链霉亲和素胶乳微球制造技术

本发明专利技术涉及功能高分子改性技术领域，具体涉及链霉亲和素胶乳微球

【技术实现步骤摘要】
链霉亲和素胶乳微球、其制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及功能高分子改性
，具体涉及链霉亲和素胶乳微球
、
其制备方法及应用
。

技术介绍

[0002]胶乳微球是是利用聚合物粒子制造技术生产的聚苯乙烯类胶乳微球，具有不同的粒径大小
、
较高的比表面积
、
可修饰的功能基团等特性
。
因为其独有的特性在免疫诊断学方面有着非常广泛的应用，作为胶乳比浊法等凝集反应的载体，采用乳胶微球可以从血清
、
尿和脑脊液中检测出微量的抗原或者抗体
。
胶乳微球与抗体复合物是体外诊断试剂中不可或缺的一部分，表面修饰为羧基及氨基的胶乳微球应用最为广泛；在胶乳微球包被抗体或抗原过程中，一些项目使用表面修饰为羧基或氨基的胶乳微球进行包被过程中，经常会出现包被不上
、
凝集等现象
。
而利用链霉亲和素
‑
生物素标记免疫技术，将链霉亲和素包被到表面修饰为羧基的胶乳微球上，对抗体或抗原进行生物素标记后，利用链霉亲和素对生物素独特的高亲和力，制备出链霉亲和素胶乳微球与生物素化抗体的复合物
。
然而将链霉亲和素包被到胶乳微球后，生物素化抗体与链霉亲和素胶乳微球结合过程中会出现生物素化抗体结合率低的问题，影响试剂性能
。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供链霉亲和素胶乳微球
、
其制备方法及应用/>。
[0004]本专利技术提供了链霉亲和素胶乳微球的制备方法，其包括以下步骤：
[0005]将活化的乳胶微球溶液和八聚体链霉亲和素进行第一偶联后形成偶联物，所述偶联物与单体链霉素亲和素进行第二偶联后经封闭和洗涤，获得所述链霉素亲和素乳胶微球
。
[0006]进一步的，所述活化包括如下步骤：乳胶微球经
MES
缓冲液处理后与
EDC
溶液反应；
[0007]所述
MES
缓冲液的浓度为
10mM
，
pH
＝
4.5
；
[0008]所述
EDC
溶液的浓度为
20mg/mL
；
[0009]所述乳胶微球为羟基乳胶微球，粒径为
190nm。
[0010]本专利技术所述的制备方法中，
[0011]所述活化的乳胶微球与八聚体链霉素亲和素的质量比为
100
：7；
[0012]所述第一偶联的条件为室温震荡
1h
～
3h
，本专利技术的具体实施例中，为
1h。
[0013]本专利技术所述的制备方法中，
[0014]所述偶联物和单体链霉素亲和素的质量比为
107
：
(1
～
5)
；具体的，优选所述偶联物和单体链霉素亲和素的质量比为
107
：
3。
[0015]所述第二偶联的条件为室温震荡
1h
～
3h
，本专利技术的具体实施例中，为
3h。
[0016]本专利技术所述的制备方法中，
[0017]所述封闭的溶液为赖氨酸溶液，所述赖氨酸溶液的浓度为
5mg/ml
～
20mg/ml
，本专利技术的具体实施例中，为
20mg/ml
；
[0018]所述洗涤的溶液为
PBS。
[0019]本专利技术所述的制备方法中，
[0020]所述第一偶联后还包括离心重悬的步骤；
[0021]所述离心的条件为
15000r/min
，
15min
；
[0022]所述重悬的试剂选自
MES
缓冲液或
PBS
缓冲液；
[0023]所述重悬的条件为超声
3min
，
30
％
W
，超声
5S
间隔
5S。
[0024]本专利技术所述的制备方法与其他制备方法相比较，制得的链霉素亲和素乳胶微球的生物素化抗体及生物素的载量显著提高
。
[0025]本专利技术所述的制备方法制得的链霉素亲和素乳胶微球
。
[0026]本专利技术的一些具体的实施例中，制备了八聚体链霉素亲和素和单体链霉素亲和素共同偶联
、
八聚体链霉素亲和素单独偶联，单体链霉素亲和素单独偶联
、
四聚体链霉素亲和素单独偶联的乳胶微球，其中所述八聚体链霉亲和素购自菲鹏生物，货号为
SA8
，分子量为
120KD
左右；单体链霉亲和素为碧云天重组单体链霉亲和素蛋白，其分子量为
15KD
；四聚体链霉素亲和素为重组链霉亲和素，分子量为
55KD
左右；实验结果表明，八聚体链霉素亲和素和单体链霉素亲和素共同偶联的乳胶微球较其他形式制备的乳胶微球的生物素及生物素化抗体的载量高，检测敏感度和稳定性强，可用于体外诊断中，提高目前诊断试剂盒的检测效果
。
[0027]本专利技术提供了所述的制备方法制得的乳胶微球和
/
或所述的链霉素亲和素乳胶微球在制备免疫检测或诊断产品中的应用
。
[0028]本专利技术提供了免疫检测或诊断的试剂盒，其包括本专利技术所述的制备方法制得的链霉素乳胶微球或本专利技术所述的链霉素亲和素乳胶微球
。
[0029]进一步的，所述试剂盒还包括生物素化抗体
、
标记生物素
、
缓冲液
、
防腐剂
、
稳定剂和
/
或保护剂中的至少一种
。
[0030]本专利技术制备了由八聚体和单体链霉素亲和素同时偶联的乳胶微球，所述乳胶微球用于免疫检测，试验结果表明，其生物素和生物素化抗体的载量显著高于采用单独八聚体
、
单独单体或单独四聚体链霉素亲和素修饰的纳米胶乳微球，灵敏度更高，将其用用于免疫检测领域，具有重要的应用价值
。
附图说明
[0031]图1示八聚体加单体链霉亲和素饱和量；
[0032]图2示八聚体链霉亲和素饱和量；
[0033]图3示四聚体链霉亲和素饱和量；
[0034]图4示单体链霉亲和素饱和量
。
具体实施方式
[0035]本专利技术提供了链霉亲和素胶乳微球
、
其制备方法及应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现
。
特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域
技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术
。
本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
链霉亲和素胶乳微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将活化的乳胶微球溶液和八聚体链霉亲和素进行第一偶联后形成偶联物，所述偶联物与单体链霉素亲和素进行第二偶联后经封闭和洗涤，获得所述链霉素亲和素乳胶微球
。2.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述活化包括如下步骤：乳胶微球经
MES
缓冲液处理后与
EDC
溶液反应；所述
MES
缓冲液的浓度为
10mM
，
pH
＝
4.5
；所述
EDC
溶液的浓度为
20mg/mL
；所述乳胶微球为羟基乳胶微球，粒径为
190nm。3.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述活化的乳胶微球与八聚体链霉素亲和素的质量比为
100
：7；所述第一偶联的条件为室温震荡
1h
～
3h。4.
根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述偶联物和单体链霉素亲和素的质量比为
107
：
(1
～
5)
；所述第二偶联的条件为室温震荡
1h
～
3h。5.
根据权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述封闭的溶液为赖氨酸溶液，所述赖氨酸溶液的浓...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈愿愿，刘春龙，
申请(专利权)人：北京安图生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：