓冲液、2.6mmol/l氯化镁、1.3mmol/l硫酸锌、2.6mmol/l hedta、2mmol/l氯化铁、3.1mmol/l喋呤和5ku/l苯丙氨酸羟化酶；
14、所述r2试剂包括81.6mmol/l对硝基苯酚磷酸酯。
15、在一些具体实施例中，所述r1试剂包括0.96mol/l amp缓冲液、2.6mmol/l氯化镁、1.3mmol/l硫酸锌、2.6mmol/l hedta、2mmol/l氯化铁、4.1mmol/l喋呤和7.5ku/l苯丙氨酸羟化酶；
16、所述r2试剂包括81.6mmol/l对硝基苯酚磷酸酯。
17、在一些具体实施例中，所述r1试剂包括0.96mol/l amp缓冲液、2.6mmol/l氯化镁、1.3mmol/l硫酸锌、2.6mmol/l hedta、3.5mmol/l氯化铁5mmol/l喋呤和10ku/l苯丙氨酸羟化酶；
18、所述r2试剂包括81.6mmol/l对硝基苯酚磷酸酯。
19、实验表明，在上述实施例中，所述试剂组合由于各组分及浓度之间的相互配合，能够更好的消除苯丙氨酸对碱性磷酸酶的抑制作用，更加准确的测定样本中碱性磷酸酶的活性浓度，从而获得更准确的技术效果。
20、本专利技术提供了所述的试剂组合在制备碱性磷酸酶检测试剂或试剂盒中的应用。
21、本专利技术提供了碱性磷酸酶检测试剂或试剂盒，包括所述的试剂组合。
22、本专利技术提供了所述的碱性磷酸酶的检测方法，包括采用所述的碱性磷酸酶检测试剂或试剂盒对样本进行检测。
23、本专利技术提供了苯丙氨酸羟化酶、喋呤和氯化铁在制备检测碱性磷酸酶的试剂中的应用，本专利技术还提供了包含苯丙氨酸羟化酶、喋呤和氯化铁的碱性磷酸酶检测试剂盒。本专利技术的碱性磷酸酶检测试剂盒中，由于苯丙氨酸羟化酶在辅酶喋呤的作用下，将苯丙氨酸转化为酪氨酸，从而消除苯丙氨酸对碱性磷酸本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.苯丙氨酸羟化酶、喋呤和氯化铁中的至少一种在制备碱性磷酸酶检测试剂或试剂盒中的应用。
2.试剂组合，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂，其中：
3.根据权利要求2所述的试剂组合，其特征在于，
4.根据权利要求2或3所述的试剂组合，其特征在于，所述氯化镁的浓度为2～3.5mmol/L。
5.根据权利要求2或3所述的试剂组合，其特征在于，所述喋呤的浓度为3.1～5mmol/L。
6.根据权利要求2～5任一项所述的试剂组合，其特征在于，
7.根据权利要求2～5任一项所述的试剂组合，其特征在于，
8.根据权利要求2～5任一项所述的试剂组合，其特征在于，
9.权利要求1～8任一项所述的试剂组合在制备碱性磷酸酶检测试剂或试剂盒中的应用。
10.碱性磷酸酶检测试剂或试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～8任一项所述的试剂组合。
【技术特征摘要】
1.苯丙氨酸羟化酶、喋呤和氯化铁中的至少一种在制备碱性磷酸酶检测试剂或试剂盒中的应用。
2.试剂组合，其特征在于，包括r1试剂和r2试剂，其中：
3.根据权利要求2所述的试剂组合，其特征在于，
4.根据权利要求2或3所述的试剂组合，其特征在于，所述氯化镁的浓度为2～3.5mmol/l。
5.根据权利要求2或3所述的试剂组合，其特征在于，所述喋呤的浓度为3.1～5mm...
【专利技术属性】
技术研发人员：李扬，
申请(专利权)人：北京安图生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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