【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别涉及用于检测米诺地尔-磺基转移酶活性的检测试剂及检测方法。
技术介绍
1、雄激素性秃发(androgenetic alopecia，aga)是临床上最常见的脱发疾病。作为雄激素性秃发治疗史上具有里程碑意义的外用药米诺地尔，已经在临床使用三十余年。但是大量的临床研究发现，雄激素性秃发患者使用2％米诺地尔溶液治疗半年的有效率通常只有一半，有相当一部分患者经过半年的治疗无明显效果，这不仅打击了患者的治疗信心，延长了患者的治疗时间，还加重了患者的经济负担。因此，在预计长期外用米诺地尔治疗雄激素性秃发的患者用药之前，建立检测患者对米诺地尔的反应性的模型，有着很重大的临床意义。米诺地尔治疗aga的机制虽然未完全明确，但多年的研究已经证实米诺地尔进入毛囊后需要通过磺基转移酶(st)催化成其活性形式——硫酸米诺地尔才能发挥其促进毛发生长的作用，这种特异性作用米诺地尔的磺基转移酶又被称为米诺地尔磺基转移酶(mnx-st)。(米诺地尔)磺基转移酶作为米诺地尔发挥生物学活性的关键酶，检测其活性可以帮助我们了解用药后米诺地尔的转换情况。因此，(米诺地尔)磺基转移酶可以作为预测米诺地尔疗效的理想生物标志物。
2、目前研究将人sults分为4个家族13个亚型，现有研究认为米诺地尔磺基转移酶属于sult1 a1亚型。
3、人体血小板、肝脏、脑和小肠黏膜的磺基转移酶活性水平个体差异性比较大，而血小板中的磺基转移酶活性与人体肝脏、脑和小肠黏膜中相应的磺基转移酶活性有显著的相关性。在人类血小板匀浆液中，磺基转移酶的主
4、st的检测方法有放射活性测定、光度活性测定、荧光活性测定、质谱活性测定，其中光度活性测定的大多数检测方法为监测对硝基苯酚(pnp)的产生，少数检测方法测量2-萘酚硫酸盐化速率，也有报道提到使用亚硫酸盐形成的半胱氨酸进行光度测量。技术方案如图1所示，引用于2012年六月priscilla paul等人表于anal bioanal chem.杂志名为recent advances in sulfotransferase enzyme activity assays的文章。
5、国外安迪(bio-techne)开发的科研用试剂盒则使用磺基转移酶催化3’,5’-二磷酸腺苷硫酸盐(paps)生成pap，使用磷酸酶催化pap生成磷，通过检测p的含量计算磺基转移酶的含量。目前未检索到有注册证的商品化临床使用的相关磺基转移酶试剂盒，意味着，目前国际市场上，只有用于科学研究的磺基转移酶活性检测试剂盒，尚无作为体外诊断使用的试剂盒面世。
6、因此，提供一种可靠的检测米诺地尔-磺基转移酶活性测试剂盒，对于推动在临床上在雄性激素脱发治疗方案选择上的应用具有较大意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供的用于检测米诺地尔-磺基转移酶活性的检测试剂及检测方法，其基于米诺地尔在磺基转移酶作用下的磺基循环反应进行检测，并在传统配方上进一步优化稳定性。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了试剂组合，包括试剂1和试剂2；
4、所述试剂1包括：磷酸氢二钠、3’,5’-二磷酸腺苷硫酸盐、米诺地尔、六水氯化镁和nan3；
5、所述试剂2包括磷酸酶、孔雀绿和磷酸氢二钠。
6、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂组合，包括试剂1和试剂2；
7、所述试剂1包括：
8、
9、
10、所述试剂2包括：
11、磷酸酶 5mg/l；和
12、孔雀绿 30mmol/l；和
13、磷酸氢二钠 100mmol/l。
14、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂组合还包括酶活保护剂；
15、所述酶活保护剂包括甘露醇、海藻糖或脂肪酸中的一种或多种。
16、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂组合中所述甘露醇为10g。
17、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂组合中所述海藻糖为10g。
18、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂组合中所述脂肪酸为5g。
19、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂组合所述试剂1的ph为8。
20、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂组合所述试剂2的ph为8。
21、本专利技术还提供了上述试剂组合在如下任一项中的应用：
22、(1)、检测磺基转移酶活性；
23、(2)、预测或判断米诺地尔治疗的有效性；
24、(3)、制备检测磺基转移酶活性的试剂盒；
25、(4)、制备预测或判断米诺地尔治疗的有效性的试剂盒。
26、本专利技术还提供了试剂盒，包括上述试剂组合，以及可接受的辅料或助剂。
27、本专利技术还提供了检测磺基转移酶活性的方法，其基于上述试剂组合或上述试剂盒检测磺基转移酶活性。
28、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述方法包括如下步骤：
29、步骤(1)：采集发根，将发根浸泡于处理液中，获得浸泡液；
30、步骤(2)：取步骤(1)所述的浸泡液与所述试剂1混合，37℃放置5分钟后与所述试剂2混合，37℃放置3分钟，检测吸光度变化率，分析，获得磺基转移酶活性检测结果。
31、本专利技术还提供了预测或判断米诺地尔治疗的有效性的方法，其基于上述试剂组合或上述试剂盒检测磺基转移酶活性，根据磺基转移酶活性预测或判断米诺地尔治疗的有效性。
32、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述方法包括如下步骤：
33、步骤(1)：采集发根，将发根浸泡于处理液中，获得浸泡液；
34、步骤(2)：取步骤(1)所述的浸泡液与所述试剂1混合，37℃放置5分钟后与所述试剂2混合，37℃放置3分钟，检测吸光度变化率，分析，获得磺基转移酶活性检测结果，根据磺基转移酶活性预测或判断米诺地尔治疗的有效性。
35、本专利技术的试剂盒和方法有如下效果：
36、使用roc曲线进行分析，本专利技术的roc曲线大于等于0.990，说明本专利技术具有诊断价值；
37、4℃实时稳定性数据表明，相比于不添加酶保护剂，在r2试剂中仅添加甘露醇时，能显著提高保护试剂的稳定性，使用海藻糖与脂肪酸的作为稳定剂也有一定的保护作用；本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.试剂组合，其特征在于，包括试剂1和试剂2；
2.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，包括试剂1和试剂2；
3.如权利要求1或2所述的试剂组合，其特征在于，还包括酶活保护剂；
4.如权利要求3所述的试剂组合，其特征在于，包括：
5.如权利要求1至4任一项所述的试剂组合在如下任一项中的应用：
6.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1至4任一项所述的试剂组合，以及可接受的辅料或助剂。
7.检测磺基转移酶活性的方法，其特征在于，基于如权利要求1至4任一项所述的试剂组合或如权利要求6所述的试剂盒检测磺基转移酶活性。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
9.预测或判断米诺地尔治疗的有效性的方法，其特征在于，基于如权利要求1至4任一项所述的试剂组合或如权利要求6所述的试剂盒检测磺基转移酶活性，根据磺基转移酶活性预测或判断米诺地尔治疗的有效性。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
【技术特征摘要】
1.试剂组合，其特征在于，包括试剂1和试剂2；
2.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，包括试剂1和试剂2；
3.如权利要求1或2所述的试剂组合，其特征在于，还包括酶活保护剂；
4.如权利要求3所述的试剂组合，其特征在于，包括：
5.如权利要求1至4任一项所述的试剂组合在如下任一项中的应用：
6.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1至4任一项所述的试剂组合，以及可接受的辅料或助剂。
7....
【专利技术属性】
技术研发人员：高莹莹，康铁军，刘春龙，张静，牛国卿，王志超，
申请(专利权)人：北京安图生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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