【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测，具体涉及单胺氧化酶(mao)含量检测试剂盒。
技术介绍
1、单胺氧化酶(mao)是一组催化多种单胺类化合物氧化脱氨的酶，广泛分布于肝、肾、胃、小肠和脑等组织。单胺氧化酶(mao)是一类黄素酶，主要在线粒体外膜上分布，作用－ch2nh2基团催化各种单胺类脱胺生成相应的醛，然后进一步氧化成酸；或使醛转化为醇再进一步代谢。血清中mao的活性增加与肝纤维化程度呈正相关，纤维变仅限于汇管区或小叶中心者，其mao活性大致正常；纤维变侵入肝实质内时，mao升高率为30％；汇管和汇管区之间有架桥性纤维化时，则有83％升高；如在假小叶周围有广泛纤维化形成时，则几乎全部均升高，且升高幅度最大，因此mao对亚急性重型肝炎和慢性重型肝炎患者肝纤维化状况和检测有重要的临床意义。血清mao测定有化学比色法、速率法等。
2、现有技术测定血清mao催化苄胺的氧化反应，生成苄醛、过氧化氢和氨，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下与α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，同时转化nadh为nad+，通过检测340nm波长处nadh吸光度的下降速率测定mao活性。
3、由于检测过程中是nadh反应系统，nadh稳定性不好，因此存在试剂稳定性问题；另外，由于mao反应原理中第二步反应底物是nh3，除了第一步反应中由mao催化胺类物质生成的nh3，样本自身也含有一定量的nh3，因此mao的测值很容易受样本中氨干扰的影响。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供单胺氧化酶(mao)
2、本专利技术提供了试剂盒，其包括试剂r1和试剂r2；
3、所述试剂r1包括：缓冲液、表面活性剂、防腐剂、4-氨基安替比林、过氧化物酶和苄胺；
4、所述试剂r2包括：缓冲液、防腐剂和n-乙基-n-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐；
5、所述缓冲液选自pbs缓冲液、tris缓冲液、tapso缓冲液、mpos缓冲液、甘氨酸–盐酸缓冲液或hepes缓冲液中的至少一种；
6、所述表面活性剂选自triton x-100、tween 20、tween 40、tween 60、tween 80、genapol、brij35、peg6000中的至少一种；
7、所述防腐剂选自叠氮化钠、proclin300中的至少一种。
8、进一步的，本专利技术所述的试剂盒中，
9、所述试剂r1包括：20～30mm的hepes缓冲液、体积分数0.1％～0.2％的tritonx-100、1g/l～3g/l的叠氮化钠、0.2mm～0.8mm的4-氨基安替比林、1ku/l～3ku/l过氧化物酶和80mm～100mm苄胺；
10、所述试剂r2包括：20～30mm的hepes缓冲液、1g/l～3g/l的叠氮化钠和2mm～8mm的n-乙基-n-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐。
11、更进一步的，本专利技术所述试剂盒中，
12、所述试剂r1为：25mm的hepes缓冲液、体积分数0.14％的tritonx-100、1g/l的叠氮化钠、0.5mm的4-氨基安替比林、2ku/l过氧化物酶和100mm苄胺；
13、所述试剂r2为：25mm的hepes缓冲液、1g/l的叠氮化钠和5mm的n-乙基-n-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐。
14、常规检测方法通过检测mao催化苄胺的氧化反应中的生成物nh3，以nadh为色原，对mao进行定量，此方法色原nadh不稳定，且难以避免样本本身nh3的干扰，因此检测结果存在不准确的问题；本专利技术检测物为h2o2，不仅避免了样本本身nh3的干扰，且试验结果表明，本专利技术的试验方法与常规检测方法相比较，灵敏度更高、检出限更低、稳定性更好，样本用量更少，更有利于临床样本的检测，并且可提高临床样本的使用效率。
15、本专利技术所述的试剂盒还包括校准品，所述校准品未北京安图mao校准品。
16、本专利技术提供了单胺氧化酶的检测方法，其为利用本专利技术所述的试剂盒对样本进行检测。
17、进一步的，所述的检测方法包括如下步骤：
18、步骤1、
19、样本与试剂r1混合后与试剂r2混合，获得混合液1；
20、校准品与试剂r1混合后与试剂r2混合，获得混合液2；
21、步骤2、获得检测波长下混合液1与混合液2吸光度变化的比值，得出mao浓度；
22、所述检测波长包括：主波长546nm和副波长800nm。
23、所述mao浓度为混合液1与混合液2吸光度变化的比值与校准品浓度的积。
24、所述样本、试剂r1和试剂r2的体积比为6：225：75；
25、所述校准品、试剂r1和试剂r2的体积比为6：225：75；
26、所述样本和标准物质的体积比为1：1。
27、进一步的，本专利技术所述的检测方法，
28、以与试剂r2混合的时间为0min，
29、所述吸光度变化的起始时间为0min，结束时间为7min～10min。
30、本专利技术提供了mao检测试剂盒及检测方法。本专利技术以mao催化苄胺的氧化反应中的产物h2o2为检测目标物，对样本mao进行定量。试验结果表明，本专利技术的试剂盒灵敏度高、检出限低、稳定性好，样本用量少，并且可以有效避免样本中血氨的干扰，在临床检测中具有良好的应用和开发潜力。
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1.试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，
4.根据权利要求1～3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括校准品。
5.单胺氧化酶的检测方法，其特征在于，利用权利要求1～4任一项所述的试剂盒对样本进行检测。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述MAO浓度为混合液1与混合液2吸光度变化的比值与校准品浓度的积。
8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，
9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，
【技术特征摘要】
1.试剂盒，其特征在于，包括试剂r1和试剂r2；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，
4.根据权利要求1～3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括校准品。
5.单胺氧化酶的检测方法，其特征在于，利用权利要求1～4任一项所述的试...
【专利技术属性】
技术研发人员：任娜，
申请(专利权)人：北京安图生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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